生(sheng)(sheng)物芯片類檢測試劑(ji)主要原材料(liao)、生(sheng)(sheng)產工(gong)藝(yi)及(ji)質量
控制(zhi)注冊技術(shu)審查指導原則（報批稿）
一、前言
本指導原則的(de)主要(yao)目的(de)是規范申請(qing)人對生物芯片類檢(jian)測(ce)試(shi)劑的(de)主要(yao)原材(cai)料(liao)研究資料(liao)、生產(chan)工藝及反應體(ti)系(xi)研究資料(liao)的(de)準(zhun)備，并對產(chan)品質量控制提出指導性技(ji)術(shu)要(yao)求。
本指(zhi)導原則系對生物(wu)芯片類檢測試劑(ji)的(de)(de)一般要求，申請人應(ying)依(yi)據產品特性確(que)定其(qi)中的(de)(de)具體內容是否適(shi)用(yong)，若不適(shi)用(yong)，需詳細闡述其(qi)理由及相(xiang)應(ying)的(de)(de)科(ke)學依(yi)據。
本(ben)指導(dao)原則是(shi)對申(shen)請人和審(shen)查人員(yuan)的指導(dao)性文件，但(dan)不(bu)包括注(zhu)冊審(shen)批所涉及(ji)的行(xing)政事項，亦(yi)不(bu)作(zuo)為(wei)法(fa)規(gui)強制執行(xing)，如(ru)果(guo)有能夠滿足相關法(fa)規(gui)要求的其它方法(fa)，也(ye)可以(yi)采用(yong)，但(dan)是(shi)需要提供詳細(xi)的研究資(zi)料和驗(yan)證(zheng)資(zi)料。應在遵循相關法(fa)規(gui)的前提下(xia)使用(yong)本(ben)指導(dao)原則。
本(ben)指導原則是在現行法規和(he)標準體系以及當前(qian)認知(zhi)水平下制訂的，隨著法規和(he)標準的不(bu)斷(duan)完善，以及科學技術的不(bu)斷(duan)發展，本(ben)指導原則相(xiang)關(guan)內(nei)容也(ye)將進行適時(shi)的調整。
二、適用范圍
根據芯(xin)片制(zhi)作的主要(yao)原(yuan)料和(he)方法，生物(wu)芯(xin)片可分(fen)(fen)為(wei)核酸芯(xin)片、蛋(dan)白芯(xin)片、細(xi)胞芯(xin)片、組織芯(xin)片等。本指(zhi)導原(yuan)則是針(zhen)對核酸和(he)蛋(dan)白為(wei)檢測靶分(fen)(fen)子生物(wu)芯(xin)片的注(zhu)冊技術審查(cha)指(zhi)導原(yuan)則，其它(ta)類型靶分(fen)(fen)子檢測的芯(xin)片診(zhen)斷試(shi)劑(ji)可參考本指(zhi)導原(yuan)則。
三、基本要求
（一）基本(ben)原(yuan)則
1.試(shi)劑研制、生(sheng)產(chan)用各種(zhong)原料(liao)、輔料(liao)等(deng)應(ying)制定相應(ying)的質(zhi)量標(biao)準，并(bing)符合有關法(fa)規的要求。
2.試(shi)(shi)劑生(sheng)產(chan)企(qi)業應(ying)(ying)具備(bei)(bei)相應(ying)(ying)的(de)(de)專業技(ji)術人員、儀器設備(bei)(bei)以及適(shi)宜的(de)(de)生(sheng)產(chan)環境，獲得《醫(yi)療器械生(sheng)產(chan)許可(ke)證(zheng)》；同時，應(ying)(ying)按照《體外(wai)診斷(duan)試(shi)(shi)劑生(sheng)產(chan)實施(shi)(shi)細則（試(shi)(shi)行）》的(de)(de)要(yao)求建立相應(ying)(ying)的(de)(de)質量管(guan)理體系，形成文件和記錄，加以實施(shi)(shi)并保持有效運行；還(huan)應(ying)(ying)通(tong)過《體外(wai)診斷(duan)試(shi)(shi)劑生(sheng)產(chan)企(qi)業質量管(guan)理體系考(kao)核(he)評定標準（試(shi)(shi)行）》的(de)(de)考(kao)核(he)。
3.生物(wu)芯片類試劑在研制(zhi)時，應當按照科學、規范的(de)原則組織研發，各反應條件的(de)選擇和(he)確(que)定應符合基本的(de)科學原理(li)。
4.試劑研制、生產過程(cheng)中所用的物(wu)料及工藝，應(ying)充分考慮可能涉(she)及的安(an)全性方面的事宜。
5.生產(chan)和(he)質(zhi)量控制的總(zong)體(ti)(ti)目標：保證(zheng)試劑使用安(an)全(quan)、質(zhi)量穩定、工(gong)藝可控、檢測有(you)效。
（二）原材料(liao)質量控制
1.核酸檢測芯片
