附件1
乙型肝(gan)炎病毒脫氧核糖核酸定量(liang)檢測(ce)試劑
注(zhu)冊技術審(shen)查指導原則(ze)
本指(zhi)導(dao)原則旨在指(zhi)導(dao)注(zhu)冊(ce)(ce)申(shen)請人對(dui)(dui)乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）脫氧核糖核酸(deoxyribose nucleic acid, DNA)定量檢測試劑注(zhu)冊(ce)(ce)申(shen)報(bao)資(zi)料的準備(bei)及撰(zhuan)寫，同時也為(wei)技術(shu)審評部門(men)對(dui)(dui)注(zhu)冊(ce)(ce)申(shen)報(bao)資(zi)料的技術(shu)審評提(ti)供參考。
本指(zhi)導原則是(shi)對(dui)乙(yi)型肝炎病(bing)毒脫氧核糖核酸（HBV DNA）定量(liang)檢(jian)測試劑的(de)(de)(de)一般要(yao)求，申請人(ren)應依據產品的(de)(de)(de)具體特(te)性(xing)確定其中內(nei)容是(shi)否適(shi)用，若不適(shi)用，需(xu)具體闡述理由及相應的(de)(de)(de)科學依據，并依據產品的(de)(de)(de)具體特(te)性(xing)對(dui)注(zhu)冊申報資料的(de)(de)(de)內(nei)容進行充實和(he)細(xi)化。如申請人(ren)認為有必要(yao)增加本指(zhi)導原則不包含的(de)(de)(de)研究內(nei)容，可自(zi)行補充。
本指(zhi)導(dao)原則是對申(shen)請人和(he)審(shen)(shen)查(cha)人員的(de)指(zhi)導(dao)性文件，但不包括注冊審(shen)(shen)批所涉及的(de)行政事項，亦不作為法規強制執(zhi)行，如果有能夠滿足相關(guan)法規要(yao)求的(de)其(qi)他方法，也可(ke)以采用，但需要(yao)提供(gong)詳(xiang)細的(de)研究資(zi)料和(he)驗證資(zi)料，相關(guan)人員應在(zai)遵循(xun)相關(guan)法規的(de)前提下使用本指(zhi)導(dao)原則。
本(ben)指導(dao)原則是在現行(xing)法(fa)(fa)規和標準體系以(yi)及(ji)當(dang)前認(ren)知(zhi)水平下制定的，隨著法(fa)(fa)規和標準的不斷(duan)完善(shan)，以(yi)及(ji)科(ke)學技術的不斷(duan)發展，本(ben)指導(dao)原則相關內容也將適時進(jin)行(xing)調(diao)整。
乙(yi)(yi)型(xing)(xing)肝(gan)(gan)炎病(bing)毒（HBV）感(gan)染(ran)(ran)是(shi)一個(ge)嚴重的(de)(de)公共衛生問(wen)題，我國(guo)屬乙(yi)(yi)型(xing)(xing)肝(gan)(gan)炎感(gan)染(ran)(ran)地方(fang)性流行區。根(gen)據2006年全(quan)國(guo)乙(yi)(yi)型(xing)(xing)肝(gan)(gan)炎流行病(bing)學調查，我國(guo)的(de)(de)慢性HBV感(gan)染(ran)(ran)者(zhe)約(yue)(yue)9300萬(wan)人，其中慢性乙(yi)(yi)型(xing)(xing)肝(gan)(gan)炎患者(zhe)約(yue)(yue)2000萬(wan)例，每年因(yin)乙(yi)(yi)型(xing)(xing)肝(gan)(gan)炎導致的(de)(de)肝(gan)(gan)硬化和肝(gan)(gan)癌(ai)死亡約(yue)(yue)30余萬(wan)例，新發乙(yi)(yi)型(xing)(xing)肝(gan)(gan)炎病(bing)例約(yue)(yue)50 萬(wan)～100萬(wan)例，乙(yi)(yi)肝(gan)(gan)防治是(shi)當前及今后相當長時間內要(yao)面臨的(de)(de)重要(yao)任(ren)務。
乙型(xing)肝(gan)炎是(shi)(shi)血源傳播(bo)(bo)性疾病(bing)，主要經(jing)血（如(ru)不安全注射等）、母嬰(ying)及性接(jie)觸(chu)傳播(bo)(bo)。HBV屬嗜肝(gan)脫氧核(he)糖核(he)酸（DNA）病(bing)毒科(ke)（hepadnaviridae），基因(yin)組長(chang)約(yue)3.2 kb，為(wei)部分雙鏈環狀DNA。急性HBV感(gan)染(ran)DNA存(cun)在先陽性后消失的(de)(de)發展過程，慢性HBV感(gan)染(ran)的(de)(de)自然史一般(ban)可(ke)分為(wei)4個期(qi)(qi)(qi)(qi)，即免(mian)疫(yi)耐(nai)受期(qi)(qi)(qi)(qi)、免(mian)疫(yi)清除(chu)期(qi)(qi)(qi)(qi)、非活動或低(di)（非）復(fu)制(zhi)期(qi)(qi)(qi)(qi)和再活動期(qi)(qi)(qi)(qi)，其中免(mian)疫(yi)耐(nai)受期(qi)(qi)(qi)(qi)HBV DNA滴(di)度(du)較高（大于20 000 IU/ml），免(mian)疫(yi)清除(chu)期(qi)(qi)(qi)(qi)表現為(wei)血清HBV DNA滴(di)度(du)大于2000 IU/ml，但一般(ban)低(di)于免(mian)疫(yi)耐(nai)受期(qi)(qi)(qi)(qi)。非活動或低(di)（非）復(fu)制(zhi)期(qi)(qi)(qi)(qi)滴(di)度(du)較低(di)（小(xiao)于2000 IU/ml），部分再活動期(qi)(qi)(qi)(qi)患者(zhe)表現為(wei)HBV DNA活動性復(fu)制(zhi)，但并不是(shi)(shi)所有HBV感(gan)染(ran)者(zhe)都經(jing)歷以上(shang)四(si)期(qi)(qi)(qi)(qi)。
HBV已發(fa)現(xian)(xian)(xian)有(you)9個(ge)基(ji)因(yin)型(xing)（A～I），每個(ge)基(ji)因(yin)型(xing)又可分(fen)為不同亞(ya)型(xing)，且存在基(ji)因(yin)型(xing)之(zhi)間的(de)重組現(xian)(xian)(xian)象。我國已發(fa)現(xian)(xian)(xian)A、B、C、D基(ji)因(yin)型(xing)，中東部(bu)地(di)(di)(di)區以(yi)B、C基(ji)因(yin)型(xing)占優勢(shi)，其(qi)中北方地(di)(di)(di)區（長江以(yi)北）主要為C2亞(ya)型(xing)；南(nan)方大(da)部(bu)分(fen)地(di)(di)(di)區流行株為B2、C2、C1亞(ya)型(xing)，并有(you)少部(bu)分(fen)D基(ji)因(yin)型(xing)；西部(bu)地(di)(di)(di)區尤其(qi)是新疆地(di)(di)(di)區以(yi)D基(ji)因(yin)型(xing)為主，西部(bu)藏族居民中以(yi)C/D重組基(ji)因(yin)型(xing)為主；A型(xing)和B1亞(ya)型(xing)罕見。
HBV DNA定量檢測試劑是指利用包括實時熒光聚合酶鏈反應（polymerase chain reaction，PCR）或其他的分子生物學方法在內的核酸檢測技術，以HBV基因序列為檢測靶標，對人血清、血漿及其他人體樣本中的HBV DNA進行體外定量檢測的試劑(ji)。結合臨床表現和其他(ta)實驗室指(zhi)標，可作為乙型肝炎輔(fu)(fu)助診(zhen)斷的指(zhi)標之一，還可通(tong)過對血液中(zhong)HBV DNA濃(nong)度的檢測可用于HBV感染的輔(fu)(fu)助診(zhen)斷、治療適應癥的選擇(ze)及抗(kang)病毒療效的判斷。
本指(zhi)導原(yuan)(yuan)則(ze)適(shi)用(yong)(yong)于實時(shi)熒光(guang)PCR方(fang)法(fa)的(de)(de)HBV DNA定(ding)(ding)量檢測試劑(ji)，其他(ta)類同(tong)用(yong)(yong)途的(de)(de)核(he)酸定(ding)(ding)量檢測方(fang)法(fa)可參照(zhao)本指(zhi)導原(yuan)(yuan)則(ze)，但(dan)應根(gen)據產品(pin)特性確(que)定(ding)(ding)其中具體(ti)內容是否適(shi)用(yong)(yong)，如不適(shi)用(yong)(yong)，應另行(xing)選擇符合(he)自身(shen)方(fang)法(fa)學特性的(de)(de)技術(shu)要求或(huo)評價(jia)方(fang)法(fa)。本指(zhi)導原(yuan)(yuan)則(ze)適(shi)用(yong)(yong)于進行(xing)首(shou)次注冊申報和(he)相關許可事項變更的(de)(de)產品(pin)。
本(ben)指導原則(ze)不適用(yong)于國(guo)家法定血源篩查(cha)用(yong)HBV DNA檢測試劑。
