體外診斷試劑分(fen)析性能評估(gu)（準確度-回收實驗）
指導原則
一、前(qian)言
準確(que)度評(ping)(ping)估資(zi)料(liao)是(shi)評(ping)(ping)價擬上市產(chan)品有效性(xing)的(de)(de)重要(yao)依據(ju)，也是(shi)產(chan)品注(zhu)冊所需的(de)(de)重要(yao)申報(bao)資(zi)料(liao)之一(yi)。定量檢(jian)測(ce)方(fang)(fang)法的(de)(de)回收實(shi)驗(yan)是(shi)評(ping)(ping)估準確(que)度的(de)(de)方(fang)(fang)法之一(yi)，用(yong)于評(ping)(ping)估定量檢(jian)測(ce)方(fang)(fang)法準確(que)測(ce)定待測(ce)分(fen)析(xi)物的(de)(de)能力，結果用(yong)回收率(lv)表示。
本指導原(yuan)則基于國(guo)家食品藥(yao)品監督管理(li)局(ju)《體(ti)外診斷試(shi)劑注(zhu)冊管理(li)辦法(fa)（試(shi)行(xing)(xing)）》的(de)有(you)關要(yao)求，參考有(you)關標準，對采用(yong)回收實驗(yan)進行(xing)(xing)準確度評(ping)(ping)(ping)估(gu)的(de)實驗(yan)方法(fa)和數據處理(li)方法(fa)進行(xing)(xing)了(le)原(yuan)則性(xing)要(yao)求。其目的(de)是為生(sheng)產(chan)企(qi)業采用(yong)回收實驗(yan)方法(fa)進行(xing)(xing)準確度評(ping)(ping)(ping)估(gu)并準備準確度評(ping)(ping)(ping)估(gu)資料提供原(yuan)則性(xing)指導，也為注(zhu)冊管理(li)部(bu)(bu)門(men)審核該(gai)部(bu)(bu)分分析性(xing)能評(ping)(ping)(ping)估(gu)資料提供技術參考。
由于體(ti)外(wai)診斷(duan)試劑產品(pin)發展(zhan)(zhan)速度快、專業跨度大，國家食品(pin)藥(yao)品(pin)監督管(guan)理局將根據(ju)體(ti)外(wai)診斷(duan)試劑發展(zhan)(zhan)的(de)需要(yao)，適(shi)時對本指導(dao)原則(ze)進行修訂。
二、適用范圍
本指(zhi)導原則適用(yong)于首次(ci)申請(qing)注冊(ce)、申請(qing)許可(ke)事項變更的(de)(de)用(yong)于定量檢測的(de)(de)體外診斷產品(pin)。因(yin)體外診斷產品(pin)評(ping)價(jia)是將儀器、試(shi)劑(ji)、質控品(pin)、校準品(pin)等作為一個系統(tong)進行(xing)評(ping)價(jia)，因(yin)此回(hui)收實驗的(de)(de)評(ping)價(jia)采(cai)用(yong)系統(tong)的(de)(de)概念進行(xing)描(miao)述。如特殊產品(pin)不適用(yong)于本指(zhi)導原則，可(ke)進行(xing)詳細說明并采(cai)用(yong)適當(dang)的(de)(de)方法(fa)進行(xing)準確度評(ping)價(jia)。
三、基本要求
（一）回收實(shi)驗的基(ji)本要(yao)求
1.操作(zuo)者應熟悉待評價(jia)系統的操作(zuo)。
2.編寫系統標準操(cao)作規程，其中包括校準程序(xu)(xu)和室內質(zhi)控(kong)程序(xu)(xu)，采用合適的校準品、質(zhi)控(kong)品并保持系統處(chu)于正常(chang)狀態。
3.待評價系(xi)統的處理(li)