核(he)酸(suan)芯片(pian)(pian)(pian)檢測時，從(cong)生物(wu)樣本中提取的(de)核(he)酸(suan)可(ke)(ke)用(yong)熒光(guang)標(biao)(biao)記、金(jin)標(biao)(biao)記和(he)酶標(biao)(biao)記；檢測方法包括(kuo)光(guang)譜學方法和(he)化學顯(xian)色(se)。下(xia)面(mian)為(wei)熒光(guang)標(biao)(biao)記芯片(pian)(pian)(pian)技術指導原則，采用(yong)金(jin)標(biao)(biao)記和(he)酶聯顯(xian)色(se)等的(de)生物(wu)芯片(pian)(pian)(pian)診斷試劑可(ke)(ke)參照核(he)酸(suan)芯片(pian)(pian)(pian)和(he)蛋白(bai)芯片(pian)(pian)(pian)相(xiang)關部分。
（1）主要生物原料
核酸檢測(ce)芯片的(de)主(zhu)要(yao)生(sheng)物(wu)原(yuan)(yuan)料(liao)(liao)(liao)包括(kuo)模板DNA、dNTPs、引物(wu)、探針、標記(ji)物(wu)等。主(zhu)要(yao)生(sheng)物(wu)原(yuan)(yuan)料(liao)(liao)(liao)若為企業自(zi)己生(sheng)產，其工(gong)(gong)藝(yi)必須相對穩定(ding)，企業應按(an)照工(gong)(gong)藝(yi)要(yao)求對這類生(sheng)物(wu)原(yuan)(yuan)料(liao)(liao)(liao)進(jin)行質(zhi)量(liang)(liang)檢驗，以(yi)保證其達(da)到(dao)規定(ding)的(de)質(zhi)量(liang)(liang)標準(zhun)；若購買(mai)，其供(gong)應商要(yao)求相對固定(ding)，不能隨意變更(geng)供(gong)應商，同(tong)時(shi)，供(gong)應商應提供(gong)相應的(de)質(zhi)量(liang)(liang)保證證明和相應的(de)質(zhi)檢報告(gao)，達(da)到(dao)生(sheng)產規定(ding)的(de)質(zhi)量(liang)(liang)標準(zhun)。如果主(zhu)要(yao)原(yuan)(yuan)料(liao)(liao)(liao)（包括(kuo)工(gong)(gong)藝(yi)）或其供(gong)應商有變更(geng)，應依據國(guo)家相關法規的(de)要(yao)求進(jin)行變更(geng)申請。
①模板DNA
重組DNA：經測序驗(yan)證，關鍵堿基或(huo)序列沒有錯誤。1×TE溶解，濃度為100ng/μl以上，-20℃保存。作為陽性參考品(pin)時，其稀(xi)釋度由企業根(gen)據產品(pin)標準確定。
②dNTPs（dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP）
HPLC純(chun)，PCR級(ji)，無DNase、RNase污染，-20℃以下保存。
③引物
生(sheng)產中的引物(wu)原材料為(wei)(wei)凍干(gan)粉，PAGE純或HPLC純。用標準DNA模板擴增，電泳檢測，譜帶單一，大小正(zheng)確(que)，與對照引物(wu)比較，產物(wu)量(liang)一致。符合(he)視為(wei)(wei)合(he)格(ge)引物(wu)，-20℃以(yi)下保存。
④探(tan)針（用于陣列制備(bei)）
重組DNA, 凍干粉（或1×TE溶解液）：至少滿(man)足一(yi)個批次(ci)的用(yong)量，酶切鑒定分析圖譜。
PCR產物(wu)，凍(dong)干粉(fen)（或1×TE溶解液）：至(zhi)少滿足一個(ge)批次的(de)用量，PCR電泳鑒定圖譜。
合成寡(gua)核苷(gan)酸：PAGE純或HPLC純，至(zhi)少滿足(zu)一個批(pi)次的(de)用量，提(ti)供(gong)該產品(pin)的(de)PAGE電泳分(fen)析(xi)圖(tu)譜(pu)(pu)或HPLC分(fen)析(xi)圖(tu)譜(pu)(pu)。
探針序(xu)(xu)列的(de)正確性：應(ying)用(yong)克(ke)隆鑒定(ding)的(de)標準DNA雜交(jiao)鑒定(ding)或測序(xu)(xu)鑒定(ding)。
純度(du)和濃(nong)度(du)檢測：采用電泳(yong)方法(fa)，電泳(yong)圖譜沒有雜帶(dai)，目的(de)條帶(dai)的(de)強度(du)與(yu)已知濃(nong)度(du)的(de)標準(zhun)DNA條帶(dai)進行參比計算其強度(du)。純度(du)較高的(de)DNA，可用紫(zi)外(wai)分光(guang)光(guang)度(du)計進行定(ding)量(liang)。檢驗合格后入庫，避(bi)光(guang)、-20℃以下(xia)保存(cun)。
⑤標記物
