體外診斷試(shi)劑(ji)分析(xi)性能評估（準確度-方法學比對）指導原則
一、前言
準(zhun)(zhun)確度評估資(zi)料是(shi)評價擬上(shang)市產(chan)品有效性的重(zhong)要依據(ju)，也是(shi)產(chan)品注(zhu)冊所需的重(zhong)要申報資(zi)料之(zhi)一。定量(liang)檢測方(fang)法的方(fang)法學比對試驗是(shi)評估準(zhun)(zhun)確度的方(fang)法之(zhi)一，可以(yi)與參考方(fang)法或臨床(chuang)公認質量(liang)較(jiao)好的已(yi)上(shang)市產(chan)品進(jin)行比對。
本指導(dao)原則基于國家食品藥品監督(du)管理局《體外診斷試(shi)(shi)劑注(zhu)冊管理辦法(fa)(fa)（試(shi)(shi)行(xing)）》的有關(guan)要求(qiu)(qiu)，參考CLSI有關(guan)標(biao)準(zhun)(zhun)，對(dui)(dui)(dui)采(cai)用方法(fa)(fa)學比對(dui)(dui)(dui)進(jin)(jin)行(xing)準(zhun)(zhun)確度(du)(du)評(ping)估(gu)的實(shi)驗方法(fa)(fa)和(he)數據處理方法(fa)(fa)進(jin)(jin)行(xing)了原則性要求(qiu)(qiu)。其目的是為生產企業采(cai)用方法(fa)(fa)學比對(dui)(dui)(dui)進(jin)(jin)行(xing)準(zhun)(zhun)確度(du)(du)評(ping)估(gu)并準(zhun)(zhun)備準(zhun)(zhun)確度(du)(du)評(ping)估(gu)資(zi)料提(ti)供原則性指導(dao)，也為注(zhu)冊管理部(bu)門(men)審(shen)核該部(bu)分(fen)分(fen)析性能(neng)評(ping)估(gu)資(zi)料提(ti)供技術參考。
由于體外診(zhen)斷試(shi)劑產(chan)品(pin)發展(zhan)速度快、專業(ye)跨度大，國家食品(pin)藥品(pin)監督管理局將根據(ju)體外診(zhen)斷試(shi)劑發展(zhan)的需要，適時(shi)對本指導原(yuan)則(ze)進(jin)行(xing)修訂。
二、適用范(fan)圍(wei)
本(ben)(ben)指導(dao)原則(ze)適用(yong)(yong)于(yu)首(shou)次(ci)申請注冊、申請許可(ke)事項變更的(de)(de)(de)用(yong)(yong)于(yu)定量檢測的(de)(de)(de)體(ti)外診(zhen)斷產品(pin)(pin)。因體(ti)外診(zhen)斷產品(pin)(pin)評(ping)(ping)價是將儀器、試劑、質控(kong)品(pin)(pin)、校準品(pin)(pin)等(deng)作為一個(ge)系(xi)統(tong)進(jin)(jin)行(xing)評(ping)(ping)價，因此方法(fa)學比對的(de)(de)(de)評(ping)(ping)價采用(yong)(yong)系(xi)統(tong)的(de)(de)(de)概念(nian)進(jin)(jin)行(xing)描述。如特殊(shu)產品(pin)(pin)不適用(yong)(yong)于(yu)本(ben)(ben)指導(dao)原則(ze)，可(ke)進(jin)(jin)行(xing)詳細說明(ming)并采用(yong)(yong)適當的(de)(de)(de)方法(fa)進(jin)(jin)行(xing)準確(que)度評(ping)(ping)價。
三、基本要求
（一）方法學比對實(shi)驗的基本(ben)要(yao)求
1.操作(zuo)者應熟(shu)悉待評價系(xi)統和(he)比對(dui)系(xi)統的操作(zuo)。
2.編寫系統(tong)標準(zhun)操作(zuo)規(gui)程，其中包括校準(zhun)程序和室(shi)內質控程序，采用合(he)適的校準(zhun)品、質控品并保持(chi)儀器處于正(zheng)常狀態。
3.比對系統的選擇
比對系統應具有以下條件：
（1）具有比待評(ping)價系統更好(hao)的精密(mi)度(du)。
（2）同待評價(jia)系統(tong)檢測結果具有(you)相(xiang)同的單位。
（3）如有(you)參(can)(can)考方法應(ying)具有(you)與(yu)參(can)(can)考方法已知的偏差(cha)。