綜述(shu)資料(liao)主(zhu)(zhu)要(yao)(yao)包括產品(pin)預(yu)期用(yong)途、產品(pin)描(miao)述(shu)、有關(guan)生物安全性的說(shuo)明、研(yan)究結(jie)果的總(zong)結(jie)評價以(yi)及同(tong)類產品(pin)上(shang)(shang)(shang)市(shi)情況介紹等(deng)內(nei)容，其(qi)中(zhong)同(tong)類產品(pin)上(shang)(shang)(shang)市(shi)情況介紹部分(fen)應著重從方法(fa)學及檢出限等(deng)方面(mian)寫(xie)明擬申(shen)報(bao)產品(pin)與目前市(shi)場上(shang)(shang)(shang)已獲(huo)批準的同(tong)類產品(pin)之間的主(zhu)(zhu)要(yao)(yao)區別。應符(fu)合《體外(wai)(wai)診(zhen)斷試劑(ji)(ji)注冊管理辦法(fa)（試行(xing)）》（國食藥監械(xie)(xie)〔2007〕229號）和(he)《體外(wai)(wai)診(zhen)斷試劑(ji)(ji)注冊申(shen)報(bao)資料(liao)基本要(yao)(yao)求(qiu)》（國食藥監械(xie)(xie)〔2007〕609號）的相關(guan)要(yao)(yao)求(qiu)。
說明書承載了產(chan)品預(yu)期用途、試驗原理、試驗方法、檢測結(jie)果解釋以(yi)及注意(yi)事項等重要(yao)(yao)信息，是指(zhi)導(dao)實(shi)驗室工(gong)作人員正確操作、臨(lin)床醫(yi)生針對檢驗結(jie)果給出(chu)合理醫(yi)學解釋的(de)重要(yao)(yao)依據。因此，產(chan)品說明書是體外診斷試劑注冊(ce)申(shen)報最(zui)重要(yao)(yao)的(de)文(wen)件之一(yi)(yi)。產(chan)品說明書的(de)格式(shi)應(ying)符(fu)合《體外診斷試劑說明書編(bian)寫指(zhi)導(dao)原則(ze)》（國食藥監(jian)械〔2007〕240號）的(de)要(yao)(yao)求，境外產(chan)品的(de)中文(wen)說明書除格式(shi)要(yao)(yao)求外，其內(nei)容(rong)應(ying)盡量保持與原文(wen)說明書的(de)一(yi)(yi)致性，翻譯(yi)力求準(zhun)確且(qie)符(fu)合中文(wen)表達習(xi)慣。產(chan)品說明書的(de)所有(you)內(nei)容(rong)均應(ying)與申(shen)請(qing)人提交的(de)注冊(ce)申(shen)報資料中的(de)相(xiang)關研究結(jie)果保持一(yi)(yi)致，如(ru)某些內(nei)容(rong)引用自參考文(wen)獻，則(ze)應(ying)以(yi)規范格式(shi)對此內(nei)容(rong)進行標注，并單獨列明參考文(wen)獻的(de)相(xiang)關信息。
結(jie)合《體外(wai)診斷試劑(ji)說明(ming)書編寫指導原則》（國食藥監(jian)械〔2007〕240號(hao)）的要求(qiu)，下面對HBV DNA定量檢測試劑(ji)說明(ming)書的重點內容進行詳細說明(ming)，以指導注冊申報人員更(geng)合理地制定產品(pin)說明(ming)書。
1.【預(yu)期用(yong)途】應(ying)至少包括(kuo)以下幾部分內(nei)容(rong)：
（1）試(shi)劑盒(he)用于定量檢測人血(xue)清、血(xue)漿等(deng)樣本中的(de)(de)HBV DNA，適用樣本類(lei)型應依據(ju)申報產(chan)品(pin)的(de)(de)分析性能評估和臨(lin)床研究情(qing)況進行確認。
（2）待測人(ren)群(qun)特征介紹：主要為接受抗(kang)病毒治療的乙型肝炎患者。
（3）臨床用(yong)途：主要通過對乙型肝炎(yan)患(huan)者血中HBV DNA基線水平(ping)和(he)變化情況的(de)監(jian)測，用(yong)于評估抗病毒(du)治療(liao)的(de)應(ying)答和(he)治療(liao)效果監(jian)測。
如有(you)其(qi)他用(yong)(yong)途（如隱匿性感(gan)染的輔助診斷）則(ze)(ze)應(ying)對產(chan)品適(shi)應(ying)癥人群、預期用(yong)(yong)途另行(xing)(xing)說明(ming)，并提供(gong)與之相應(ying)的分析性能評估以及臨床驗證(zheng)等資料(liao)。本指導原則(ze)(ze)內容僅(jin)針對治療(liao)監測用(yong)(yong)途進(jin)行(xing)(xing)要(yao)求。
（4）應當說明該試劑檢測(ce)結果(guo)不得作為患者(zhe)病情(qing)(qing)評價的唯(wei)一指標，必須結合患者(zhe)臨床表現和其他(ta)實(shi)驗室檢測(ce)對病情(qing)(qing)進行綜合分析。
（5）明確說明該(gai)檢測試劑(ji)不得用(yong)于(yu)血源篩查(cha)。
2.【主(zhu)要(yao)組成成分】
（1）說明試(shi)劑(ji)盒(he)所包含(han)(han)組(zu)(zu)分的名稱(cheng)、數(shu)量(liang)、比例或(huo)濃度等信息，如(ru)定(ding)量(liang)標準品、陰/陽性質控品含(han)(han)有人源組(zu)(zu)分，應提(ti)供其(qi)生物學來源、活(huo)性及其(qi)他(ta)特性；說明不同批號試(shi)劑(ji)盒(he)中各組(zu)(zu)分是否可以互換。
（2） 試劑(ji)盒中不包(bao)含但該項檢測必需(xu)的(de)組分(fen)，說明書中應列出相關試劑(ji)/耗(hao)材(cai)的(de)名稱、注冊證號（如有）及其他相關信息。
（3）如果試劑(ji)盒(he)(he)中不包含用(yong)于核酸(suan)(suan)分離(li)/純(chun)化(hua)的試劑(ji)組(zu)分，則應在此(ci)注(zhu)明經驗證(zheng)后推薦(jian)配合使用(yong)的商(shang)品化(hua)核酸(suan)(suan)分離(li)/純(chun)化(hua)試劑(ji)盒(he)(he)的生(sheng)產企業、產品名稱、注(zhu)冊證(zheng)號（如有）以及配套儀器(qi)等詳細信息(xi)。
3.【儲存條件及有效期】
說明(ming)(ming)試劑(ji)盒的(de)效期(qi)(qi)穩(wen)定性(xing)、開封穩(wen)定性(xing)、復溶(rong)穩(wen)定性(xing)、運輸穩(wen)定性(xing)、凍(dong)融(rong)次數(shu)要求等，應標明(ming)(ming)具體的(de)儲存(cun)條件及效期(qi)(qi)。
4.【樣本要求】
（1）樣本收集要(yao)求(qiu)：結合(he)臨床需要(yao)并參照慢性乙型肝炎防(fang)治(zhi)指(zhi)南(nan)（現行版(ban)）推(tui)薦的采樣要(yao)求(qiu)。
（2）血(xue)液樣(yang)(yang)本(ben)(ben)應當說明對采血(xue)管及(ji)抗凝劑(ji)的(de)要求：明確樣(yang)(yang)本(ben)(ben)類(lei)型、采血(xue)管和抗凝劑(ji)，其他樣(yang)(yang)本(ben)(ben)應說明樣(yang)(yang)本(ben)(ben)采集、處(chu)理(li)及(ji)保存方式。
（3）樣(yang)本(ben)(ben)(ben)處理、運(yun)送及(ji)保存(cun)：對血液樣(yang)本(ben)(ben)(ben)離心條(tiao)件(jian)的要求，核酸提取前(qian)的預處理、運(yun)送條(tiao)件(jian)、保存(cun)條(tiao)件(jian)及(ji)期(qi)限（短期(qi)、長期(qi)）等。冷藏(zang)/冷凍(dong)樣(yang)本(ben)(ben)(ben)檢(jian)測前(qian)是(shi)否需恢復至室溫，凍(dong)融次(ci)數(shu)的要求。如有需要應對高(gao)于檢(jian)測范圍的樣(yang)本(ben)(ben)(ben)稀釋方法進行規定。
5.【適用機型(xing)】注明(ming)所有(you)(you)適用的儀(yi)(yi)器型(xing)號，并(bing)提(ti)供與儀(yi)(yi)器有(you)(you)關的重要信息以指導(dao)用戶操作。
6.【檢驗方法】詳細說明試驗操作的(de)各個步驟，包括：
（1）試(shi)劑(ji)準(zhun)備及配制(zhi)方法、注意(yi)事項。
（2）詳述(shu)待測樣本、相關校準品及質控(kong)品核酸提取的條件(jian)、步驟及注意事項。
（3）核(he)酸提取/純化方法的(de)詳(xiang)細介紹。
（4）擴增反應前(qian)準備：加(jia)樣體積(ji)、順序(xu)等(deng)。
（5）PCR各階(jie)段的溫(wen)度、時間設(she)置(zhi)、循(xun)環設(she)置(zhi)及(ji)相(xiang)關注意(yi)事項。
（6）儀器設置：特殊參數、結合探針的(de)(de)熒(ying)光素標記(ji)情(qing)況對待測基因(yin)及內(nei)標的(de)(de)熒(ying)光通道選(xuan)擇。
（7）基線、循環閾值（Ct值）的(de)選擇方法(fa)。
（8）校準方(fang)法的描述。
（9）實驗(yan)的有效性(xing)判斷：試劑盒內陰/陽性(xing)質控品、內標的Ct值(zhi)要求。
7.【檢驗結果的(de)解釋】