含有激發光(guang)波長和發射光(guang)波長介于280~680nm的所有熒光(guang)分子(zi)，HPLC純。
⑥Taq DNA聚(ju)合酶
SDS-PAGE 檢測(ce)，純度＞95%，具有DNA聚合酶活性(xing)，無核(he)酸內切酶活性(xing)；具熱穩定性(xing)，94℃保(bao)溫1小時后仍保(bao)持50％活性(xing)。產品-20℃保(bao)存(cun)。
⑦尿嘧啶糖(tang)基化酶（UNG）
具尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內切酶活性。1U UNG 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模板被降解后不能產生擴增產物。產品-20℃保存。
⑧逆轉錄(lu)（RT） 酶
具有逆(ni)轉錄活(huo)性，無(wu)核(he)酸(suan)內切酶活(huo)性，-20℃保存。
⑨RT-PCR酶(mei)
具逆轉(zhuan)錄(lu)酶(mei)活性和DNA聚合酶(mei)活性，無核酸(suan)內切酶(mei)活性，具熱(re)穩定性，94℃ 1小時(shi)后仍保(bao)持50%活性。產品-20℃保(bao)存。
⑩緩沖液
各類酶(mei)制(zhi)品(pin)(pin)所需的反應(ying)緩沖(chong)液由廠家隨酶(mei)制(zhi)品(pin)(pin)提(ti)供，-20℃保(bao)存。
（2）主要(yao)生(sheng)物輔料
主要(yao)生物(wu)輔料包(bao)括酶(mei)類（蛋(dan)白(bai)酶(mei)、核(he)酸(suan)酶(mei)等）、核(he)酸(suan)提取試(shi)劑、魚(yu)精DNA、封閉用蛋(dan)白(bai)、雜交液等，企業(ye)(ye)應(ying)建立相(xiang)應(ying)的(de)(de)(de)質量(liang)標(biao)準。主要(yao)生物(wu)輔料若為企業(ye)(ye)自己生產（配制），其(qi)工藝(yi)必須(xu)相(xiang)對穩定，并(bing)按(an)照工藝(yi)要(yao)求對這類生物(wu)原料進行質量(liang)檢(jian)驗，以保(bao)證(zheng)其(qi)達到規定的(de)(de)(de)質量(liang)標(biao)準；若購買，其(qi)供應(ying)商要(yao)求相(xiang)對固定，不能隨(sui)意(yi)變(bian)更供應(ying)商，同時，供應(ying)商應(ying)提供相(xiang)應(ying)的(de)(de)(de)質量(liang)保(bao)證(zheng)證(zheng)明和相(xiang)應(ying)的(de)(de)(de)質檢(jian)報(bao)告(gao)，達到生產規定的(de)(de)(de)質量(liang)標(biao)準。
（3）主要(yao)化學原輔(fu)料
化學(xue)原(yuan)材(cai)料的(de)質量標(biao)(biao)準(zhun)參照《中國(guo)生物制品(pin)主要原(yuan)輔(fu)材(cai)料質控標(biao)(biao)準(zhun)（2000年版）》分析純級別(bie)進行檢(jian)驗。主要的(de)檢(jian)測指標(biao)(biao)包(bao)括：溶(rong)液(ye)(ye)外(wai)觀、一(yi)般鹽類檢(jian)測、溶(rong)液(ye)(ye)pH值、溶(rong)解(jie)情況、干燥(zao)失重、熾(chi)灼殘渣等。
主要化(hua)學(xue)原(yuan)材料(liao)的(de)供(gong)應商要求(qiu)相對固(gu)定(ding)，不得隨(sui)意(yi)發(fa)生(sheng)變更。化(hua)學(xue)原(yuan)材料(liao)在購入時，原(yuan)材料(liao)的(de)生(sheng)產商必(bi)須提(ti)供(gong)該批次(ci)化(hua)學(xue)原(yuan)材料(liao)的(de)質(zhi)(zhi)量保證(zheng)材料(liao)和質(zhi)(zhi)檢報告，其質(zhi)(zhi)量標準應達到生(sheng)產所需(xu)的(de)質(zhi)(zhi)量標準。
（4）其他物料
①載玻片
外觀：明亮處用(yong)肉(rou)眼觀察(cha)無(wu)(wu)缺(que)刻，無(wu)(wu)劃傷等。規格按設計要求。
激光(guang)掃(sao)描(miao)儀掃(sao)描(miao)（波長為芯片檢測波長）：包被層基本均勻。
②試管、吸(xi)頭、試劑瓶等
一次性(xing)使用，由生產廠(chang)家提供質(zhi)量保(bao)證(zheng)，達到設計要求。
③其(qi)他：
包括試劑(ji)瓶標簽(qian)、鋁箔袋、襯墊(dian)、可密封塑料袋、說明書、干燥劑(ji)和包裝外盒等，應參照國家食(shi)品藥品監督管理(li)局頒布的(de)《體外診斷試劑(ji)說明書編寫指導原則(ze)》和《醫療器械說明書、標簽(qian)和包裝標識(shi)管理(li)規定》建立相(xiang)應質量(liang)標準。
