金標類檢測試劑主要原材料、生產工藝及質量
控制注冊技術審查指導原則（報批稿）
一、前言
本指導原則的主要目的是規范申請人對(dui)金標類類檢測試劑的主要原材料研究(jiu)資(zi)料、生產工(gong)藝及反應體系研究(jiu)資(zi)料的準備，并對(dui)產品質量(liang)控制提出指導性技術要求。
本(ben)指導原則系對金(jin)標(biao)類(lei)檢測試劑的一般要求，申請人應依(yi)據(ju)產(chan)品特性確定其中的具(ju)體(ti)內容是否適用(yong)，若(ruo)不適用(yong)，需詳(xiang)細闡述其理由(you)及相應的科學依(yi)據(ju)。
本指導原則是對申(shen)請人和(he)審查人員的指導性(xing)文件，但不(bu)包括注冊審批所涉及的行(xing)政事項，亦不(bu)作為法規強制執行(xing)，如果有(you)能夠(gou)滿足相關法規要求的其它方(fang)法，也可以采(cai)用(yong)，但是需要提供詳細的研(yan)究資(zi)料和(he)驗證資(zi)料。應(ying)在(zai)遵(zun)循相關法規的前提下使用(yong)本指導原則。
本指(zhi)導(dao)原則是在現行(xing)法(fa)規(gui)和標準體系(xi)以(yi)及當(dang)前認知水平下制訂的(de)，隨著法(fa)規(gui)和標準的(de)不斷完(wan)善(shan)，以(yi)及科學技術的(de)不斷發展，本指(zhi)導(dao)原則相關(guan)內容也將進(jin)行(xing)適(shi)時的(de)調整。
二、適用范圍
本(ben)指導原(yuan)則適用(yong)于第三類(lei)體外診(zhen)斷試(shi)劑中(zhong)金(jin)標(biao)類(lei)試(shi)劑的注冊技(ji)術審查，其他(ta)類(lei)金(jin)標(biao)試(shi)劑可作參(can)考。
三、基本要求
（一）基本原則
1.診(zhen)斷試劑的研(yan)制、生產用的各種原料(liao)、輔料(liao)應當制定相(xiang)應的質量(liang)指標，并應符(fu)合(he)有關法規的要(yao)求(qiu)。
2.診斷(duan)(duan)試劑(ji)(ji)的(de)生(sheng)產(chan)(chan)(chan)企(qi)(qi)業應具備相應的(de)專業技(ji)術人員、儀器(qi)設備以(yi)及適宜的(de)生(sheng)產(chan)(chan)(chan)環境，獲得《醫療器(qi)械(xie)生(sheng)產(chan)(chan)(chan)許(xu)可證》；同(tong)時，生(sheng)產(chan)(chan)(chan)企(qi)(qi)業應按照《體外診斷(duan)(duan)試劑(ji)(ji)生(sheng)產(chan)(chan)(chan)實施細則（試行(xing)）》的(de)要求(qiu)建立相應的(de)質(zhi)量管理體系，形成文件和記錄，加(jia)以(yi)實施并(bing)保持(chi)有效運(yun)行(xing)；生(sheng)產(chan)(chan)(chan)企(qi)(qi)業還應該通過(guo)《體外診斷(duan)(duan)試劑(ji)(ji)生(sheng)產(chan)(chan)(chan)企(qi)(qi)業質(zhi)量管理體系考核評定(ding)標準（試行(xing)）》的(de)考核。
3.診斷(duan)試劑的(de)研制應(ying)當按(an)照科學、規范的(de)原則組織研發，各反應(ying)條件的(de)選擇和確定應(ying)符(fu)合基本的(de)科學原理。
4.研(yan)制(zhi)生產過程中所(suo)用的(de)(de)材料及(ji)工藝，應充(chong)分考慮可(ke)能涉及(ji)的(de)(de)安全性方(fang)面的(de)(de)事宜。
5.生產(chan)和質量(liang)控制的總體(ti)目標：保證試劑使用安全、質量(liang)穩定、工藝(yi)可(ke)控、檢測有效(xiao)。
（二）原材料質量控制
1.主要生物原料