檢(jian)(jian)驗(yan)結(jie)果(guo)應用(yong)IU/ml表示，結(jie)合陰、陽性質控結(jie)果(guo)，對低于檢(jian)(jian)出限未檢(jian)(jian)出、低于定(ding)量限、檢(jian)(jian)測范(fan)圍(wei)內及高于檢(jian)(jian)測范(fan)圍(wei)的(de)檢(jian)(jian)測結(jie)果(guo)分(fen)別進行界定(ding)。
8．【檢驗方法的局限性(xing)】
（1）本試劑盒的檢(jian)測結果僅供(gong)臨(lin)床參考(kao)(kao)，對患(huan)者的臨(lin)床診治應結合(he)其(qi)癥狀/體征(zheng)、病史(shi)、其(qi)他實(shi)驗(yan)室(shi)檢(jian)查及治療(liao)反(fan)應等情況綜合(he)考(kao)(kao)慮。
（2）不(bu)合理(li)的(de)樣本采(cai)集、轉運(yun)、儲存及處理(li)過程均有可能導致錯誤(wu)的(de)檢測結(jie)果。
（3）明確該試劑僅限(xian)于規定的樣(yang)本(ben)類型及適(shi)用機(ji)型。
9.【產品性能指(zhi)標】詳述以下性能指(zhi)標：
（1）對相應國家參考品的符合(he)情(qing)況。
（2）最(zui)低檢出(chu)限及(ji)定(ding)量(liang)限：說明試劑不同樣本類型的(de)(de)最(zui)低檢出(chu)濃度和最(zui)低定(ding)量(liang)濃度，簡單介(jie)紹最(zui)低檢出(chu)限/定(ding)量(liang)限的(de)(de)確(que)定(ding)方(fang)法以及(ji)對最(zui)低檢出(chu)限/定(ding)量(liang)限驗證所采(cai)用的(de)(de)基因型。
（3）精密(mi)度(du)：精密(mi)度(du)參考品的組分、濃度(du)及評價標準、評價結果。
（4）線性(xing)范圍(wei)(wei)：確定線性(xing)范圍(wei)(wei)的方法、濃度范圍(wei)(wei)、相關系數等(deng)信息(xi)。
（5）對不同基因(yin)(yin)型的覆(fu)蓋：驗證該(gai)試劑對HBV不同基因(yin)(yin)型的檢測效果。
（6）特異性：
①臨床特異性(xing)：應(ying)采(cai)用一定數量的臨床HBV DNA陰性(xing)樣(yang)本進行驗(yan)證(zheng)。
②交(jiao)叉(cha)反應：易(yi)產(chan)生交(jiao)叉(cha)反應的其他病(bing)原體(ti)核酸的驗證(zheng)情(qing)況，建議(yi)以列(lie)表的方式表示(shi)經過交(jiao)叉(cha)反應驗證(zheng)的病(bing)原體(ti)名稱、型別、濃(nong)度等(deng)信息。
③干擾(rao)物(wu)質：樣本中(zhong)常見干擾(rao)物(wu)質對檢(jian)測結果的影響，如血(xue)紅(hong)蛋白、甘油(you)三酯(zhi)、膽紅(hong)素(su)等，應注(zhu)明可(ke)接受(shou)的最高限值。
④藥(yao)物(wu)(wu)影(ying)響：常用(yong)抗病毒藥(yao)物(wu)(wu)、干擾素(su)等(deng)對檢測(ce)結果的(de)影(ying)響，如未進行相關研究(jiu)也應(ying)提(ti)供相關警示說明。
（7）對(dui)比試驗研究：簡要(yao)介紹對(dui)比試劑(ji)（方法）的信息、所采用的統計學(xue)方法及統計分析結果。
10.【注意事項】應至(zhi)少包括以下內(nei)容：
（1）有(you)關人源組分（如有(you)）的(de)警告，如：試劑(ji)盒內校準(zhun)品(pin)、質控品(pin)或(huo)其他可能含有(you)人源物質的(de)組分，雖已通過乙型肝(gan)炎表面抗原（HbsAg）、人類免疫缺陷病毒(du)抗體(ti)（抗-HIV1/2）、丙(bing)型肝(gan)炎抗體(ti)（抗-HCV）等項(xiang)目(mu)的(de)檢測為(wei)陰性，但截(jie)至目(mu)前，沒有(you)任何(he)一項(xiang)檢測可以確保(bao)絕(jue)對(dui)安(an)全，故仍(reng)應將(jiang)這些組分作為(wei)潛在傳染源對(dui)待。
（2）臨床實驗(yan)室(shi)應嚴(yan)格按照(zhao)《臨床基(ji)因擴增實驗(yan)室(shi)工作(zuo)規范》配備設(she)備及(ji)操(cao)作(zuo)人員(yuan)，應嚴(yan)格按照(zhao)說(shuo)明書要求進行操(cao)作(zuo)。
擬定(ding)產(chan)品(pin)標(biao)準應符(fu)合國食藥(yao)監(jian)械〔2007〕229號和國食藥(yao)監(jian)械〔2007〕609號文件的(de)(de)相(xiang)關(guan)規(gui)定(ding)。另外，對于(yu)國產(chan)試劑，應參考《中國生(sheng)物(wu)(wu)制品(pin)規(gui)程》（2000年版），將擬申報(bao)產(chan)品(pin)的(de)(de)主要原(yuan)材料、生(sheng)產(chan)工藝及半成品(pin)檢定(ding)等內(nei)容(rong)作為(wei)附錄(lu)附于(yu)標(biao)準正文后(hou)，并(bing)在正文的(de)(de)“產(chan)品(pin)分類”項中引出該附錄(lu)內(nei)容(rong)。附錄(lu)中應將待測(ce)靶(ba)基因區域，引物(wu)(wu)/探針來(lai)源(yuan)及驗(yan)證(zheng)情況(kuang)，各種酶的(de)(de)來(lai)源(yuan)、特性以(yi)驗(yan)證(zheng)情況(kuang)等信息的(de)(de)重(zhong)點內(nei)容(rong)予以(yi)明確。
HBV DNA定量檢測試(shi)劑的(de)注冊檢測應(ying)符合(he)相(xiang)應(ying)國家參考品檢測要求。產品的(de)性能指標應(ying)與(yu)說明書內容相(xiang)符。
如果擬申報試劑已有相應(ying)的(de)國家/行業(ye)標準(zhun)(zhun)發布，則企(qi)業(ye)標準(zhun)(zhun)的(de)要(yao)求(qiu)不得低于上(shang)述(shu)標準(zhun)(zhun)要(yao)求(qiu)。
根(gen)據國(guo)(guo)食藥(yao)監械〔2007〕229號要(yao)求(qiu)，首(shou)次申(shen)請注冊(ce)的(de)(de)第三類產(chan)品(pin)應(ying)在(zai)國(guo)(guo)家食品(pin)藥(yao)品(pin)監督管理局認可的(de)(de)、具有相應(ying)承檢(jian)范圍的(de)(de)醫(yi)療器械檢(jian)測(ce)機構進行(xing)連續三個生(sheng)產(chan)批(pi)次樣品(pin)的(de)(de)注冊(ce)檢(jian)測(ce)。對于已(yi)經有國(guo)(guo)家參考品(pin)的(de)(de)HBV DNA項目，在(zai)注冊(ce)檢(jian)測(ce)時應(ying)采用相應(ying)的(de)(de)國(guo)(guo)家參考品(pin)進行(xing)。
（五(wu)）主要原材(cai)料(liao)研究(jiu)資(zi)料(liao)
應(ying)(ying)提供(gong)主要(yao)原(yuan)材(cai)(cai)料(liao)如引(yin)物、探針、酶、標(biao)準(zhun)品或企業(ye)參考(kao)品等的選擇與來源(yuan)、制(zhi)備過程、質(zhi)量分(fen)析和質(zhi)控標(biao)準(zhun)等的相關研究資料(liao)。若(ruo)主要(yao)原(yuan)材(cai)(cai)料(liao)為企業(ye)自己生產，其生產工藝必須穩(wen)定(ding)；如主要(yao)原(yuan)材(cai)(cai)料(liao)源(yuan)于外購，應(ying)(ying)提供(gong)的資料(liao)包括(kuo)：供(gong)貨方提供(gong)的質(zhi)量標(biao)準(zhun)、出廠檢定(ding)報告，以及該原(yuan)材(cai)(cai)料(liao)到貨后的質(zhi)量檢驗資料(liao)。
1.企(qi)業內部參考品的制備、定值(zhi)過程。建議(yi)采(cai)用滅活病毒的血清/血漿建立參考品，不宜使用質(zhi)粒。
2.核(he)酸分離/純化(hua)組分（如有(you)）的主(zhu)要(yao)組成(cheng)、原理介紹及相關的驗證資料。
3.聚合酶鏈反應（PCR）組分的主要材(cai)料（包括引物、探(tan)針、內標、各種(zhong)酶及(ji)其他(ta)主要原(yuan)料）的選擇、制備、質量標準及(ji)實驗研(yan)究(jiu)資(zi)料，主要包括以下內容：
（1） 脫(tuo)氧三磷酸核苷（dNTP）
核酸的(de)組成成分，包括：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP，對純(chun)度、濃(nong)度、保存穩定性等(deng)的(de)詳細驗證資料。
（2）引物