2.蛋白檢(jian)測芯片
（1）主要生物原料
與生產的(de)產品質(zhi)量最(zui)密(mi)切(qie)相(xiang)(xiang)關(guan)(guan)的(de)生物原(yuan)(yuan)料包(bao)括各種(zhong)天然抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)、重組抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)、單(dan)克(ke)隆杭體、多(duo)克(ke)隆抗(kang)(kang)體以(yi)及多(duo)肽(tai)類生物原(yuan)(yuan)科。這(zhe)類原(yuan)(yuan)料可用(yong)于(yu)點(dian)膜(mo)、標記相(xiang)(xiang)關(guan)(guan)酶(mei)、納米金、光學基團(tuan)及中和反應(ying)用(yong)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)或(huo)抗(kang)(kang)體等(deng)。使用(yong)前應(ying)按照工(gong)(gong)藝(yi)(yi)要(yao)求對這(zhe)類生物原(yuan)(yuan)料進(jin)行(xing)質(zhi)量檢驗(yan)，以(yi)保(bao)證(zheng)其(qi)(qi)達到規(gui)定(ding)的(de)質(zhi)量標準。主要(yao)生物原(yuan)(yuan)料若為(wei)企業自己生產，其(qi)(qi)工(gong)(gong)藝(yi)(yi)必須相(xiang)(xiang)對穩(wen)定(ding)；若購買，其(qi)(qi)供應(ying)商要(yao)求相(xiang)(xiang)對固定(ding)，不能隨意變更(geng)供應(ying)商，如果主要(yao)原(yuan)(yuan)料（包(bao)括工(gong)(gong)藝(yi)(yi)）或(huo)其(qi)(qi)供應(ying)商有變更(geng)，應(ying)依(yi)據(ju)國家相(xiang)(xiang)關(guan)(guan)法規(gui)的(de)要(yao)求變更(geng)申請。
主要生物(wu)原料的常(chang)規(gui)檢驗項目(mu)一般(ban)包括：
① 外觀(guan)
肉眼觀察，大(da)部(bu)分生物(wu)(wu)原料為澄清均一液體，不含異物(wu)(wu)、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其(qi)他顏色雜質；特殊生物(wu)(wu)原料應具(ju)備(bei)相應外觀標準。
② 純(chun)度和分子量
生物(wu)原(yuan)料(liao)經SDS-PAGE 電(dian)泳(yong)(yong)后，利用電(dian)泳(yong)(yong)掃描儀(yi)進(jin)行(xing)分(fen)析(xi)；也可用其他(ta)適宜(yi)的(de)(de)(de)方法，如高效液相(xiang)(xiang)法等進(jin)行(xing)分(fen)析(xi)。根據所(suo)檢測生物(wu)原(yuan)料(liao)的(de)(de)(de)分(fen)子量(liang)選(xuan)擇適宜(yi)聚(ju)丙烯酰胺凝(ning)(ning)膠濃度(du)(du)進(jin)行(xing)電(dian)泳(yong)(yong)。一般(ban)每個電(dian)泳(yong)(yong)道加樣量(liang)為5μg；電(dian)泳(yong)(yong)后的(de)(de)(de)凝(ning)(ning)膠可用考(kao)馬斯亮藍染色或銀染法染色。染色后的(de)(de)(de)凝(ning)(ning)膠用電(dian)泳(yong)(yong)掃描儀(yi)分(fen)析(xi)原(yuan)料(liao)的(de)(de)(de)純(chun)度(du)(du)和分(fen)子量(liang)，純(chun)度(du)(du)應達到相(xiang)(xiang)應的(de)(de)(de)質量(liang)標準，分(fen)子量(liang)大(da)小應在正確的(de)(de)(de)條帶位置。
③ 蛋白濃度
蛋白濃度可通(tong)過Lowry法(fa)、280nm 光吸收法(fa)、雙縮(suo)脲法(fa)或其它適宜方(fang)法(fa)進行檢測(ce)。
④ 效價
效(xiao)價的(de)測定一般(ban)根(gen)據蛋(dan)白含(han)量測定結果，通過倍比稀釋法進行。效(xiao)價應達到規定的(de)要求。
⑤ 功能性實驗