與(yu)生(sheng)產的(de)(de)產品質(zhi)量最(zui)密切(qie)相關的(de)(de)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)原(yuan)(yuan)料包括各(ge)種天然抗原(yuan)(yuan)、重(zhong)組抗原(yuan)(yuan)、單克隆杭體、多(duo)克隆抗體以及(ji)多(duo)肽類生(sheng)物(wu)(wu)(wu)原(yuan)(yuan)科。這(zhe)類原(yuan)(yuan)料可用于(yu)膠體金標記、包被硝酸纖(xian)維膜(mo)及(ji)用于(yu)制備(bei)質(zhi)控線的(de)(de)抗原(yuan)(yuan)或抗體等。使用前(qian)應(ying)(ying)(ying)按照(zhao)工藝(yi)要求對這(zhe)類生(sheng)物(wu)(wu)(wu)原(yuan)(yuan)料進(jin)行(xing)質(zhi)量檢驗，以保證其達(da)到(dao)規定(ding)的(de)(de)質(zhi)量標準。主要生(sheng)物(wu)(wu)(wu)原(yuan)(yuan)料若為企業(ye)自己生(sheng)產，其工藝(yi)必須相對穩(wen)定(ding)；若購(gou)買，其供(gong)應(ying)(ying)(ying)商(shang)要求相對固定(ding)，不能隨意變(bian)(bian)更(geng)供(gong)應(ying)(ying)(ying)商(shang)，如果(guo)主要原(yuan)(yuan)料（包括工藝(yi)）或其供(gong)應(ying)(ying)(ying)商(shang)有(you)變(bian)(bian)更(geng)，應(ying)(ying)(ying)依據(ju)國家相關法規的(de)(de)要求進(jin)行(xing)變(bian)(bian)更(geng)申請。
主要生(sheng)物原料的常(chang)規檢驗項目一(yi)般(ban)包(bao)括：
（1）外觀
肉(rou)眼觀察(cha)，大部分生物原料(liao)為澄(cheng)清均一的(de)(de)液體，不(bu)(bu)含異物、渾濁(zhuo)或搖不(bu)(bu)散的(de)(de)沉(chen)淀或顆粒；或者為白色粉末，不(bu)(bu)含其他顏色的(de)(de)雜質；特殊(shu)生物原料(liao)應(ying)具(ju)備(bei)相應(ying)外觀標準。
（2）純度和分子量
主要經SDS-PAGE 電(dian)泳(yong)后(hou)，利用(yong)電(dian)泳(yong)掃描儀(yi)進行分(fen)析(xi)，也(ye)可用(yong)其(qi)他(ta)適宜的方法(fa)(fa)，如高效液相法(fa)(fa)等(deng)。根據所檢測(ce)生物(wu)原料的分(fen)子(zi)量(liang)選擇適宜的聚丙(bing)烯酰胺凝膠(jiao)濃度(du)進行電(dian)泳(yong)。一(yi)般每個電(dian)泳(yong)道加樣量(liang)為5μg；電(dian)泳(yong)后(hou)的凝膠(jiao)可用(yong)考馬斯亮藍染(ran)(ran)色(se)或銀染(ran)(ran)法(fa)(fa)染(ran)(ran)色(se)。染(ran)(ran)色(se)后(hou)的凝膠(jiao)用(yong)電(dian)泳(yong)掃描儀(yi)分(fen)析(xi)原料的純度(du)和分(fen)子(zi)量(liang)，純度(du)應(ying)(ying)達到相應(ying)(ying)的質量(liang)標準(zhun)，分(fen)子(zi)量(liang)大小應(ying)(ying)在(zai)正(zheng)確的條帶(dai)位(wei)置。
（3）蛋白濃度
蛋白濃度可通過Lowry法(fa)、280nm 光吸收(shou)法(fa)、雙縮脲方(fang)法(fa)等進行檢測。
（4）效價
效(xiao)價(jia)的(de)測(ce)(ce)定一般根據蛋白含量測(ce)(ce)定結果，通過倍比稀釋法進行。效(xiao)價(jia)應達到規定的(de)要求。
（5）功能性實驗
