附件4：
體外診(zhen)斷試(shi)劑(ji)生產(chan)及質量控制技術(shu)指導原則
——金(jin)標類診斷(duan)試劑生(sheng)產及質量(liang)控制技(ji)術指導(dao)原則
（征求意見稿）
本(ben)類(lei)金標試(shi)(shi)劑(ji)(ji)是指(zhi)應(ying)用(yong)(yong)膠體金免疫技(ji)(ji)術(shu)，采用(yong)(yong)膠體金標記的(de)(de)抗(kang)體或抗(kang)原(yuan)(yuan)包(bao)被于(yu)玻璃纖維(wei)膜、聚脂(zhi)膜或其他(ta)載體，將相(xiang)關抗(kang)原(yuan)(yuan)或抗(kang)體固相(xiang)連接在硝酸纖維(wei)膜，應(ying)用(yong)(yong)層析法(fa)的(de)(de)原(yuan)(yuan)理(li)檢測樣品(pin)(pin)中的(de)(de)抗(kang)原(yuan)(yuan)或抗(kang)體的(de)(de)快(kuai)速檢測試(shi)(shi)劑(ji)(ji)。本(ben)技(ji)(ji)術(shu)指(zhi)導(dao)(dao)原(yuan)(yuan)則適(shi)用(yong)(yong)于(yu)第三(san)類(lei)體外診(zhen)(zhen)斷試(shi)(shi)劑(ji)(ji)中金標試(shi)(shi)劑(ji)(ji)的(de)(de)生產及質(zhi)量控制，鑒于(yu)本(ben)類(lei)診(zhen)(zhen)斷試(shi)(shi)劑(ji)(ji)所應(ying)用(yong)(yong)的(de)(de)原(yuan)(yuan)理(li)、方法(fa)、分類(lei)等的(de)(de)復雜性，本(ben)指(zhi)導(dao)(dao)原(yuan)(yuan)則難以(yi)一(yi)一(yi)涵蓋，僅從試(shi)(shi)劑(ji)(ji)的(de)(de)主要原(yuan)(yuan)材料、制備工(gong)藝、半成(cheng)品(pin)(pin)及成(cheng)品(pin)(pin)提出(chu)質(zhi)量控制要點，其他(ta)診(zhen)(zhen)斷試(shi)(shi)劑(ji)(ji)可作參考。國家藥品(pin)(pin)監(jian)督管(guan)理(li)部門(men)將根據(ju)科學技(ji)(ji)術(shu)發展的(de)(de)需要對本(ben)技(ji)(ji)術(shu)指(zhi)導(dao)(dao)原(yuan)(yuan)則適(shi)時組織(zhi)修訂。
一、基本原則
（一）研制、生產用的(de)各種原料、輔料應(ying)(ying)當(dang)制定相應(ying)(ying)的(de)質量指標，并應(ying)(ying)符合有關法(fa)規的(de)要求。
（二）診斷試(shi)劑(ji)的(de)(de)生產(chan)必須(xu)按《藥品(pin)生產(chan)和質量管理規范》組織生產(chan)；企業應具備相應的(de)(de)專業技術(shu)人員，相適應的(de)(de)儀(yi)器設備和生產(chan)環境。
（三）診斷(duan)試劑的研制應當按照(zhao)科學、規范(fan)的原(yuan)則組織研發，各反應條(tiao)件的選(xuan)擇和(he)確定應符合基本的科學原(yuan)理。
（四）研制生產(chan)過程中(zhong)所用的(de)材(cai)料及(ji)工藝，應充分考慮可能涉及(ji)的(de)安全性方面的(de)事宜。
二、原材料質量控制
（一）主要生物原料
與生(sheng)產(chan)的(de)產(chan)品質量最(zui)密切相關的(de)生(sheng)物(wu)(wu)原(yuan)料包括各(ge)種活(huo)性抗(kang)原(yuan)、重組抗(kang)原(yuan)、單(dan)克隆(long)杭體、多克隆(long)抗(kang)體以及多肽類生(sheng)物(wu)(wu)原(yuan)科。這類原(yuan)料可用于(yu)膠體金標記、包被硝酸纖維(wei)膜及用于(yu)制備質控線的(de)抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體等。
1、外觀
肉(rou)眼觀(guan)察，大部分生物(wu)原(yuan)(yuan)料為澄清透明的液體(ti)，不(bu)含(han)異物(wu)，渾濁或(huo)搖不(bu)散的沉(chen)淀(dian)，或(huo)者為白色(se)(se)粉末，不(bu)含(han)有其他顏(yan)色(se)(se)的雜質，特(te)殊生物(wu)原(yuan)(yuan)料應具(ju)備(bei)相應外觀(guan)標準(zhun)。