由一定(ding)數(shu)量的(de)(de)(de)dNTP構成(cheng)(cheng)(cheng)的(de)(de)(de)特定(ding)序列，通常采用DNA合成(cheng)(cheng)(cheng)儀人工合成(cheng)(cheng)(cheng)，合成(cheng)(cheng)(cheng)后經聚(ju)丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純(chun)(chun)化，并對序列準確(que)性、純(chun)(chun)度、穩定(ding)性、功能性實驗(yan)等的(de)(de)(de)驗(yan)證。如(ru)為外(wai)購，應提供合成(cheng)(cheng)(cheng)機(ji)構出具的(de)(de)(de)合成(cheng)(cheng)(cheng)產物(wu)的(de)(de)(de)質檢證明，如(ru)聚(ju)丙烯酰胺凝膠電泳法（PAGE）結果或高效液相色譜(pu)法（HPLC）分析圖(tu)譜(pu)。
（3） 探針
特(te)定(ding)的(de)帶有示蹤物（標(biao)記物）的(de)已知核酸片段（寡(gua)聚核苷酸片段），能與互(hu)補(bu)核酸序(xu)列(lie)退火雜交，用于特(te)定(ding)核酸序(xu)列(lie)的(de)探測。合成后(hou)經(jing)PAEG或(huo)其(qi)他適(shi)宜(yi)(yi)方法純(chun)化(hua)，在5'-端(和/或(huo)3'-端)進(jin)行標(biao)記，如熒(ying)光(guang)素報告基(ji)團或(huo)其(qi)他發光(guang)標(biao)記物，在3'-端標(biao)記熒(ying)光(guang)素淬滅基(ji)團，并經(jing)HPLC或(huo)其(qi)他適(shi)宜(yi)(yi)方法純(chun)化(hua),純(chun)度(du)應達到高(gao)效液相色(se)譜純(chun)。如為外購，應提(ti)供(gong)合成機構出具的(de)合成產物的(de)質檢(jian)證(zheng)明，如HPLC分(fen)析圖譜；應對探針(zhen)的(de)核酸序(xu)列(lie)及標(biao)記的(de)熒(ying)光(guang)素或(huo)化(hua)學發光(guang)物進(jin)行核實，并作HPLC分(fen)析。
（4） PCR反(fan)應所需(xu)酶(mei)
DNA聚合酶，應具有(you)(you)DNA聚合酶活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)，無核酸內切酶活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)，具熱穩定(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)，如(ru)：94℃保溫1小時后(hou)仍保持50%活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)；尿嘧(mi)啶糖(tang)基化酶（UNG），具有(you)(you)尿嘧(mi)啶糖(tang)基化活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)，無核酸外切酶及核酸內切酶活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)，應對酶活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)有(you)(you)合理驗證；應提(ti)供(gong)有(you)(you)關保存穩定(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、活(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)及功能實驗等的驗證資料。
4.內(nei)對照（內(nei)標）、校準品(pin)(pin)及質控品(pin)(pin)的原料選擇(ze)、制備、定(ding)值過程及試驗資(zi)料。內(nei)標設(she)置應合(he)理，質控品(pin)(pin)宜(yi)采(cai)用(yong)混(hun)合(he)陰性人血漿或血清作為基質。
5.核酸(suan)類檢測試(shi)劑的包裝(zhuang)材料(liao)和耗材應無脫(tuo)氧(yang)核糖(tang)核酸(suan)酶(mei)（Dnase）和核糖(tang)核酸(suan)酶(mei)（Rnase）污(wu)染。
（六(liu)）主要(yao)生產工(gong)藝(yi)及反應體系的(de)研究資料
基本(ben)生產工(gong)藝主要包括：配制(zhi)(zhi)(zhi)工(gong)作(zuo)液、半成品檢(jian)定、分裝和包裝。配制(zhi)(zhi)(zhi)工(gong)作(zuo)液的各種原(yuan)(yuan)材料及其配比應(ying)符合要求，原(yuan)(yuan)材料應(ying)混合均(jun)勻，配制(zhi)(zhi)(zhi)過程應(ying)對pH、電導率等關鍵參數(shu)進行有效(xiao)控(kong)制(zhi)(zhi)(zhi)。
生產工藝(yi)研(yan)究的資料應(ying)能對反(fan)(fan)應(ying)體系涉及到的基(ji)本內(nei)容，如(ru)樣本類型、樣本用量、試(shi)劑用量、反(fan)(fan)應(ying)條件、校準方(fang)法、質(zhi)控方(fang)法、穩定性和有效期，提供確切的依(yi)據，主要包括以下內(nei)容：
1.主(zhu)要生產工藝介紹(shao)，可以圖表方式表示。
2.反應原理介紹。
3.基因位(wei)點選(xuan)擇(ze)、PCR方法學(xue)特(te)性介紹。
4. DNA提取純化方法優(you)化，建(jian)議包含純化步驟(zou)，內(nei)標、校準品、質控(kong)品均應全程參與提取純化，不建(jian)議采(cai)用(yong)煮沸法進行(xing)DNA提取。
5.確(que)定(ding)最佳(jia)PCR反(fan)應(ying)(ying)體系的(de)研(yan)究(jiu)資(zi)料，包括酶濃(nong)度、引(yin)物/探針(zhen)濃(nong)度、dNTP濃(nong)度、陽(yang)離子濃(nong)度、樣(yang)本(ben)量、加樣(yang)量及反(fan)應(ying)(ying)體積(ji)等(deng)。樣(yang)本(ben)量應(ying)(ying)不少于200微升，加樣(yang)量和反(fan)應(ying)(ying)體積(ji)參考相應(ying)(ying)行業標準，經研(yan)究(jiu)驗(yan)證后確(que)定(ding)。
6.確定PCR各階段溫度、時(shi)間及循環(huan)數的研究資料(liao)。
7.對(dui)于基線閾值（threshold）和閾值循環數(shu)（Ct）確定的研究(jiu)資料。
8.不同適用(yong)機型的(de)反應(ying)條件的(de)對比(bi)分(fen)析，如果有差(cha)異應(ying)分(fen)別詳(xiang)述。
另外，對于試(shi)劑盒(he)的內標(biao)、校準品、質控品設置，建議企業參考以(yi)下要求(qiu)執行：
（1）樣本(ben)反應管應設置合(he)理的(de)(de)內(nei)對照（內(nei)標）以對管內(nei)抑制(zhi)可能造成的(de)(de)假(jia)陰性(xing)結果進(jin)行質控。申請人應對內(nei)標的(de)(de)引物(wu)、探針和(he)模(mo)板的(de)(de)濃度(du)做精確驗證(zheng)，既要保證(zheng)內(nei)標熒(ying)光(guang)通道呈明(ming)顯的(de)(de)陽性(xing)曲線，但又不能對目的(de)(de)基因的(de)(de)檢(jian)測(ce)造成競(jing)爭性(xing)抑制(zhi)而(er)導致假(jia)陰性(xing)，對內(nei)標的(de)(de)Ct應有明(ming)確的(de)(de)范圍要求。
（2）HBV DNA定量檢測試劑的質控品應至少設置三個量級水平的系列質控品:臨界陽性質控品、強陽性質控品和陰性質控品。校準品和質控品均應參與樣本核酸的平行提取，以對整個PCR反應過程、試劑/設備、交叉污染等環節進行合理質量控制。企業應對各種質控品的Ct做出明確的范圍要求。
（七）分析性能評估資(zi)料
申請人(ren)應提交生產者在產品研(yan)制或成品驗(yan)證階段對試(shi)劑(ji)盒(he)進(jin)行(xing)(xing)的(de)(de)所有(you)性(xing)能(neng)(neng)驗(yan)證的(de)(de)研(yan)究資(zi)(zi)料(liao)，對于每項分析(xi)性(xing)能(neng)(neng)的(de)(de)評價(jia)都應包括具體研(yan)究目的(de)(de)、實(shi)驗(yan)設(she)計、研(yan)究方(fang)法、可(ke)接受標(biao)(biao)準、實(shi)驗(yan)數據、統計方(fang)法等詳細資(zi)(zi)料(liao)。有(you)關(guan)(guan)分析(xi)性(xing)能(neng)(neng)驗(yan)證的(de)(de)背景信息(xi)也應在申報資(zi)(zi)料(liao)中有(you)所體現，包括實(shi)驗(yan)地點(dian)（實(shi)驗(yan)室）、適用儀器、試(shi)劑(ji)規格(ge)、批(pi)(pi)號、臨床(chuang)(chuang)樣本來源等。分析(xi)性(xing)能(neng)(neng)評價(jia)的(de)(de)實(shi)驗(yan)方(fang)法可(ke)以參考(kao)相關(guan)(guan)的(de)(de)美國臨床(chuang)(chuang)實(shi)驗(yan)室標(biao)(biao)準化協會批(pi)(pi)準指(zhi)南(nan)（CLSI-EP）文件(jian)或國內有(you)關(guan)(guan)體外診斷產品性(xing)能(neng)(neng)評估的(de)(de)指(zhi)導原則進(jin)行(xing)(xing)。對于HBV DNA定量檢測試(shi)劑(ji)，建議著重對以下分析(xi)性(xing)能(neng)(neng)進(jin)行(xing)(xing)研(yan)究。