功(gong)能性(xing)實(shi)驗是指生(sheng)物原料(liao)用于試(shi)劑盒(he)實(shi)際生(sheng)產中(zhong)的(de)(de)情況，一般考(kao)查使用該原料(liao)的(de)(de)試(shi)劑的(de)(de)靈(ling)敏度、特(te)異性(xing)和穩定性(xing)等(deng)，并(bing)比較其與上(shang)批(pi)次原料(liao)的(de)(de)相關性(xing)。
（2）主要生物輔料
生(sheng)(sheng)物輔料指的是在生(sheng)(sheng)產(chan)過(guo)程中作為蛋白(bai)(bai)保護(hu)劑用途的一類生(sheng)(sheng)物原料，主要(yao)包括小牛血(xue)清、山羊(yang)血(xue)清、牛血(xue)清白(bai)(bai)蛋白(bai)(bai)和酪蛋白(bai)(bai)等。這些生(sheng)(sheng)物原料的質量(liang)標準應符合(he)《中國(guo)生(sheng)(sheng)物制品主要(yao)原輔材料質控(kong)標準（2000年版）》規(gui)定(ding)的質量(liang)標準要(yao)求，并且要(yao)適合(he)于(yu)企(qi)業(ye)生(sheng)(sheng)產(chan)。
建議作(zuo)以下檢驗：
① 牛(niu)血清或羊血清
外(wai)觀：為淺黃色(se)澄清稍(shao)粘稠的液體，無溶血或異物(wu)
無菌試(shi)驗：將血(xue)清(qing)直(zhi)接37℃放置7天，放在(zai)明亮處觀察，不得出現混濁或沉淀(dian)。
總蛋白(bai)含量：用雙(shuang)縮脲法測定，標準(zhun)為不小于32mg/ml。
球蛋白含量(liang)：取待測(ce)血清1ml，采用(yong)飽和硫酸銨法(fa)進(jin)行(xing)沉(chen)淀。沉(chen)淀溶于0.85%NaCl溶液至1ml，用(yong)Lowry法(fa)測(ce)定蛋白含量(liang)不(bu)能大于2mg/ml。
② 牛血清白(bai)蛋(dan)白(bai)：
外觀：應為淺黃色、黃色或乳白色的(de)凍干粉末，無(wu)吸潮，無(wu)結塊，無(wu)肉(rou)眼可見的(de)其它(ta)雜(za)質顆(ke)粒。
溶解性：將牛血清白(bai)蛋白(bai)配成10%溶液，溶解時(shi)間在18-26℃時(shi)應不大于15分鐘。pＨ值應為6.5~7.1。
總(zong)蛋白(bai)含量：用雙縮(suo)脲法測定，其(qi)標準為不小于干(gan)重的95％。
總(zong)蛋白中的(de)(de)BSA含量(liang)：采用(yong)硝酸纖維素(su)膜電泳法(fa)，其標準為不小(xiao)于總(zong)蛋白含量(liang)的(de)(de)95%。
BSA的凈(jing)含(han)量(liang)：總(zong)蛋(dan)白含(han)量(liang)乘總(zong)蛋(dan)白中的BSA含(han)量(liang)，其標準為不小于90%。
③ 酪(lao)蛋白(bai)：
應符合生產所需的(de)質量標準。
④ 標(biao)記(ji)用(yong)酶(mei)
應(ying)在產(chan)品的(de)(de)質量(liang)標(biao)準中(zhong)明示(shi)所使用(yong)(yong)的(de)(de)標(biao)記用(yong)(yong)酶(mei)(mei)的(de)(de)名稱（如辣根過氧化物酶(mei)(mei)、堿(jian)性(xing)磷酸酶(mei)(mei)等），同時應(ying)根據不同生產(chan)廠(chang)家的(de)(de)檢(jian)驗方法(fa)和(he)質量(liang)標(biao)準進行(xing)檢(jian)驗，酶(mei)(mei)的(de)(de)純度(du)RZ值（OD403nm/OD280nm）應(ying)大于3.0。
對于小牛血(xue)清或(huo)山羊血(xue)清、牛血(xue)清白蛋(dan)白以(yi)及酪蛋(dan)白等，還應進行功能性實(shi)驗，即以(yi)其(qi)為(wei)原(yuan)料配制一定濃度的稀釋液作為(wei)樣品，進行測(ce)定，均不得出現(xian)非(fei)特(te)異性反應。
生物輔料的供(gong)(gong)應(ying)商(shang)同樣要求相對固定，不得隨意變更(geng)供(gong)(gong)應(ying)商(shang)。
（3）化(hua)學原輔料
參照《中國生物制品主要(yao)原(yuan)輔材(cai)料質控(kong)標(biao)準（2000年版）》分析純級(ji)別進(jin)行檢(jian)驗。主要(yao)的(de)檢(jian)測指(zhi)標(biao)包括：溶液外觀、一(yi)般鹽類、溶液pH值、溶解情況、干燥失(shi)重、熾灼殘渣等(deng)。
主(zhu)要化(hua)學(xue)(xue)原(yuan)材料(liao)的供(gong)應(ying)商要求相對(dui)固定，不得隨意發(fa)生變更。化(hua)學(xue)(xue)原(yuan)材料(liao)在購入時，原(yuan)材料(liao)的生產商必須提供(gong)該批次化(hua)學(xue)(xue)原(yuan)材料(liao)的質(zhi)(zhi)量保證材料(liao)和(he)質(zhi)(zhi)檢報告，其質(zhi)(zhi)量標(biao)準應(ying)達到生產所需的質(zhi)(zhi)量標(biao)準。