2、純度和分子量
主要通過SDS-PAGE電(dian)(dian)(dian)泳(yong)和(he)電(dian)(dian)(dian)泳(yong)結(jie)果掃(sao)描(miao)儀進行(xing)檢測(ce)，也可用(yong)(yong)(yong)其他適宜(yi)的(de)(de)方法，如高效液相法等。根據所(suo)檢測(ce)生(sheng)物原料(liao)(liao)的(de)(de)分(fen)子(zi)量(liang)(liang)選擇(ze)適宜(yi)丙烯酸胺凝膠(jiao)(jiao)濃度(du)(du)(du)進行(xing)電(dian)(dian)(dian)泳(yong)。一(yi)(yi)般情(qing)況下，每個電(dian)(dian)(dian)泳(yong)道加(jia)樣量(liang)(liang)為(wei)5mg，同(tong)時用(yong)(yong)(yong)已知(zhi)分(fen)子(zi)量(liang)(liang)標準作(zuo)參照，采用(yong)(yong)(yong)合適的(de)(de)電(dian)(dian)(dian)泳(yong)電(dian)(dian)(dian)流和(he)電(dian)(dian)(dian)泳(yong)時間(jian)；電(dian)(dian)(dian)泳(yong)后(hou)的(de)(de)凝膠(jiao)(jiao)可用(yong)(yong)(yong)考(kao)瑪氏亮藍(lan)染(ran)(ran)色(se)或銀染(ran)(ran)法染(ran)(ran)色(se)。染(ran)(ran)色(se)后(hou)的(de)(de)凝膠(jiao)(jiao)用(yong)(yong)(yong)電(dian)(dian)(dian)泳(yong)掃(sao)描(miao)儀分(fen)析原料(liao)(liao)的(de)(de)純度(du)(du)(du)和(he)分(fen)子(zi)量(liang)(liang)。作(zuo)為(wei)免疫診斷試劑用(yong)(yong)(yong)生(sheng)物原材(cai)料(liao)(liao)，用(yong)(yong)(yong)銀染(ran)(ran)法染(ran)(ran)色(se)后(hou)，純度(du)(du)(du)一(yi)(yi)般都(dou)要大(da)于90％，用(yong)(yong)(yong)考(kao)瑪氏亮藍(lan)染(ran)(ran)色(se)后(hou)，純度(du)(du)(du)一(yi)(yi)般都(dou)要大(da)于95％。
3、蛋白濃度
蛋白(bai)濃度可通過Lowry法、208nm光吸(xi)收法、雙縮脲方法等進行檢(jian)測。
4、效價
效價的測定(ding)一般(ban)根(gen)據蛋白(bai)含量測定(ding)結果通過(guo)倍比(bi)稀(xi)釋法進行，效價應達到規定(ding)的要求。
5、功能性實驗
功能性(xing)實(shi)驗是指標(biao)生物原料用(yong)于(yu)試劑盒試劑實(shi)際生產中的情況，一般考查該原料使用(yong)后的試劑靈(ling)敏(min)度、特異性(xing)和穩定性(xing)。用(yong)于(yu)制備制控線(xian)的抗原或抗體(ti)可采用(yong)其(qi)他適宜(yi)方法(fa)進行功能性(xing)實(shi)驗。
（二）生物輔料
生(sheng)物(wu)輔(fu)(fu)料指的(de)(de)是在生(sheng)產過(guo)程中(zhong)作為蛋白保護劑用(yong)途(tu)的(de)(de)一類(lei)生(sheng)物(wu)原(yuan)(yuan)料，主要包括牛(niu)血清白蛋白材(cai)料等。這(zhe)些生(sheng)物(wu)原(yuan)(yuan)料的(de)(de)質(zhi)量標(biao)準應符合2000年版的(de)(de)《中(zhong)國生(sheng)物(wu)制(zhi)品主要原(yuan)(yuan)輔(fu)(fu)材(cai)料質(zhi)檢標(biao)準》上規(gui)定的(de)(de)標(biao)準要求，并且要適合于企業(ye)的(de)(de)生(sheng)產。
牛血清白蛋白