1. HBV DNA提取
病毒DNA提(ti)取主要(yao)有(you)以下目(mu)(mu)的(de)(de)：富集目(mu)(mu)的(de)(de)基(ji)因濃度、保證目(mu)(mu)的(de)(de)基(ji)因序列的(de)(de)完整性、增(zeng)加PCR模板溶(rong)液均一性、去除PCR抑(yi)制(zhi)物(wu)，是(shi)決定PCR成敗的(de)(de)關鍵環(huan)節。因此(ci)，無論(lun)申(shen)報產品是(shi)否含有(you)DNA分離/純(chun)化的(de)(de)組分，企業都應(ying)(ying)對核酸提(ti)取的(de)(de)環(huan)節做詳細(xi)的(de)(de)驗(yan)證。臨床標本(ben)中(zhong)可(ke)能含有(you)各(ge)式各(ge)樣的(de)(de)PCR抑(yi)制(zhi)物(wu)，因此(ci)，對于DNA提(ti)取試(shi)(shi)劑的(de)(de)選(xuan)擇(ze)，除最大量分離出目(mu)(mu)的(de)(de)DNA外，還應(ying)(ying)有(you)純(chun)化步驟，盡可(ke)能去除PCR抑(yi)制(zhi)物(wu)。目(mu)(mu)前常見的(de)(de)DNA分離純(chun)化方法和改良方法各(ge)有(you)優勢和不足，申(shen)請人應(ying)(ying)結合(he)(he)申(shen)報產品的(de)(de)特性，合(he)(he)理選(xuan)擇(ze)DNA分離/純(chun)化試(shi)(shi)劑，并提(ti)供詳細(xi)的(de)(de)驗(yan)證資料（提(ti)取效(xiao)率、與后續試(shi)(shi)驗(yan)的(de)(de)配合(he)(he)等）。
2.最(zui)低檢出(chu)限與定量限（分析靈敏度）
（1）最低(di)檢出限與定量限的確定
建議使用國(guo)際(ji)參(can)考品/國(guo)家參(can)考品進行梯度稀(xi)釋并(bing)多次檢測，將具有95%以上陽性(xing)檢出率的(de)病毒水平作為最低(di)檢出限。建議最低(di)檢出限應不高(gao)于30IU/ml。
定量限應(ying)高于或等于檢出限，將多(duo)次（至少10次）測量的(de)結果符合試劑準確(que)度(du)要求的(de)最低病毒水平作(zuo)為定量限。
（2）最低檢出限和定量限的驗證
申報試(shi)劑應在最低檢出限或接近最低檢出限的(de)病毒濃度對不同(tong)基因型(xing)（至(zhi)少(shao)包(bao)括B、C、D型(xing)）進行驗證，總測試(shi)數不少(shao)于60次。定(ding)量限的(de)驗證應對不同(tong)基因型(xing)（至(zhi)少(shao)包(bao)括B、C、D型(xing)）進行驗證，總測試(shi)數不少(shao)于40次。
企業(ye)應能夠提(ti)供(gong)用于最低(di)檢出(chu)限/定(ding)量限驗證的(de)各個病(bing)毒株的(de)來源、型別(bie)確認(ren)及(ji)滴度確認(ren)試驗等信息。
3.線性范圍
線性(xing)范(fan)圍確定(ding)(ding)的(de)研究應(ying)使用(yong)高值臨(lin)床樣本（由可溯源(yuan)至(zhi)國(guo)(guo)家參考(kao)品/國(guo)(guo)際參考(kao)品的(de)方法定(ding)(ding)量）進行(xing)梯度(du)(du)稀(xi)釋，稀(xi)釋液應(ying)使用(yong)經(jing)確認為(wei)陰性(xing)的(de)混(hun)合(he)人血清或血漿，應(ying)包含(han)不少(shao)于9個濃度(du)(du)（應(ying)包含(han)接近(jin)最(zui)低檢測限的(de)臨(lin)界(jie)值濃度(du)(du)），使用(yong)至(zhi)少(shao)3個批次的(de)試(shi)劑進行(xing)試(shi)驗。通過評(ping)價一(yi)定(ding)(ding)范(fan)圍內的(de)線性(xing)關系(xi)及(ji)各水平的(de)準(zhun)確度(du)(du)確定(ding)(ding)該產(chan)品的(de)線性(xing)范(fan)圍。
4.準確度
對測量(liang)準確度的(de)評價依次包括(kuo)：與國(guo)家(jia)參考品（和/或國(guo)際參考品）的(de)比(bi)對研究、回收實(shi)(shi)驗、方法(fa)(fa)學(xue)比(bi)對等(deng)方法(fa)(fa)，企業可根(gen)據實(shi)(shi)際情況選擇合理方法(fa)(fa)進行研究。
（1）國(guo)家/國(guo)際參考品驗證
此類檢(jian)測試(shi)劑(ji)有相(xiang)應(ying)的國(guo)家/國(guo)際(ji)參考品，應(ying)使用(yong)國(guo)家/國(guo)際(ji)參考品對試(shi)劑(ji)進行驗證，重點觀察對相(xiang)應(ying)參考品檢(jian)測結果的符合(he)情況(kuang)。
（2）回(hui)收(shou)試驗(yan)(yan)。用于評估(gu)定(ding)量檢測方法(fa)準確(que)測定(ding)加入純分析物(wu)的能力，結果用回(hui)收(shou)率表示。通(tong)常對(dui)樣(yang)本進行3～5次回(hui)收(shou)試驗(yan)(yan)，取(qu)平(ping)均值即平(ping)均回(hui)收(shou)率。
回收試驗注意事項：
①加入的(de)標準液體(ti)積一般應小于樣本體(ti)積的(de)10%；
②盡量使加入(ru)標準液(ye)后樣本(ben)中(zhong)的被測物濃度接近醫學決定水平；
③標準物的(de)濃(nong)度應(ying)該足夠高(gao)，以得到不同濃(nong)度的(de)回(hui)收樣本；
④注(zhu)意基質效應，盡(jin)量采用與臨床(chuang)待測樣本(ben)一致的(de)基質
（3）方法學比對
采用參考方法或國內/國際普遍認為質量較好的同類試劑作為對比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品，從測定結果間的相關性了解擬申報試劑與參比方法間的一致情況。如顯著相關，說明兩檢測系統對病人標本測定結果基本相符，對同一份臨床樣本的醫學解釋，擬申報試劑與對比方法相比不會產生顯著差異結果。
在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和對比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結果進行合理的統計學分析。
5.精(jing)密(mi)度(du)
測(ce)量精(jing)密(mi)(mi)度的(de)(de)(de)評價方法并無(wu)統一(yi)的(de)(de)(de)標(biao)準(zhun)可依，可根據不同產品(pin)特(te)征或企業的(de)(de)(de)研(yan)究習慣進行(xing)，前提(ti)是必須保證研(yan)究的(de)(de)(de)科學合理性，具體實驗方法可以參(can)考(kao)相關的(de)(de)(de)美國臨床實驗室標(biao)準(zhun)化協會(hui)批準(zhun)指(zhi)南(nan)（CLSI-EP）或國內有關體外診斷產品(pin)性能評估的(de)(de)(de)文件進行(xing)。企業應對每項(xiang)精(jing)密(mi)(mi)度指(zhi)標(biao)的(de)(de)(de)評價標(biao)準(zhun)做出合理要求(qiu)，如標(biao)準(zhun)差或變異系數(shu)的(de)(de)(de)范圍(wei)等。針對本類產品(pin)的(de)(de)(de)精(jing)密(mi)(mi)度評價主要包(bao)括以下要求(qiu)：
（1）對可能影響(xiang)檢測精密度(du)的(de)主要(yao)變(bian)量進行驗(yan)(yan)證(zheng)(zheng)，除申報試劑（包括提(ti)取(qu)組分和聚合酶(mei)鏈反應組分）本(ben)身的(de)影響(xiang)外，還(huan)應對PCR分析儀(yi)、操作(zuo)者(zhe)、地點(dian)等(deng)要(yao)素(su)進行相關的(de)驗(yan)(yan)證(zheng)(zheng)。
（2）合理的(de)(de)精(jing)密(mi)度評(ping)價(jia)(jia)周期(qi)，例如：為期(qi)至少(shao)(shao)20天的(de)(de)連續檢測，每天至少(shao)(shao)由2人(ren)(ren)完(wan)成不(bu)少(shao)(shao)于(yu)2次的(de)(de)完(wan)整(zheng)檢測，從而對批(pi)內(nei)/批(pi)間、日內(nei)/日間以及不(bu)同操作者之間的(de)(de)精(jing)密(mi)度進行(xing)綜合評(ping)價(jia)(jia)。如有條件，申請人(ren)(ren)應選擇不(bu)同的(de)(de)實(shi)驗室(shi)進行(xing)重復實(shi)驗以對室(shi)間精(jing)密(mi)度進行(xing)評(ping)價(jia)(jia)。