功(gong)能性(xing)實驗是指生(sheng)物原(yuan)料(liao)用于試(shi)劑盒實際生(sheng)產中(zhong)的情(qing)況，一般考查(cha)使(shi)用該原(yuan)料(liao)的試(shi)劑的靈敏(min)度、特異性(xing)和穩定性(xing)等，并比較(jiao)其與(yu)上批次原(yuan)料(liao)的相關性(xing)。用于制備質控線的抗(kang)原(yuan)或抗(kang)體可采用其他(ta)適宜方法進行功(gong)能性(xing)實驗。
2.生物輔料
生物輔(fu)料一般指在生產過程中作為(wei)蛋(dan)白保護劑(ji)用途的(de)(de)一類(lei)生物原(yuan)(yuan)料，主(zhu)(zhu)要(yao)包括牛血清(qing)白蛋(dan)白等。這些生物原(yuan)(yuan)料的(de)(de)質(zhi)量(liang)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)應(ying)符(fu)合(he)《中國生物制品(pin)主(zhu)(zhu)要(yao)原(yuan)(yuan)輔(fu)材料質(zhi)控(kong)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)（2000年版）》規定的(de)(de)質(zhi)量(liang)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)要(yao)求并檢(jian)驗合(he)格，達(da)到相應(ying)的(de)(de)質(zhi)量(liang)標(biao)(biao)準(zhun)(zhun)后方(fang)可(ke)用于(yu)生產。
建議對牛血清白(bai)蛋白(bai)作以下檢驗：
外觀：應為淺黃色(se)、黃色(se)或乳白(bai)色(se)凍(dong)干粉(fen)末，無吸潮，無結塊，無肉眼(yan)可(ke)見的其它雜質顆(ke)粒。
溶解性(xing)：將(jiang)牛血清白(bai)蛋白(bai)配成10%溶液，溶解時(shi)間在(zai)18-26℃時(shi)應不大于(yu)15分鐘，pH值(zhi)應為6.5~7.1。
總蛋(dan)白含量：用(yong)雙縮脲方法來測定，其標準為大(da)于等于95%。
總蛋(dan)白(bai)中(zhong)的BSA含量：采用硝(xiao)酸纖維素膜電泳法(fa)，其標準為≥95%。
BSA的凈含量(liang)：總(zong)蛋白含量(liang)乘以總(zong)蛋白中(zhong)的BSA含量(liang)，其標準為(wei)≥90%。
生物輔料的供應商(shang)(shang)同樣要求相(xiang)對固定，不得隨(sui)意變更(geng)供應商(shang)(shang)。
3.化學原材料
化學原(yuan)材料的質(zhi)量標準(zhun)參照《中國生(sheng)物(wu)制品主(zhu)要(yao)原(yuan)輔材料質(zhi)控標準(zhun)（2000年版(ban)）》分(fen)析純(chun)級別進行(xing)檢(jian)(jian)驗。主(zhu)要(yao)的檢(jian)(jian)測指(zhi)標包(bao)括(kuo)：外觀、一般(ban)鹽類檢(jian)(jian)測、溶液pH值、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣(zha)等。
主要化(hua)學(xue)原(yuan)(yuan)材料的(de)供應商(shang)要求相對固定，不(bu)得隨意(yi)發生變(bian)更。化(hua)學(xue)原(yuan)(yuan)材料在購入時，原(yuan)(yuan)材料的(de)生產(chan)商(shang)必(bi)須(xu)提供該批次化(hua)學(xue)原(yuan)(yuan)材料的(de)質量保(bao)證材料和質量檢驗報告(gao)，其質量標準應達到生產(chan)所需的(de)質量標準。
4.其他物料