（4）其他物(wu)料
①基質(zhi)
以(yi)硝(xiao)酸纖(xian)維素膜(mo)為(wei)例：孔徑符合設(she)計(ji)要(yao)求（0.45μm、0.22μm等）、均一(yi)性（厚度及(ji)毛細遷移速度±20％）、尺(chi)寸（與標識吻(wen)合）
②試劑(ji)瓶(ping)和(he)干燥劑(ji)
由生產(chan)廠家(jia)提供(gong)質量保證(zheng)，達到規定要求。
③其(qi)他：說明書、包(bao)裝外盒等
應(ying)(ying)參照國家食品藥(yao)品監督管理局頒布(bu)的《體外(wai)診斷試劑(ji)說(shuo)明書編(bian)寫指(zhi)導原則》和《醫療器械說(shuo)明書、標(biao)簽和包裝標(biao)識管理規定》建立相應(ying)(ying)質量(liang)控制標(biao)準，如數量(liang)、規格等(deng)。
（三(san)）試劑(ji)盒(he)各組分(fen)的生產
生物(wu)芯(xin)片主要包括DNA芯(xin)片、蛋白(bai)芯(xin)片、組(zu)織芯(xin)片和細胞芯(xin)片等。生物(wu)芯(xin)片診斷(duan)試劑產品基本可(ke)分(fen)成二個部分(fen)，一(yi)部分(fen)是芯(xin)片，另一(yi)部分(fen)檢測用工作液。如果有配套(tao)的(de)檢測儀器，還(huan)需(xu)對儀器及處理軟件的(de)應用加以說明。
1.芯片的生(sheng)產
芯片(pian)生(sheng)產的基(ji)本過程包(bao)括探針的獲(huo)取方法，純(chun)化，點(dian)樣(yang)，固定(ding)。
（1）探針獲取
不同芯片(pian)，主要(yao)是探(tan)針不同，生物芯片(pian)的探(tan)針主要(yao)包括(kuo)以下(xia)幾類，其(qi)它探(tan)針可(ke)參考制定相應的技術及質量標準。
① DNA探針的獲取
探針的形(xing)式包括(kuo)PCR產物、克隆DNA、人工(gong)合(he)成DNA片段等；要求有生產程序(xu)和質(zhi)量指(zhi)標及檢測(ce)方(fang)法，要進行純化，有固定的純化程序(xu)。
② 抗原(yuan)的生產
抗(kang)原獲得方法包括細胞培養、從(cong)生物(wu)材料(liao)中(zhong)分離提取(qu)、基因工程(cheng)表達(da)以及合成(cheng)肽等。基因工程(cheng)表達(da)產物(wu)又分為純(chun)抗(kang)原蛋白、融合蛋白等。
③ 抗體
抗(kang)體(ti)分單克隆抗(kang)體(ti)和多(duo)克隆抗(kang)體(ti)。抗(kang)體(ti)制備包括細胞(bao)培(pei)養，動物腹水，基因(yin)工程表達等方式。
④ 細胞(bao)和(he)組織
包括細胞或組(zu)織類型(xing)，固(gu)定(ding)方(fang)法。組(zu)織材料包括固(gu)定(ding)，包埋(mai)，切(qie)片等(deng)。
（2）陣(zhen)列的(de)排列設計
陣列的排(pai)(pai)(pai)列可以是(shi)依(yi)次排(pai)(pai)(pai)列、隨機排(pai)(pai)(pai)列、對角線排(pai)(pai)(pai)列以及其它排(pai)(pai)(pai)列方式(shi)，但(dan)設計時(shi)需考慮重復(fu)次數和對照等因素。
（3）點陣的制作
使用儀器的(de)需要確定型號，程序；手(shou)工制作的(de)也應有標準操作程序。
（4）固定(ding)(ding)：包(bao)括固定(ding)(ding)方式(shi)，固定(ding)(ding)條件等。
應對芯片生產的過程進行相(xiang)應的質量(liang)控制，如(ru)點樣(yang)和固定過程的監控、點樣(yang)均一性(xing)檢驗等。
2.工(gong)作液配制
（1）芯片生(sheng)產所需試(shi)劑，包括(kuo)細胞培(pei)養基，探(tan)針(zhen)制(zhi)(zhi)備(bei)試(shi)劑，陣列制(zhi)(zhi)作和固定(ding)試(shi)劑等。