進(jin)行(xing)回收實驗前，應該(gai)對待評(ping)價(jia)(jia)系(xi)統進(jin)行(xing)初步評(ping)價(jia)(jia)，并(bing)且對待評(ping)價(jia)(jia)系(xi)統進(jin)行(xing)精密度及線(xian)性(xing)評(ping)價(jia)(jia)（參考相關(guan)標準），只有在以上評(ping)價(jia)(jia)完成并(bing)且符合相關(guan)標準要求(qiu)后(hou)，才可進(jin)行(xing)回收實驗。
（二）回收(shou)實驗的評(ping)估(gu)及數據(ju)處理方法
1.實驗樣本的基本要求和制備方法(fa)
（1）選擇合適(shi)濃度(du)的(de)常規檢測樣本，分為體(ti)積相同的(de)3-4份。
（2）在其中(zhong)2-3份樣(yang)本(ben)中(zhong)加(jia)入(ru)不(bu)同(tong)濃度相(xiang)同(tong)體(ti)(ti)積(ji)的(de)待測物標準液(ye)制(zhi)備待回收(shou)分析樣(yang)本(ben)，加(jia)入(ru)體(ti)(ti)積(ji)小于原體(ti)(ti)積(ji)的(de)10%，制(zhi)成2-3個不(bu)同(tong)加(jia)入(ru)濃度的(de)待回收(shou)分析樣(yang)本(ben)，計算加(jia)入(ru)的(de)待測物的(de)濃度。
（3）在(zai)另一份樣本中加(jia)入同(tong)樣體積的無待測物的溶劑，制成基礎樣本。
2.實驗過程(cheng)
用待(dai)評價系統(tong)對(dui)待(dai)回收分析(xi)樣本和基礎(chu)樣本進(jin)行(xing)測定，通(tong)常對(dui)樣本進(jin)行(xing)3次重復測定，計(ji)算均值(zhi)，取(qu)其均值(zhi)進(jin)行(xing)下(xia)述計(ji)算。
3.數據(ju)處理及(ji)結果報告
（1）加入(ru)濃度n=標準液濃度n×[標準液加入(ru)體積/(樣本體積+標準液體積)]
（2）計算回收(shou)率：
回收(shou)率n =
（3）計算平均回(hui)收率：
平均回收率 =
（4）計(ji)算(suan)每個(ge)樣本回(hui)(hui)收率與平均回(hui)(hui)收率的(de)差(cha)值：
每個樣本(ben)回(hui)收(shou)(shou)率(lv)(lv)與平均(jun)回(hui)收(shou)(shou)率(lv)(lv)的(de)差值＝回(hui)收(shou)(shou)率(lv)(lv)n－平均(jun)回(hui)收(shou)(shou)率(lv)(lv)；
如差(cha)值超過±10%，應查找(zhao)原因(yin)并糾正，重新進行評估(gu)。
（5）計(ji)算(suan)比例系統誤(wu)差：
比(bi)例系統誤差(cha) = |100% - 平均回收率|
（6）結(jie)果評(ping)估：
結(jie)果至少應(ying)滿(man)足(zu)相關國(guo)際及國(guo)家標準(zhun)，同時滿(man)足(zu)臨(lin)床(chuang)需求。
4.范例——某(mou)法測定血(xue)清(qing)葡萄糖回(hui)收率
（1）樣本制備：
①基礎樣本血清：血清1ml（葡萄糖濃度5.5mmol/L）+蒸(zheng)餾水0.1ml;
基(ji)礎樣本濃度＝5.5/(1+0.1)=5 mmol/L
②回收樣本1:血(xue)清1ml+0.1ml葡(pu)萄(tao)糖水溶液(ye)（濃度22mmol/L）;
③回(hui)收(shou)樣本2：血(xue)清1ml+0.1ml葡萄糖(tang)水溶液（濃度55mmol/L）；
（2）計算加入濃度：
加(jia)入(ru)濃度(du)1＝22×[0.1/(0.1＋1.0)]＝2mmol/L
加(jia)入濃(nong)度2＝55×[0.1/(0.1＋1.0)]＝5mmol/L