比對系統應該選擇(ze)正(zheng)確性經過驗(yan)證(zheng)的系統，根據實(shi)際(ji)條件，選擇(ze)的順序如下：參(can)考方法、原裝系統、配套系統、經過驗(yan)證(zheng)的非(fei)配套系統。
4.待評價系統的處理
進(jin)(jin)行方(fang)法(fa)學(xue)對比實(shi)驗(yan)前，應該對待評價系統(tong)進(jin)(jin)行初步評價，并(bing)(bing)且(qie)對待評價系統(tong)進(jin)(jin)行精(jing)密度(du)及線性的評價（參考相關標準），只有在以(yi)上評價完(wan)成(cheng)并(bing)(bing)且(qie)符合(he)相關標準要求(qiu)后，才可進(jin)(jin)行方(fang)法(fa)學(xue)對比實(shi)驗(yan)。
（二）方(fang)法學比對實驗的評估及(ji)數據處理方(fang)法
1.實驗(yan)樣本的基本要求
（1）按照(zhao)實(shi)驗對樣本(ben)的要求收集處(chu)理病人(ren)樣本(ben)，樣本(ben)貯存時(shi)間及(ji)條(tiao)件由被測組分的穩定性而定，盡可能避免使用貯存的樣本(ben)。
（2）樣本(ben)(ben)應(ying)來自于不同患(huan)(huan)者，并且此患(huan)(huan)者所患(huan)(huan)疾病對于被(bei)測組分(fen)的影響應(ying)該是已知的，樣本(ben)(ben)不應(ying)含(han)有(you)干擾此方法的組分(fen)。
（3）樣(yang)本濃(nong)度應在(zai)方法的(de)線(xian)性范圍內，并覆蓋(gai)醫學決定(ding)水平。通常基(ji)本從線(xian)性范圍的(de)低(di)限到線(xian)性范圍的(de)高限（應至少有50％的(de)樣(yang)本在(zai)參考(kao)范圍以外(wai)，但在(zai)線(xian)性范圍內）。分(fen)析樣(yang)本的(de)濃(nong)度應盡(jin)可能(neng)在(zai)線(xian)性范圍內均(jun)勻分(fen)布。商品質(zhi)控(kong)物(wu)或者校(xiao)準物(wu)可能(neng)存在(zai)基(ji)質(zhi)效應，應避免使用。
2.實驗過(guo)程
（1）每天選擇8個臨床患者樣(yang)本，按(an)1到8的順序編號。用兩(liang)種方法同(tong)時進(jin)行實驗，按(an)照1，2，3，4，5，6，7，8，8，7，6，5，4，3，2，1的樣(yang)本順序進(jin)行測定(ding)。
（2）以(yi)上實(shi)驗至(zhi)少重復5天，即至(zhi)少分析40個(ge)不(bu)同的臨(lin)床患(huan)者樣本。每天實(shi)驗必(bi)須進行校(xiao)準和室(shi)內質(zhi)控(kong)，只有(you)在室(shi)內質(zhi)控(kong)合(he)格的情況下，當天的實(shi)驗室(shi)數據(ju)才(cai)有(you)效。
3.數據(ju)處理及結果報告(gao)
（1）記錄測(ce)定結果（Xij和Yij），
Xij 為比對(dui)系統測定值
Yij為待評價(jia)系(xi)統測(ce)定值(zhi)
i為(wei)測定樣本的序號（1、2、3…40）
j為同(tong)一樣本同(tong)一天測(ce)定的(de)次序（1、2）
（2） 計算每個(ge)樣(yang)本測定(ding)(ding)(ding)的均(jun)(jun)值(zhi)（和），樣(yang)本重復測定(ding)(ding)(ding)間差值(zhi)的絕對值(zhi)（DXi 和DYi）及兩種(zhong)方法測定(ding)(ding)(ding)結果間的均(jun)(jun)值(zhi)差值(zhi)（-）。相關實驗記錄(lu)見表(biao)1
表1
比對系統 | 待評價系統 | ||||||
樣本編號 i | Xi1 | Xi2 | DXi | Yi1 | Yi2 | DYi | |
1 | |||||||
2 | |||||||
3 | |||||||
4 | |||||||
┆ | |||||||
40 | |||||||
注：i＝1、2┄40。
＝
=
DXi=│-│
DYi=│-│
（3）以(yi)對作(zuo)散點(dian)圖。
（4）以（-）對做(zuo)偏倚圖(tu)。
（5）以（Yij-Xij）對(dui)做(zuo)偏倚圖。