（3）用(yong)于精密(mi)度(du)評(ping)價(jia)的質控(kong)品應至少(shao)包括四個水平:
①陰(yin)性質(zhi)控(kong)品(pin)：不(bu)含乙型肝炎病(bing)毒脫(tuo)氧(yang)核(he)糖(tang)核(he)酸（HBV DNA）的質(zhi)控(kong)品(pin)，不(bu)得(de)檢出(chu)陽性（n≥20）。
②臨界陽性質控品：待測物(wu)濃度略(lve)高于(yu)試(shi)劑盒的最(zui)低檢(jian)出限，陽性檢(jian)出率應高于(yu)95%（n≥20）。
③弱(ruo)陽性(xing)(xing)質控品：待測物濃度呈弱(ruo)陽性(xing)(xing)（高于定量限(xian)濃度1個數(shu)量級），陽性(xing)(xing)檢出(chu)率(lv)為(wei)100%且變異系數(shu)（CV）符合標準要求（n≥20）。
④強陽性(xing)質控品：待測物濃度呈中度至(zhi)強陽性(xing)，陽性(xing)檢出率(lv)為100%且CV符合標準要求(qiu)（n≥20）。
6.HBV不同基因型(xing)的覆蓋
應對(dui)(dui)乙肝病毒不(bu)同基(ji)因(yin)型(xing)（至(zhi)少包括B、C、D型(xing)）進行檢測(ce)，重點考察各基(ji)因(yin)型(xing)病毒樣本的分析靈敏度、準確(que)性及精(jing)密度指標，每個基(ji)因(yin)型(xing)的病毒樣本稀釋成(cheng)至(zhi)少3個濃度水(shui)平，對(dui)(dui)每水(shui)平樣本進行重復測(ce)定。
7.特異性
（1）交叉反應
①用于HBV DNA檢測試劑交叉反應驗證(zheng)的(de)病原(yuan)體種類主要考慮以下幾方面可能性：核酸(suan)序列具(ju)有同源性、易引起相同或(huo)相似的(de)臨(lin)床癥狀（推薦種類見表1）。
②建(jian)議在病(bing)毒和細菌感染(ran)的(de)醫(yi)學相關水平進行(xing)交叉反應的(de)驗證(zheng)。通常，細菌感染(ran)的(de)水平為106 cfu/ml或(huo)更高，病(bing)毒為105 pfu/ml或(huo)更高。
③申請人應(ying)(ying)(ying)提供所有用于交(jiao)叉(cha)反應(ying)(ying)(ying)驗(yan)證(zheng)的(de)病毒和細菌的(de)來源、種(zhong)屬/型別和濃度確認等試驗(yan)資料。有關(guan)交(jiao)叉(cha)反應(ying)(ying)(ying)驗(yan)證(zheng)的(de)信息應(ying)(ying)(ying)以列(lie)表的(de)方式在產品(pin)(pin)說(shuo)明書的(de)【產品(pin)(pin)性能指標】項中有所體現。
表1 用于交叉反應研究的微生(sheng)物（推薦）
微生物 |
人巨細胞病毒 |
E-B病毒 |
人類免疫缺陷病毒 |
丙型肝炎病毒 |
甲型肝炎病毒 |
梅毒 |
人類皰疹病毒6型 |
單純皰疹病毒1型 |
單純皰疹病毒2型 |
甲型流感病毒 |
痤(cuo)瘡丙酸桿菌 |
金黃色葡萄球菌 |
白色念珠菌 |
（2）干擾物質
①潛在的干擾物質主要包括：內源性物質（見表2）和常用的治療藥物如普通IFNα（2a、2b和1b）和聚乙二醇干擾素α（2a和2b）[PegIFNα（2a和2b）]、拉(la)米夫定（lamivudine）、阿德福韋酯（adefovir dipivoxil）、恩(en)替卡(ka)韋（entecavir）、替比夫定（telbivudine）等。
②使用醫學相關(guan)水平的干(gan)擾物(wu)(wu)濃(nong)度(du)(du)進行(xing)驗證(zheng)，另(ling)外，亦(yi)建(jian)議申請人在每種干(gan)擾物(wu)(wu)質的潛在最(zui)大濃(nong)度(du)(du)(最(zui)差條件)條件下進行(xing)評價(jia)。對于常(chang)見藥物(wu)(wu)干(gan)擾試(shi)驗，建(jian)議參照相應(ying)藥物(wu)(wu)藥代(dai)動力(li)學研究確定的治療藥物(wu)(wu)濃(nong)度(du)(du)添加相應(ying)藥物(wu)(wu)進行(xing)干(gan)擾驗證(zheng)。
③建議在病毒(du)的檢(jian)測臨(lin)界(jie)值水平對(dui)每種干擾物質的干擾影(ying)響進行檢(jian)測。
表2 建議用于干擾研究的物質（推薦）
物質 |
人白蛋白 |
膽紅素* |
游離血紅蛋白* |
甘油三酯* |
系統(tong)性紅斑狼瘡患者血 |
抗核抗體 |
類風濕因子 |
總G型免疫球蛋白（IgG）* |
*為必(bi)須驗證的(de)干擾物質(zhi)。
8.溯源性
應提交詳細的溯源(yuan)性(xing)研究(jiu)資料。企業制(zhi)(zhi)備的企業內部參(can)(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)、二級參(can)(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)、用(yong)于制(zhi)(zhi)備商(shang)品(pin)(pin)(pin)(pin)化校(xiao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)的儲備液(ye)以(yi)及不同基(ji)因型(xing)的陽(yang)性(xing)樣本均應能夠溯源(yuan)至國(guo)家(jia)參(can)(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)/國(guo)際(ji)參(can)(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)。使用(yong)國(guo)家(jia)參(can)(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)/國(guo)際(ji)參(can)(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)為(wei)校(xiao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)，應用(yong)多臺(tai)儀器對企業一級參(can)(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)進行校(xiao)準，以(yi)下逐(zhu)級對企業二級參(can)(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)、校(xiao)準儲備液(ye)、陽(yang)性(xing)參(can)(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)進行校(xiao)準。
9.其他需注意問題
對于適用(yong)多個機型(xing)(xing)的(de)產品，應提供如產品說明書(shu)【適用(yong)機型(xing)(xing)】項中所(suo)列的(de)所(suo)有型(xing)(xing)號儀器(qi)的(de)性(xing)能評(ping)估(gu)資料(liao)。如適用(yong)于不(bu)同(tong)(tong)樣本(ben)(ben)類(lei)型(xing)(xing)，應提交(jiao)對不(bu)同(tong)(tong)樣本(ben)(ben)類(lei)型(xing)(xing)一(yi)致(zhi)性(xing)的(de)驗證，包(bao)括(kuo)不(bu)同(tong)(tong)抗凝劑、采血管(guan)的(de)驗證。
對(dui)于此類(lei)試(shi)(shi)劑，正常人(ren)(ren)群(qun)中不應檢(jian)出(chu)HBV DNA，參考值(zhi)確定資(zi)料主要是指Ct的確認資(zi)料，建議申請人(ren)(ren)采用受試(shi)(shi)者(zhe)工作(zuo)特征（ROC）曲(qu)線的方(fang)式對(dui)申報產品用于結果判斷的臨(lin)界值(zhi)予以確認。