硝(xiao)酸纖(xian)(xian)維(wei)(wei)素膜、玻璃(li)纖(xian)(xian)維(wei)(wei)或聚酯纖(xian)(xian)維(wei)(wei)膜及(ji)濾紙、玻璃(li)纖(xian)(xian)維(wei)(wei)膜等在購入時，其(qi)生產(chan)商必(bi)須提供該批(pi)次材料(liao)的質量(liang)保證材料(liao)和質量(liang)檢(jian)驗報告，其(qi)質量(liang)標(biao)準應達(da)到生產(chan)所需(xu)的質量(liang)標(biao)準。
（1）硝酸纖維素膜
硝酸纖(xian)維素膜應(ying)具有厚(hou)度(du)、孔徑大(da)小等(deng)要求，毛細(xi)遷移速度(du)，韌性（切割時膜破損引(yin)起的廢(fei)品率）、均(jun)一(yi)性（厚(hou)度(du)偏差范圍、毛細(xi)遷移速度(du)偏差范圍）應(ying)達到規定(ding)的要求。
（2）玻(bo)璃纖維或聚酯(zhi)纖維膜及(ji)濾紙
玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙應(ying)(ying)具有厚(hou)度(du)、毛細遷(qian)(qian)移速(su)度(du)、重量等要(yao)求，均一(yi)性（厚(hou)度(du)偏差范圍(wei)，毛細遷(qian)(qian)移速(su)度(du)偏差范圍(wei)，重量偏差范圍(wei)）應(ying)(ying)達到規定(ding)的(de)要(yao)求。
（3）玻璃纖維膜
適(shi)用(yong)于全血檢測的金標試劑，過濾紅(hong)細胞所用(yong)玻璃(li)纖維(wei)膜(mo)或其他材料具有不吸附(fu)蛋白質(zhi)的特點，應具有厚度、孔徑大小等要求(qiu)。
（4）塑料襯片
塑(su)(su)料襯片應(ying)具有(you)厚度、硬度（切割時一(yi)次未能整(zheng)條切下的百(bai)分(fen)率(lv)）、尺寸（與標識吻合）、粘性（切割時造成玻(bo)璃纖維與塑(su)(su)料襯片分(fen)離的百(bai)分(fen)率(lv)）等要求(qiu)。
（5）其他
粘膠(jiao)紙、鋁箔(bo)袋、說明書、包裝(zhuang)外(wai)盒、瓶子(zi)和干(gan)燥劑等(deng)，應參(can)照國(guo)家(jia)食品藥品監督(du)管(guan)理局頒布的《體(ti)外(wai)診斷試劑說明書編寫指導原則》和《醫療器械說明書、標(biao)(biao)簽和包裝(zhuang)標(biao)(biao)識管(guan)理規定》建立相應質量控制標(biao)(biao)準。
（三）試劑盒的制備
本類(lei)試劑的(de)(de)生產包括膠體(ti)金(jin)(jin)及膠體(ti)金(jin)(jin)標(biao)記(ji)抗(kang)原(yuan)(yuan)或抗(kang)體(ti)的(de)(de)制備，膠體(ti)金(jin)(jin)標(biao)記(ji)的(de)(de)包被(bei)，檢測線及質(zhi)控線的(de)(de)制備，膠體(ti)金(jin)(jin)標(biao)記(ji)物、包被(bei)抗(kang)原(yuan)(yuan)或抗(kang)體(ti)等濃度確定，各(ge)種(zhong)工(gong)作溶(rong)液的(de)(de)配置(zhi)等步驟，并通過產品(pin)的(de)(de)半(ban)成品(pin)檢驗和成品(pin)檢驗兩(liang)個質(zhi)控過程來保證其質(zhi)量符(fu)合規定。
1.膠體金標記物的制備(bei)
采(cai)用枸櫞酸三鈉(na)還原法或其他方法制備(bei)膠(jiao)體(ti)金(jin)，膠(jiao)體(ti)金(jin)顆粒大(da)小應符合規(gui)定(ding)，膠(jiao)體(ti)金(jin)標(biao)記物在510~560nm波長處應有最大(da)吸(xi)收值，置(zhi)2~8℃保存，應在規(gui)定(ding)的保存期(qi)內使用。采(cai)用合適的方法確定(ding)膠(jiao)體(ti)金(jin)標(biao)記物、包被抗原或抗體(ti)工作濃度(du)(du)，將工作濃度(du)(du)的膠(jiao)體(ti)金(jin)標(biao)記物吸(xi)附于玻璃(li)纖(xian)維或聚酯纖(xian)維膜上。