（2）樣(yang)品處(chu)(chu)理試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)，芯片(pian)檢測(ce)靶(ba)分子(zi)分為核(he)酸(suan)和(he)蛋白質。檢測(ce)核(he)酸(suan)的樣(yang)品處(chu)(chu)理試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)包括臨床取樣(yang)，DNA提取或RNA提取試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)，逆轉錄試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)，PCR擴增試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)，核(he)酸(suan)標記試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)等(deng)；檢測(ce)蛋白的處(chu)(chu)理試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)包括取樣(yang)試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)，蛋白稀釋(shi)液以及特殊(shu)試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)等(deng)。
（3）反應液(ye)(ye)：檢(jian)(jian)測(ce)(ce)核酸時的反應液(ye)(ye)包(bao)括預雜交液(ye)(ye)，雜交液(ye)(ye)，洗脫(tuo)液(ye)(ye)等(deng)；檢(jian)(jian)測(ce)(ce)蛋白時，包(bao)括封閉液(ye)(ye)，抗原(yuan)/抗體反應液(ye)(ye)，洗脫(tuo)液(ye)(ye)，顯色液(ye)(ye)，顯色終止液(ye)(ye)等(deng)。
3.數據(ju)判讀(du)
（1）判斷標準及依據(ju)，包括Cut off值的確定(ding)依據(ju)。
（2）數據判讀(du)(du)方式：人工還是軟件判讀(du)(du)。
（3）如果是軟(ruan)(ruan)件判(pan)讀，應提供軟(ruan)(ruan)件判(pan)斷的(de)科學(xue)依據（包(bao)括(kuo)生物(wu)學(xue)原理、數(shu)據獲取原理和判(pan)斷實驗是否成立的(de)依據）以及(ji)實驗測試(shi)的(de)原始報告（或數(shu)據），并需要說明：
①軟件的來源(yuan)：購買或自己編制，是(shi)否(fou)獲得注冊等。
②軟件(jian)的用途：包括對(dui)數據的分析、存儲、解(jie)讀、含義等。
③軟件(jian)的使用：基(ji)本的使用程序。
(四)半成品質量控制
1.抽樣
檢(jian)驗人員按批號(hao)抽取檢(jian)驗需要數量(liang)的半成品，作好標記，待檢(jian)。
2.半成品(pin)檢驗
利用上一批檢(jian)驗(yan)合格的(de)試(shi)劑盒的(de)相(xiang)應(ying)組分，對本批生產出的(de)各種試(shi)劑盒組分分別進行檢(jian)驗(yan)，檢(jian)驗(yan)結果達到產品的(de)質量標(biao)準。
半(ban)成品(pin)(pin)檢驗，一般使用國(guo)(guo)家標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)(pin)（參考(kao)品(pin)(pin)）或(huo)經(jing)國(guo)(guo)家標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)(pin)（參考(kao)品(pin)(pin)）標(biao)(biao)化后的(de)企業參考(kao)品(pin)(pin)進行(xing)。若某類試劑(ji)沒有國(guo)(guo)家標(biao)(biao)準(zhun)品(pin)(pin)（參考(kao)品(pin)(pin)），則使用企業參考(kao)品(pin)(pin)，企業參考(kao)品(pin)(pin)的(de)制備(bei)應有規(gui)范的(de)質(zhi)(zhi)量(liang)控制程序，以保證產品(pin)(pin)的(de)安全性(xing)、有效(xiao)性(xing)及(ji)質(zhi)(zhi)量(liang)可(ke)控，其質(zhi)(zhi)量(liang)應不低于國(guo)(guo)家食品(pin)(pin)藥(yao)品(pin)(pin)監督管理局已經(jing)批(pi)準(zhun)的(de)同類產品(pin)(pin)的(de)質(zhi)(zhi)量(liang)。