穩(wen)(wen)定(ding)(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)研(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)(jiu)資(zi)料(liao)主(zhu)要涉及(ji)(ji)兩(liang)部分(fen)內(nei)容，申(shen)報試劑的(de)(de)(de)穩(wen)(wen)定(ding)(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)和適用樣本的(de)(de)(de)穩(wen)(wen)定(ding)(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)研(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)(jiu)。前者(zhe)主(zhu)要包(bao)括實(shi)時穩(wen)(wen)定(ding)(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)（有(you)效(xiao)期）、運輸穩(wen)(wen)定(ding)(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)、開(kai)瓶穩(wen)(wen)定(ding)(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)及(ji)(ji)凍融(rong)次數(shu)限制等研(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)(jiu)，申(shen)請(qing)人可(ke)根據實(shi)際需要選擇合理的(de)(de)(de)穩(wen)(wen)定(ding)(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)研(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)(jiu)方案。穩(wen)(wen)定(ding)(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)研(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)(jiu)資(zi)料(liao)應(ying)包(bao)括研(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)(jiu)方法(fa)的(de)(de)(de)確定(ding)(ding)依據、具(ju)體的(de)(de)(de)實(shi)施(shi)方案、詳細的(de)(de)(de)研(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)(jiu)數(shu)據以及(ji)(ji)結論。對于(yu)實(shi)時穩(wen)(wen)定(ding)(ding)性(xing)(xing)(xing)(xing)研(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)(jiu)，應(ying)提(ti)供至少三批樣品在實(shi)際儲存(cun)條(tiao)件下(xia)保存(cun)至成品有(you)效(xiao)期后(hou)的(de)(de)(de)研(yan)(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)(jiu)資(zi)料(liao)。
應對(dui)樣(yang)(yang)本(ben)穩定(ding)性(xing)進(jin)行研究，主要(yao)包(bao)括(kuo)室溫保存、冷藏(zang)和冷凍條件下的有(you)效(xiao)期驗(yan)證(zheng)，可以在(zai)合(he)理的溫度范圍內選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定(ding)的時間段(duan)即對(dui)儲存樣(yang)(yang)本(ben)進(jin)行全性(xing)能的分析驗(yan)證(zheng)，從(cong)而(er)確認(ren)不同類型樣(yang)(yang)本(ben)的效(xiao)期穩定(ding)性(xing)。適(shi)于冷凍保存的樣(yang)(yang)本(ben)還應對(dui)凍融次(ci)數(shu)進(jin)行評價(jia)。
試劑穩(wen)定性和樣本(ben)穩(wen)定性兩部分(fen)內容的研究結果(guo)均應在說(shuo)明書【儲(chu)存條件及有(you)效(xiao)期】和【樣本(ben)要求】兩項中(zhong)進行詳(xiang)細說(shuo)明。
1.研究方法
對(dui)于該類試劑(ji)(ji)已有同類產(chan)(chan)(chan)品(pin)(pin)上市(shi)，按照法(fa)規(gui)要求選擇(ze)境(jing)內已批(pi)準(zhun)上市(shi)、臨床普遍認為質量(liang)較好(hao)的同類產(chan)(chan)(chan)品(pin)(pin)作為對(dui)比試劑(ji)(ji)，采用擬(ni)申報產(chan)(chan)(chan)品(pin)(pin)（以下(xia)稱考核試劑(ji)(ji)）與之進行對(dui)比試驗研究，證明本(ben)品(pin)(pin)與已上市(shi)產(chan)(chan)(chan)品(pin)(pin)等效或優于已上市(shi)產(chan)(chan)(chan)品(pin)(pin)。
建議預實(shi)驗選擇(ze)兩(liang)種對比(bi)試(shi)(shi)劑同時進行驗證，考察其誤差范圍，選擇(ze)其中一(yi)種作為正式(shi)試(shi)(shi)驗的對比(bi)試(shi)(shi)劑，另一(yi)種可(ke)作為第三方試(shi)(shi)劑。對比(bi)試(shi)(shi)劑的適用樣本類型(xing)及(ji)檢(jian)測范圍應(ying)能夠(gou)涵蓋考核試(shi)(shi)劑的樣本及(ji)檢(jian)測性能要求(qiu)，以免造成考核試(shi)(shi)劑部分性能無法驗證的情況。
對(dui)比試驗結果不(bu)一致（檢(jian)測值差異(yi)較大）的(de)樣本應采用公認較好(hao)的(de)第三方試劑進(jin)行(xing)驗證。
2.臨(lin)床(chuang)研究(jiu)單(dan)位的選擇
建(jian)議申請人在(zai)選擇臨(lin)床研究單(dan)位(wei)時，應(ying)(ying)(ying)考(kao)(kao)慮(lv)到各試(shi)驗(yan)單(dan)位(wei)之(zhi)間的(de)平行性(xing)和一定的(de)地域代表(biao)性(xing)，臨(lin)床研究單(dan)位(wei)應(ying)(ying)(ying)具有(you)分子生物學方法檢(jian)測(ce)的(de)優勢，實驗(yan)操作人員(yuan)應(ying)(ying)(ying)有(you)足夠的(de)時間熟(shu)悉檢(jian)測(ce)系統的(de)各環節（儀器、試(shi)劑、質(zhi)(zhi)控(kong)及操作程序等），熟(shu)悉評價方案。在(zai)整個(ge)實驗(yan)中，考(kao)(kao)核試(shi)劑和對比(bi)試(shi)劑都應(ying)(ying)(ying)處(chu)于有(you)效的(de)質(zhi)(zhi)量(liang)控(kong)制下，最大(da)限(xian)度保證試(shi)驗(yan)數據(ju)的(de)準確(que)性(xing)及可重復性(xing)。
3.臨床試驗方案
臨(lin)床(chuang)(chuang)試(shi)驗(yan)(yan)(yan)實(shi)施前(qian)，研(yan)究(jiu)人(ren)(ren)員應(ying)(ying)從流行病學(xue)、統計(ji)學(xue)、臨(lin)床(chuang)(chuang)醫(yi)學(xue)、檢驗(yan)(yan)(yan)醫(yi)學(xue)等(deng)多方(fang)面(mian)考(kao)慮，設計(ji)科(ke)學(xue)合理的(de)(de)(de)臨(lin)床(chuang)(chuang)研(yan)究(jiu)方(fang)案。各(ge)臨(lin)床(chuang)(chuang)研(yan)究(jiu)機構(gou)(gou)的(de)(de)(de)方(fang)案設置(zhi)應(ying)(ying)基本一致，且保證在整(zheng)個(ge)臨(lin)床(chuang)(chuang)試(shi)驗(yan)(yan)(yan)過(guo)程中遵循預定的(de)(de)(de)方(fang)案實(shi)施，不可隨意(yi)改(gai)動。整(zheng)個(ge)試(shi)驗(yan)(yan)(yan)過(guo)程應(ying)(ying)在臨(lin)床(chuang)(chuang)研(yan)究(jiu)機構(gou)(gou)的(de)(de)(de)實(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)內并由本實(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)的(de)(de)(de)技術人(ren)(ren)員操作完成，申報單位的(de)(de)(de)技術人(ren)(ren)員除進(jin)行必要的(de)(de)(de)技術指導外，不得隨意(yi)干涉實(shi)驗(yan)(yan)(yan)進(jin)程，尤其是數(shu)據收集過(guo)程。
試(shi)驗(yan)方案中應確定嚴(yan)格的病例納入(ru)/排(pai)除(chu)標準，任何已經(jing)入(ru)選(xuan)的病例再被排(pai)除(chu)出臨床研究(jiu)都應記(ji)錄(lu)在案并(bing)明(ming)(ming)確說明(ming)(ming)原因。在試(shi)驗(yan)操作過程中和判定試(shi)驗(yan)結果(guo)時(shi)(shi)應采(cai)用盲(mang)法以保證試(shi)驗(yan)結果(guo)的客(ke)觀性。各研究(jiu)單位選(xuan)用的對比試(shi)劑(ji)應一致，以便進行合理的統計學分析(xi)，同時(shi)(shi)方案中應明(ming)(ming)確寫明(ming)(ming)對于對比試(shi)驗(yan)研究(jiu)中測定結果(guo)不符(fu)的樣(yang)本進行確認試(shi)驗(yan)的第三方試(shi)劑(ji)或方法。