外觀(guan)：應為淺(qian)黃色凍干粉末，無吸潮，無結塊，無肉眼可見(jian)的(de)其他(ta)雜(za)質(zhi)顆粒。
溶(rong)(rong)(rong)解性：將牛血清白蛋(dan)白配成10％溶(rong)(rong)(rong)液，溶(rong)(rong)(rong)解時(shi)間應不大于15分鐘。1％水(shui)溶(rong)(rong)(rong)液的pH值：6.5~7.1；1％水(shui)溶(rong)(rong)(rong)液OD403值：＜0.15。
總蛋白含量：用(yong)雙縮(suo)脈(mo)方法(fa)來測定，質量標準為≥95％。
硫(liu)酸銨含量：納氏試劑法測定，通過用標(biao)準硫(liu)酸銨曲線可查(cha)出硫(liu)酸銨含量，其標(biao)準為≤0.1%。
尿素(su)(su)含量：采用(yong)(yong)二(er)乙酸一肟(wo)法測(ce)定，通過用(yong)(yong)標準尿素(su)(su)曲線可查出尿素(su)(su)含量，其標準為≤0.1%。
總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電(dian)泳法。其標準為95％。
BSA的凈含量(liang)：總蛋白(bai)含量(liang)乘總蛋白(bai)中的BSA含量(liang)，其標(biao)準為≥90％。
功能性(xing)試驗：10％作為樣本進行酶聯免疫測(ce)定，不得出現特異性(xing)反應。
（三）化學原材料
參照《中國生(sheng)物制(zhi)品(pin)主要原輔材料質控(kong)標準(zhun)》分析純級別檢(jian)(jian)定。主要的(de)檢(jian)(jian)測(ce)指標包括(kuo)一些基本的(de)一般鹽類(lei)檢(jian)(jian)測(ce)、溶液PH值檢(jian)(jian)測(ce)。溶解情況的(de)檢(jian)(jian)測(ce)、干燥失重的(de)檢(jian)(jian)測(ce)。熾灼殘渣等。
1、無機類
主要包括有氯(lv)金酸、氯(lv)化鈉、磷酸氫(qing)二(er)(er)鈉。磷酸二(er)(er)氯(lv)鈉、碳(tan)酸鈉、碳(tan)酸氫(qing)鈉等。
2、有機類
主要包括有枸櫞酸(suan)、枸櫞酸(suan)鈉、蔗(zhe)糖、吐溫20、乙(yi)二胺四乙(yi)酸(suan)二鈉、三羥基氨(an)基甲(jia)烷、氨(an)基吡啉、溴化(hua)鉀、氫(qing)氧化(hua)鈉、葡萄糖、硫酸(suan)銨(an)、硫氫(qing)酸(suan)鉀等。
（四）其他原輔料
1、硝酸纖維素膜
硝酸纖(xian)維素膜應具有厚(hou)度(du)、孔徑大小等要求(qiu)，毛細遷(qian)(qian)移(yi)速度(du)，韌(ren)性(xing)(切割時膜破(po)損引起的(de)廢品率）、均(jun)一性(xing)（厚(hou)度(du)偏差(cha)范圍、毛細遷(qian)(qian)移(yi)速度(du)偏差(cha)范圍）應達到規定的(de)要求(qiu)。
2、玻璃纖維(wei)(wei)或聚酯(zhi)纖維(wei)(wei)膜及濾(lv)紙
玻璃纖維(wei)或(huo)聚酯纖維(wei)膜及(ji)濾紙應具有厚度、毛細遷移速度、重量等(deng)要求(qiu)，均一(yi)性(xing)（厚度偏差范(fan)圍，毛細遷移速度偏差范(fan)圍，重量偏差范(fan)圍）應達到規定的要求(qiu)。
3、玻璃纖維膜
適用于全血檢測的金標試劑，過濾紅細胞所用玻璃纖(xian)維膜或其他(ta)材(cai)料具有(you)不(bu)吸附蛋白質的特點，應具有(you)厚度、孔(kong)徑大小等(deng)要求(qiu)。
4、塑料襯片
塑料襯(chen)片(pian)應具有厚度、硬度（切割時(shi)一次未(wei)能整條切下的百分率(lv)）、尺寸(cun)（與(yu)標識吻合）、粘性（切割時(shi)造成玻璃纖維(wei)與(yu)塑料襯(chen)片(pian)分離的百分率(lv)）等要(yao)求。
5、其他
粘膠紙、鋁(lv)箔袋(dai)、說(shuo)明(ming)書、包裝外盒(he)、瓶子(zi)和(he)干(gan)燥劑等應(ying)建(jian)立相應(ying)質量控制標準。
三、試劑盒的制備