2.檢測線及質控線的制(zhi)備
取已確定(ding)(ding)使(shi)用(yong)(yong)濃(nong)度的(de)相關抗原(yuan)或抗體，在硝酸纖(xian)(xian)維(wei)素(su)膜(mo)(mo)上制備檢測(ce)(ce)線(xian)，應(ying)用(yong)(yong)同樣方法制備質(zhi)(zhi)控(kong)線(xian)，根據生產工藝在規(gui)(gui)定(ding)(ding)的(de)溫(wen)度、濕度條件下干燥，置規(gui)(gui)定(ding)(ding)的(de)濕度（通(tong)過驗證方法確定(ding)(ding)相對濕度要求(qiu)）條件下存放(fang)。檢測(ce)(ce)線(xian)與質(zhi)(zhi)控(kong)線(xian)應(ying)具有間(jian)隔距離要求(qiu)，應(ying)對所用(yong)(yong)的(de)金標(biao)用(yong)(yong)玻(bo)璃(li)纖(xian)(xian)維(wei)及(ji)硝酸纖(xian)(xian)維(wei)素(su)膜(mo)(mo)等(deng)進行質(zhi)(zhi)量檢測(ce)(ce)，如尺寸、外觀、包裝及(ji)吸附性能等(deng)，并記(ji)錄批號、數(shu)目、標(biao)識，不(bu)同批號的(de)玻(bo)璃(li)纖(xian)(xian)維(wei)及(ji)硝酸纖(xian)(xian)維(wei)素(su)膜(mo)(mo)不(bu)能混用(yong)(yong)。
3.貼膜(mo)、切割、裝袋
貼膜、切割及裝(zhuang)袋應在(zai)具有相應濕(shi)度（通過驗證方法確(que)定相對濕(shi)度要(yao)求(qiu)）條件下操(cao)作，切割的膜條應有寬度要(yao)求(qiu)。
（四）質量控制
用(yong)于半成(cheng)品(pin)(pin)(pin)(pin)及(ji)成(cheng)品(pin)(pin)(pin)(pin)質量(liang)控(kong)制的(de)(de)(de)質控(kong)品(pin)(pin)(pin)(pin)包括(kuo)靈敏度、特異(yi)性、精(jing)密度等(deng)指標(biao)，如具有國家(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)（參考品(pin)(pin)(pin)(pin)）的(de)(de)(de)產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)(pin)應使用(yong)國家(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)（參考品(pin)(pin)(pin)(pin)）或經(jing)國家(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)（參考品(pin)(pin)(pin)(pin)）標(biao)化的(de)(de)(de)企業(ye)參考品(pin)(pin)(pin)(pin)進行檢驗。若某(mou)類(lei)試劑(ji)沒有國家(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)(pin)(pin)(pin)（參考品(pin)(pin)(pin)(pin)），則使用(yong)企業(ye)參考品(pin)(pin)(pin)(pin)，企業(ye)參考品(pin)(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)制備應有規(gui)范的(de)(de)(de)質量(liang)控(kong)制程序，以保證產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)安全性、有效(xiao)性及(ji)質量(liang)可(ke)控(kong)，其質量(liang)應不低于國家(jia)食品(pin)(pin)(pin)(pin)藥品(pin)(pin)(pin)(pin)監督管理局(ju)已經(jing)批準(zhun)的(de)(de)(de)同類(lei)產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)質量(liang)。