（3）采(cai)用待評(ping)價(jia)系統，按照從低到(dao)高(gao)的濃度順序，每(mei)個(ge)樣本測定3次，取平(ping)均值，填(tian)入表1
表1
測定濃度mmol/L | 加入濃度mmol/L | 回收濃度mmol/L | 回收率% | |
基礎樣本 | 5.00 | |||
分析樣本1 | 7.06 | 2.00 | 2.06 | 103 |
分析樣本2 | 9.95 | 5.00 | 4.95 | 99 |
回收濃(nong)度1＝7.06-5＝2.06mmol/L
回收濃(nong)度2＝9.95-5＝4.95mmol/L
回收率1＝＝103％
回收率(lv)2＝＝99％
（4）計算(suan)平(ping)均回收(shou)率(lv)：平(ping)均回收(shou)率(lv) = = 101%。
（5）計(ji)算每個樣本回收(shou)率(lv)與平均(jun)回收(shou)率(lv)的差值：
分析樣本1:103％－101％＝2％
分(fen)析樣(yang)本2：99％－101％＝－2％
兩個樣本回收率與平均回收率的差值小于±10%，
（6）計(ji)算比例(li)系統誤差：
比例系統誤(wu)差 = ;|100% - 101%| = 1%
（7）結(jie)果評估：1% （CLIA 88）, 該方(fang)法的(de)回收實驗（準(zhun)確度）可接受(shou)。
四、其它應注意的問題(ti)：
（一）加入體(ti)積(ji)：加入的(de)待(dai)測物標準(zhun)液體(ti)積(ji)一般在樣(yang)本體(ti)積(ji)的(de)10%以內，如果高濃度的(de)待(dai)測物標準(zhun)液不(bu)易(yi)得(de)到, 加入體(ti)積(ji)亦不(bu)得(de)超過原樣(yang)本體(ti)積(ji)的(de)20%。
加入(ru)的待測物標準(zhun)液體積量不(bu)應影(ying)響樣(yang)本基質；并(bing)且保證在加樣(yang)過程中的取(qu)樣(yang)準(zhun)確度。
（二）加入的溶劑應(ying)不(bu)影響對待測(ce)物的測(ce)定(ding)。
（三）加入待測物標準(zhun)液(ye)(ye)的(de)濃度(du)：保(bao)證(zheng)總濃度(du)在(zai)系(xi)統(tong)分(fen)析測量范圍內，盡量使加入標準(zhun)液(ye)(ye)后樣本中的(de)被測物濃度(du)達到醫(yi)學決(jue)定(ding)水平。
（四）待(dai)測物標(biao)準(zhun)(zhun)液(ye)濃度(du)：因為(wei)待(dai)測物標(biao)準(zhun)(zhun)液(ye)溶液(ye)加入體(ti)積(ji)不到10%，為(wei)保證得到不同濃度(du)的待(dai)回(hui)收分(fen)析樣本，標(biao)準(zhun)(zhun)液(ye)的濃度(du)應該足(zu)夠高。
五、名詞解(jie)釋
（一(yi)）待評價(jia)系統：擬進行性能評估的(de)產品。
（二）待測(ce)(ce)物(wu)標準液(ye):待測(ce)(ce)物(wu)與相應(ying)的溶劑(ji)混合后制備(bei)的標準液(ye)。
（三）基礎(chu)樣(yang)本(ben)：樣(yang)本(ben)與相應的溶劑混合制備成基礎(chu)樣(yang)本(ben)。
（四）待回收分析(xi)樣(yang)(yang)本(ben)：樣(yang)(yang)本(ben)與(yu)相應的待測物標準液混合制備成(cheng)待回收分析(xi)樣(yang)(yang)本(ben)。
六(liu)、參考文獻
申子瑜等主編的《臨床實驗(yan)室管理學(xue)》，由人民衛生出(chu)版社(she)出(chu)版，發行日期2007-7-1。
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