檢(jian)(jian)測(ce)(ce)所抽(chou)樣的(de)半成(cheng)品(pin)(pin)試劑盒的(de)性(xing)(xing)(xing)能，包(bao)括陰/陽性(xing)(xing)(xing)參考品(pin)(pin)的(de)符(fu)合(he)率、靈敏度（最(zui)低(di)檢(jian)(jian)出量(liang)(liang)）、精(jing)密性(xing)(xing)(xing)等，均應達到相應質量(liang)(liang)標準的(de)要求(qiu)。精(jing)密性(xing)(xing)(xing)用比最(zui)低(di)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)限高(gao)一個數量(liang)(liang)級的(de)質控品(pin)(pin)，重復檢(jian)(jian)測(ce)(ce)10次，判定結果一致。對定量(liang)(liang)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)試劑，同(tong)時(shi)應分析其線性(xing)(xing)(xing)相關系數和校準品(pin)(pin)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)結果的(de)準確性(xing)(xing)(xing)。
企業應(ying)該(gai)對(dui)每(mei)一批試(shi)(shi)劑的半成(cheng)品(pin)進行穩定性(xing)測試(shi)(shi)。穩定性(xing)試(shi)(shi)驗(yan)可(ke)在(zai)在(zai)特定溫(wen)度或(huo)特定條件下完成(cheng)。對(dui)蛋(dan)白(bai)芯片，應(ying)完成(cheng)37℃熱穩定性(xing)試(shi)(shi)驗(yan)，試(shi)(shi)驗(yan)結果(guo)應(ying)符合產(chan)品(pin)的質量標準。
(五)成品質量控制
產(chan)品包裝(zhuang)完成后，質檢(jian)人員根據試劑的批號、實(shi)際包裝(zhuang)量、抽(chou)(chou)樣(yang)申請單的要求進行抽(chou)(chou)樣(yang)，同時填寫(xie)抽(chou)(chou)樣(yang)數量和(he)抽(chou)(chou)樣(yang)日期，并(bing)且由抽(chou)(chou)樣(yang)人簽名。抽(chou)(chou)樣(yang)數量應包括檢(jian)驗用數量和(he)留樣(yang)數量。質檢(jian)人員同時應檢(jian)查相關(guan)原始記錄。
每(mei)一批(pi)生物芯片類(lei)診斷試(shi)劑報批(pi)批(pi)量不少于2000人份(fen)。
1.成品(pin)檢驗
一般使用國(guo)家(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)（參(can)考品(pin)(pin)）或(huo)經(jing)國(guo)家(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)（參(can)考品(pin)(pin)）標(biao)化后(hou)的(de)企業(ye)參(can)考品(pin)(pin)進(jin)行(xing)。若某類試劑沒有國(guo)家(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)（參(can)考品(pin)(pin)），則使用企業(ye)參(can)考品(pin)(pin)，企業(ye)參(can)考品(pin)(pin)的(de)制(zhi)備(bei)應有規范的(de)質(zhi)量(liang)(liang)控制(zhi)程序，以保證產品(pin)(pin)的(de)安全性(xing)、有效性(xing)及質(zhi)量(liang)(liang)可控，其(qi)質(zhi)量(liang)(liang)應不低(di)于國(guo)家(jia)食品(pin)(pin)藥(yao)品(pin)(pin)監督管(guan)理局已經(jing)批準(zhun)的(de)同類產品(pin)(pin)的(de)質(zhi)量(liang)(liang)。
2.穩定性(xing)試(shi)驗
試劑批(pi)放行前，應(ying)完成穩(wen)定(ding)性試驗。穩(wen)定(ding)性試驗可在(zai)特定(ding)溫度或特定(ding)條件下完成。對(dui)蛋(dan)白(bai)芯片，每批(pi)試劑批(pi)放行前，應(ying)完成37℃熱穩(wen)定(ding)性試驗，達到相應(ying)的質量(liang)標準。
四、名(ming)詞解釋
生物芯片類檢測試劑：本指導原則所定義的生物芯片檢測試劑是指將多個生物探針（包括DNA片段，寡核苷酸、抗原、抗體，組織，細胞等）按預先設計的排列方式固定在特制的基質（包括玻璃片，尼龍膜，硝酸纖維素膜等）上，用特定的方法提取生物靶分子并進行標記，然后與固定在基質上的生物探針特異性的結合，再用相應的檢測設備（如激光掃描儀、CCD檢測儀等）和分析方法（包括軟件）進行檢測、記錄、分析，實現對生物靶分子的定性或定量檢測的試劑。
五、參考文獻(xian)
1.《中國(guo)生物制品規(gui)程》（2000年版），化學工(gong)業出(chu)版社
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