（6）檢查批內離群點：計(ji)算樣(yang)本重復測定(ding)間差值（DXi 和DYi）的平均(jun)數(shu)，
=
=
樣本重復測(ce)定間差值超出(chu)該平均數(shu)4倍時(shi)，則(ze)判斷為離(li)群點，如離(li)群點超過1個時(shi)，整組(zu)數(shu)據應舍棄，尋找(zhao)原因后(hou)重新進(jin)行評價。如離(li)群點為1個，可以補(bu)充數(shu)據后(hou)重新進(jin)行統計。
（7）檢查批間離(li)(li)(li)群(qun)點：計(ji)算(suan)兩種(zhong)方(fang)法(fa)(fa)測定結果間均(jun)值(zhi)差值(zhi)(│-│)的平(ping)均(jun)數(shu)，如(ru)兩種(zhong)方(fang)法(fa)(fa)測定結果間均(jun)值(zhi)差值(zhi)超出該(gai)平(ping)均(jun)數(shu)4倍時(shi)，則判斷該(gai)樣本為(wei)離(li)(li)(li)群(qun)點，如(ru)離(li)(li)(li)群(qun)點超過1個時(shi)，整組數(shu)據(ju)應舍棄，尋找原(yuan)因后重新(xin)進行(xing)評價(jia)。如(ru)離(li)(li)(li)群(qun)點為(wei)1個，可以補充數(shu)據(ju)后重新(xin)進行(xing)統計(ji)。
（8）相關系(xi)數(shu)計算：利用(yong)所有樣本雙份測定值進行相關系(xi)數(shu)計算，如果≥0.975(或2≥0.95)，則(ze)認為選擇的(de)數(shu)據范圍適(shi)合(he)，數(shu)據滿足(zu)要求(qiu)。該分析的(de)誤差(cha)可以(yi)(yi)由數(shu)據范圍給以(yi)(yi)適(shi)當(dang)補(bu)償，并且可以(yi)(yi)采(cai)用(yong)簡(jian)單的(de)線性回歸來(lai)評價斜(xie)率和截(jie)距。
如(ru)果(guo)r2<0.95，那么必須通(tong)過分析(xi)另(ling)外一些樣(yang)品以擴大數據(ju)范圍，然(ran)(ran)后再檢查全部數據(ju)系列，如(ru)仍然(ran)(ran)r2<0.95，則應尋找待評價方(fang)法存在的缺陷，糾正后重新進行試(shi)驗。
對(dui)于某些免(mian)疫(yi)項目，可適(shi)當放寬標準，原則上r2≥0.90，則認為數(shu)據(ju)范(fan)圍適(shi)合，數(shu)據(ju)滿足要求(qiu)。
（9）回歸計算(suan)：利用所有(you)樣本雙份測定的(de)有(you)效數(shu)據，計算(suan)兩個方(fang)法間的(de)線性回歸方(fang)程：Y= bX＋a.
（10）偏差(cha)(cha)估計(ji)：在醫學決(jue)定水平，利用回(hui)歸方(fang)程計(ji)算預期偏差(cha)(cha),預期偏差(cha)(cha)Bx=a+(b-1)X,相對偏差(cha)(cha)=Bx/X
（11）結果(guo)評(ping)估：結果(guo)至少應滿足(zu)相關國(guo)際及國(guo)家標準，同時(shi)滿足(zu)臨床需求。
四、其它(ta)應注(zhu)意(yi)的問(wen)題
（一）采用的患者樣本對(dui)于(yu)被(bei)測(ce)組分的影響應該是已知的，樣本不應含有干擾此檢測(ce)方法的組分。
（二）樣本(ben)貯(zhu)存時間及條件由被測組(zu)分的穩定性而定，盡可能避免使用貯(zhu)存的樣本(ben)。
（三(san)）實驗(yan)前必須(xu)對待評價(jia)系統進行(xing)(xing)精(jing)密度(du)及線性的評價(jia)，評價(jia)合(he)格后方(fang)可進行(xing)(xing)實驗(yan)。
五、名詞解釋(shi)
（一）待評價系統(tong)：擬進行性能(neng)評估(gu)的產品。
（二）比對系統：參(can)考方法(fa)（系統）或(huo)臨床公認(ren)質量較好(hao)的已上市產(chan)品。
六、參考(kao)文獻：
EP9-A2: Method comparison and bias estimation using patient samples; Approved Guideline-Second Edition.
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