4.病例選擇及樣本類型
臨床試驗(yan)應樣(yang)本(ben)數需(xu)不(bu)少(shao)于(yu)500例，其(qi)(qi)中應主要選(xuan)(xuan)擇(ze)(ze)(ze)乙型肝炎患者(zhe)(zhe)樣(yang)本(ben)（陽性(xing)(xing)樣(yang)本(ben)），不(bu)少(shao)于(yu)450例。在(zai)病(bing)例選(xuan)(xuan)擇(ze)(ze)(ze)時應考(kao)慮到地域性(xing)(xing)的(de)差別，應涵(han)蓋不(bu)少(shao)于(yu)10例D基因型，應注重不(bu)同藥(yao)物治療(liao)的(de)乙型肝炎患者(zhe)(zhe)。陽性(xing)(xing)樣(yang)本(ben)應覆蓋試劑線性(xing)(xing)范圍，均勻分布(bu)高、中、低值(zhi)。建議選(xuan)(xuan)擇(ze)(ze)(ze)不(bu)少(shao)于(yu)50例的(de)陰性(xing)(xing)樣(yang)本(ben)進行比對試驗(yan)，陰性(xing)(xing)樣(yang)本(ben)主要考(kao)慮可(ke)能(neng)存(cun)在(zai)的(de)交(jiao)叉反應情況(kuang)，應選(xuan)(xuan)擇(ze)(ze)(ze)其(qi)(qi)他類(lei)肝炎病(bing)毒感染、其(qi)(qi)他良(liang)性(xing)(xing)或惡(e)性(xing)(xing)肝臟疾病(bing)患者(zhe)(zhe)，以從臨床角(jiao)度考(kao)察其(qi)(qi)特異性(xing)(xing)。
臨床(chuang)試(shi)驗中所涉及(ji)的樣(yang)(yang)本(ben)(ben)類型應為實(shi)際臨床(chuang)檢測(ce)中常用(yong)的樣(yang)(yang)本(ben)(ben)類型。對于同時能(neng)夠檢測(ce)血清(qing)和血漿樣(yang)(yang)本(ben)(ben)的試(shi)劑，應對至(zhi)少50例同一乙型肝炎患者分別采集的血清(qing)和血漿樣(yang)(yang)本(ben)(ben)進行(xing)比對試(shi)驗研究，陽(yang)性樣(yang)(yang)本(ben)(ben)應包括強、中、弱陽(yang)性及(ji)部分陰性樣(yang)(yang)本(ben)(ben)。
臨床研究應以(yi)新鮮樣本(ben)為主，如(ru)采用庫存樣本(ben)應另(ling)行說明 。
5.統計學分析
對(dui)臨(lin)床(chuang)試(shi)驗(yan)結(jie)果(guo)(guo)的(de)統計(ji)應(ying)選(xuan)擇合(he)適的(de)統計(ji)方(fang)法，對(dui)于本類產品對(dui)比實驗(yan)的(de)等效(xiao)性(xing)研(yan)究，常用相關(guan)性(xing)、線(xian)性(xing)回歸對(dui)log10滴度結(jie)果(guo)(guo)進行統計(ji)分(fen)析，考察兩組(zu)數據(ju)之間是否存在相關(guan)性(xing)，統計(ji)分(fen)析應(ying)可以證明(ming)兩種(zhong)方(fang)法的(de)檢測(ce)結(jie)果(guo)(guo)無明(ming)顯統計(ji)學差異。在臨(lin)床(chuang)研(yan)究方(fang)案(an)中應(ying)明(ming)確統計(ji)檢驗(yan)假(jia)設，即評價考核試(shi)劑(ji)(ji)與對(dui)比試(shi)劑(ji)(ji)是否等效(xiao)的(de)標準。選(xuan)擇交叉四格表(biao)的(de)形式總(zong)(zong)結(jie)兩種(zhong)試(shi)劑(ji)(ji)的(de)定性(xing)檢測(ce)結(jie)果(guo)(guo)，對(dui)定性(xing)結(jie)果(guo)(guo)進行四格表(biao)卡(ka)方(fang)或(huo)kappa檢驗(yan)，對(dui)檢驗(yan)結(jie)果(guo)(guo)進行符(fu)合(he)率分(fen)析，計(ji)算陽性(xing)符(fu)合(he)率、陰性(xing)符(fu)合(he)率和(he)總(zong)(zong)符(fu)合(he)率。
6.結(jie)果差異樣本(ben)的驗證
在數(shu)據收集過程中，對(dui)(dui)于兩(liang)種(zhong)試劑的(de)檢測結(jie)(jie)果(guo)有不一致(zhi)（檢測結(jie)(jie)果(guo)差(cha)異(yi)較大(da)）的(de)樣本，應采用臨(lin)床上公認較好的(de)第三(san)種(zhong)同類(lei)試劑進(jin)行確認試驗(yan)，同時結(jie)(jie)合患者的(de)臨(lin)床病情對(dui)(dui)差(cha)異(yi)原因及可能結(jie)(jie)果(guo)進(jin)行分析(xi)。
7.臨(lin)床試驗總(zong)結報告撰寫
根據《體外診斷(duan)試(shi)(shi)劑臨床(chuang)研究技術指導原則》（國食藥監械〔2007〕240號(hao)）的(de)要(yao)求，臨床(chuang)試(shi)(shi)驗(yan)報告應該對試(shi)(shi)驗(yan)的(de)整(zheng)體設計及各(ge)個關鍵點給(gei)予清晰、完整(zheng)的(de)闡(chan)述，應該對整(zheng)個臨床(chuang)試(shi)(shi)驗(yan)實(shi)施過(guo)程、結果分析(xi)、結論(lun)等進(jin)(jin)行條理分明(ming)的(de)描述，并應包括必要(yao)的(de)基礎數據和統(tong)計分析(xi)方法(fa)。建(jian)議(yi)在臨床(chuang)總(zong)結報告中對以下(xia)內容(rong)進(jin)(jin)行詳述。
（1）臨床試(shi)驗總體設計(ji)及方案描(miao)述
① 臨床(chuang)試驗的整體(ti)管理情(qing)況、臨床(chuang)研究(jiu)單位(wei)選擇(ze)、臨床(chuang)主要研究(jiu)人(ren)員簡介等基本(ben)情(qing)況介紹(shao)。
② ;病(bing)例(li)(li)納入/排除標準、不同年齡段人群的預期選擇例(li)(li)數及標準。
③ 樣(yang)本(ben)類型，樣(yang)本(ben)的收(shou)集、處(chu)理及(ji)保存等。
④ 統(tong)計學方法、統(tong)計軟件、評價統(tong)計結果的標準。
（2） 具體的(de)臨床試驗情況
① 申(shen)報試(shi)劑和對比試(shi)劑的名(ming)稱、批(pi)號、有效期及所用機型等信(xin)息。
② 對各(ge)研究單(dan)位的病例(li)數、年齡分(fen)布(bu)情(qing)況(kuang)、不同基(ji)因型分(fen)布(bu)情(qing)況(kuang)進行總合，建議以列表或圖示(shi)方式給出具體例(li)數及百分(fen)比。
③ 質量(liang)控制(zhi)，試(shi)驗人員培訓、儀器日(ri)常維護(hu)、儀器校準(zhun)、質控品運(yun)行情況(kuang)，對檢測精密(mi)度、質控品測量(liang)值的抽查結果評估。
④ 具體試(shi)驗(yan)過程(cheng)，樣(yang)(yang)(yang)本檢測、數據收(shou)集、樣(yang)(yang)(yang)本長期(qi)保存、結(jie)果不一致(zhi)樣(yang)(yang)(yang)本的校驗(yan)等(deng)。
（3） 統計學分析
① 數據預處理(li)、差異數據的重新(xin)檢測或第三(san)方(fang)驗證以及是(shi)否納入最終數據統(tong)計、對異常(chang)值或缺失值的處理(li)、研究過程(cheng)中是(shi)否涉(she)及對方(fang)案的修改。
② 兩組數據(ju)結果的相關性、線(xian)性回歸(gui)的結果。
③ 對相關性及線性方程的(de)顯著性檢驗(yan)，驗(yan)證兩種試(shi)劑定量結果的(de)一致性。
④陽性(xing)符合率(lv)(lv)(lv)、陰性(xing)符合率(lv)(lv)(lv)、總(zong)體符合率(lv)(lv)(lv)及其95%（或99%）的置信(xin)區間。
⑤以交叉表(biao)的形式總結兩(liang)種試劑的定(ding)性檢測結果，對(dui)定(ding)性結果進行四格表(biao)卡方或(huo)kappa檢驗(yan)。
另外考慮到對不同(tong)(tong)樣(yang)(yang)本類型的檢測結果可能存在一定(ding)差異，故建議對不同(tong)(tong)樣(yang)(yang)本類型分(fen)別(bie)進(jin)行(xing)統計分(fen)析(xi)，以(yi)對考核試劑的臨床性(xing)能進(jin)行(xing)綜(zong)合分(fen)析(xi)。
（4） 討論和結論
對總體結果進行總結性描述并簡要分析試驗結果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結論。
四、名詞解釋
精密度（precision）：在規定條件下，相互獨立的測試結果之間的一致程度。精密度的程度是用統計學方法得到的測量不精密度的數字形式表示，如標準差（SD）和變異系數（CV）。
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