1.半成品質量控制
（1）半成品抽樣
檢驗人員按批號(hao)抽取(qu)規定數量(liang)的半成品，作號(hao)標記(ji)，待檢。
（2）半成品檢驗
對所抽樣的半(ban)成品做陰/陽性(xing)參考品符合率、靈敏度、特(te)異性(xing)、精(jing)密度等試劑盒性(xing)能方面(mian)的檢測，應(ying)符合質(zhi)量標準。
企(qi)業應(ying)該對(dui)每一批試劑的(de)半成(cheng)品進(jin)行(xing)穩(wen)定性(xing)研究，并制定相應(ying)的(de)質量標準。穩(wen)定性(xing)試驗可(ke)在在特定溫度或特定條件下完成(cheng)。
2.成品質量控制
每(mei)一批(pi)(pi)金標試劑報(bao)批(pi)(pi)批(pi)(pi)量(liang)應至少為3000人份(fen)。
一般使用(yong)國家(jia)標準品(pin)(pin)（參(can)考(kao)品(pin)(pin)）對(dui)成品(pin)(pin)進行檢驗，并(bing)達到相應(ying)質(zhi)(zhi)量要(yao)求。若該診(zhen)斷試(shi)劑沒有國家(jia)標準品(pin)(pin)（參(can)考(kao)品(pin)(pin)），則使用(yong)企(qi)業參(can)考(kao)品(pin)(pin)，企(qi)業參(can)考(kao)品(pin)(pin)的(de)制備應(ying)有規范(fan)的(de)質(zhi)(zhi)量控(kong)制程序，以保(bao)證產品(pin)(pin)的(de)安(an)全性、有效性及質(zhi)(zhi)量可控(kong)，其質(zhi)(zhi)量應(ying)不(bu)低于國家(jia)食品(pin)(pin)藥品(pin)(pin)監督管(guan)理局已經批準的(de)同類產品(pin)(pin)的(de)質(zhi)(zhi)量。
（1）物理檢查
應(ying)進行(xing)(xing)外觀是否平整，材料附著是否牢固(gu)，液(ye)體(ti)移行(xing)(xing)速度，膜條寬度等物理檢(jian)查(cha)，應(ying)符(fu)合質量標準。
（2）性能(neng)方面的檢(jian)測
陰/陽性參考品(pin)符合率、靈敏度(du)、特異(yi)性、精(jing)密度(du)等試(shi)劑盒性能方面的(de)檢測，應符合質量(liang)標(biao)準。
每批試(shi)劑批放行(xing)前，應完(wan)成穩定(ding)性試(shi)驗，并達到(dao)相應的(de)質(zhi)量(liang)標準。穩定(ding)性試(shi)驗可在特(te)定(ding)溫度或特(te)定(ding)條件下完(wan)成。
四、名詞解釋
金標類檢測試劑：利(li)用膠(jiao)體(ti)金免疫技術，采用膠(jiao)體(ti)金標記(ji)的抗(kang)(kang)(kang)體(ti)或(huo)抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)包被于玻璃纖(xian)維膜、聚脂膜或(huo)其他載體(ti)，將相(xiang)關抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)固相(xiang)連接在硝(xiao)酸纖(xian)維膜，應用層析法的原(yuan)理檢(jian)測樣品中的抗(kang)(kang)(kang)原(yuan)或(huo)抗(kang)(kang)(kang)體(ti)的快速檢(jian)測試劑。
五、參考文獻：
1.《中國(guo)生物制(zhi)品規程(cheng)》（2000年版(ban)），化學工業出版(ban)社
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