本類試劑的生產包(bao)括膠體(ti)(ti)金(jin)(jin)及(ji)膠體(ti)(ti)金(jin)(jin)標記(ji)抗(kang)原或抗(kang)體(ti)(ti)的制備(bei)，膠體(ti)(ti)金(jin)(jin)標記(ji)的包(bao)被，檢(jian)測線(xian)及(ji)質(zhi)控線(xian)的制備(bei)，膠體(ti)(ti)金(jin)(jin)標記(ji)物、包(bao)被抗(kang)原或抗(kang)體(ti)(ti)等濃(nong)度確定(ding)，各種工作溶液的配置等步驟，并(bing)通過產品的半成品檢(jian)定(ding)和成品檢(jian)定(ding)兩個(ge)質(zhi)控過程來完成。
（一）膠體金標記物的制備(bei)
采(cai)用(yong)枸櫞酸三(san)鈉(na)還原(yuan)法(fa)(fa)或(huo)其他方(fang)法(fa)(fa)制備膠(jiao)(jiao)體(ti)金，膠(jiao)(jiao)體(ti)金顆(ke)粒大小應符合(he)規定(ding)，膠(jiao)(jiao)體(ti)金標記物(wu)在(zai)510~550nm波(bo)長處應有(you)最大吸(xi)收值，置2~8℃保存，應在(zai)規定(ding)的(de)保存期內(nei)使用(yong)。采(cai)用(yong)合(he)適的(de)方(fang)法(fa)(fa)確定(ding)膠(jiao)(jiao)體(ti)金標記物(wu)、包被抗原(yuan)或(huo)抗體(ti)工作(zuo)濃度(du)(du)，將工作(zuo)濃度(du)(du)的(de)膠(jiao)(jiao)體(ti)金標記物(wu)吸(xi)附于玻璃纖(xian)維(wei)或(huo)聚酯纖(xian)維(wei)膜上。
（二）檢(jian)測線(xian)及(ji)質(zhi)控線(xian)的制備
取已確(que)(que)定使用(yong)濃(nong)度的(de)(de)相關抗原或抗體，在硝酸纖維(wei)素膜上制備(bei)檢測(ce)線(xian)，應(ying)用(yong)同樣方法制備(bei)質(zhi)控線(xian)，根據生產(chan)工藝在規(gui)定的(de)(de)溫(wen)度、濕度條件(jian)下(xia)干燥，置規(gui)定的(de)(de)濕度（通(tong)過驗證方法確(que)(que)定相對濕度要求）條件(jian)下(xia)存放。檢測(ce)線(xian)與質(zhi)控線(xian)應(ying)具(ju)有間隔距離要求，應(ying)對所用(yong)的(de)(de)金標(biao)記用(yong)玻璃纖維(wei)及(ji)硝酸纖維(wei)素膜等(deng)進行質(zhi)量檢測(ce)，如尺寸(cun)、外觀、包(bao)裝及(ji)吸附性(xing)能(neng)等(deng)，并記錄批號、數目、標(biao)識，不(bu)(bu)同批號的(de)(de)玻璃纖維(wei)及(ji)硝酸纖維(wei)素膜應(ying)當不(bu)(bu)要混用(yong)了。
（三）貼膜(mo)、切割、裝袋
貼膜、切割(ge)及裝袋應(ying)在具有濕(shi)度(du)(du)(du)（通過驗(yan)證方法確(que)定相對濕(shi)度(du)(du)(du)要求(qiu)）要求(qiu)條(tiao)(tiao)件下操作，切割(ge)的膜條(tiao)(tiao)應(ying)有寬度(du)(du)(du)要求(qiu)。
四、質量控制
用(yong)于半成品(pin)及成品(pin)質(zhi)量控(kong)制的質(zhi)控(kong)品(pin)包括靈敏度、特異性(xing)、均一性(xing)等指標，如具有(you)國家標準品(pin)或參考品(pin)的產(chan)品(pin)應使用(yong)國家標準品(pin)（參考品(pin)）或經(jing)標化質(zhi)控(kong)品(pin)進行檢定(ding)。
（一）半成品質控品
1、半成品抽樣
檢(jian)驗(yan)人(ren)員(yuan)按批號抽取(qu)規定數量的(de)半成品，作號標記，待檢(jian)。
2、半成品檢定
對所抽樣(yang)的半成品(pin)做靈敏(min)度、特異性、均一性等試劑盒性能方面的檢測，應(ying)符合(he)質量標準。
（二）成品質控品
1、物理檢查
應(ying)(ying)進(jin)行(xing)(xing)外觀是否平整，材料附著(zhu)是否牢固，液體移(yi)行(xing)(xing)速度(du)，膜條寬度(du)等(deng)物(wu)理檢查(cha)，應(ying)(ying)符合質量(liang)標準。
2、性能方面的檢測
靈敏度、特(te)異性、均一性等試劑盒性能方面的檢測，應符(fu)合(he)質(zhi)量標準。
全國服務熱線：
