生物芯片類檢測試劑主要原材料、生產工藝及質量
控制注冊技術審查指導原則（報批稿）
一、前言
本(ben)指(zhi)導原則的(de)主(zhu)要(yao)目的(de)是規范申請人(ren)對生物芯片類檢(jian)測試劑的(de)主(zhu)要(yao)原材料研究資料、生產工藝(yi)及反應體系(xi)研究資料的(de)準備(bei)，并對產品質量控制(zhi)提出指(zhi)導性技術要(yao)求。
本指導原則系對生(sheng)物芯片類(lei)檢測試(shi)劑(ji)的一般要求，申(shen)請人應依據產品(pin)特(te)性確定其中的具體(ti)內容(rong)是否適(shi)用(yong)，若不(bu)適(shi)用(yong)，需詳細闡述其理(li)由(you)及相應的科學(xue)依據。
本指(zhi)導(dao)(dao)(dao)原則是(shi)對(dui)申(shen)請人(ren)和(he)審(shen)(shen)查人(ren)員的(de)(de)指(zhi)導(dao)(dao)(dao)性文件(jian)，但(dan)不(bu)包括注冊(ce)審(shen)(shen)批所涉及的(de)(de)行政事(shi)項，亦不(bu)作(zuo)為(wei)法規強制執行，如(ru)果有能夠滿足相關(guan)法規要求的(de)(de)其它(ta)方法，也(ye)可以采(cai)用，但(dan)是(shi)需要提(ti)供詳(xiang)細的(de)(de)研究資料和(he)驗(yan)證資料。應在遵循相關(guan)法規的(de)(de)前提(ti)下使用本指(zhi)導(dao)(dao)(dao)原則。
本指導原則是在現(xian)行(xing)(xing)法規(gui)和標(biao)準體(ti)系(xi)以(yi)(yi)及當前認知水平下(xia)制(zhi)訂(ding)的(de)，隨著法規(gui)和標(biao)準的(de)不斷完善，以(yi)(yi)及科學(xue)技術(shu)的(de)不斷發展，本指導原則相關(guan)內容也將進行(xing)(xing)適(shi)時的(de)調整。
二、適用范圍
根據芯(xin)(xin)片制(zhi)作的主要原料和方法，生物芯(xin)(xin)片可分(fen)為(wei)核酸芯(xin)(xin)片、蛋(dan)白芯(xin)(xin)片、細胞(bao)芯(xin)(xin)片、組織芯(xin)(xin)片等(deng)。本指(zhi)(zhi)導原則(ze)是(shi)針對(dui)核酸和蛋(dan)白為(wei)檢測靶分(fen)子(zi)生物芯(xin)(xin)片的注冊技術審查(cha)指(zhi)(zhi)導原則(ze)，其它類(lei)型(xing)靶分(fen)子(zi)檢測的芯(xin)(xin)片診斷試劑(ji)可參(can)考本指(zhi)(zhi)導原則(ze)。
三、基本要求
（一）基本原則
1.試劑(ji)研(yan)制、生產用各(ge)種原料(liao)、輔料(liao)等應制定相應的質量標(biao)準，并符合(he)有關法規的要求。
2.試(shi)劑生(sheng)產企業應(ying)(ying)具備相應(ying)(ying)的(de)(de)(de)專業技術人員、儀器設備以及適宜的(de)(de)(de)生(sheng)產環境(jing)，獲得《醫療器械(xie)生(sheng)產許可(ke)證(zheng)》；同時，應(ying)(ying)按(an)照《體(ti)(ti)外診斷(duan)(duan)試(shi)劑生(sheng)產實施細則（試(shi)行）》的(de)(de)(de)要求建立相應(ying)(ying)的(de)(de)(de)質(zhi)量(liang)管(guan)理體(ti)(ti)系，形成文(wen)件和記錄，加以實施并保(bao)持有效(xiao)運行；還應(ying)(ying)通過(guo)《體(ti)(ti)外診斷(duan)(duan)試(shi)劑生(sheng)產企業質(zhi)量(liang)管(guan)理體(ti)(ti)系考核(he)評定(ding)標準（試(shi)行）》的(de)(de)(de)考核(he)。
3.生(sheng)物芯片類試(shi)劑在研制時(shi)，應當按(an)照科學、規(gui)范的(de)原則(ze)組織(zhi)研發，各(ge)反應條件的(de)選擇和確定應符合(he)基本的(de)科學原理(li)。
4.試劑研制、生產(chan)過(guo)程中所用的物(wu)料(liao)及工藝(yi)，應(ying)充分考(kao)慮可能涉及的安全性(xing)方面的事(shi)宜。
5.生產和質量(liang)控制的總(zong)體(ti)目標：保證(zheng)試(shi)劑使(shi)用安全、質量(liang)穩定、工藝可控、檢(jian)測有效。
（二）原材料質量控制
1.核酸檢測芯片
核(he)酸芯片(pian)檢測時，從(cong)生(sheng)物樣(yang)本中提取(qu)的核(he)酸可(ke)用(yong)熒光標(biao)記(ji)(ji)、金(jin)(jin)標(biao)記(ji)(ji)和(he)(he)酶標(biao)記(ji)(ji)；檢測方法包括光譜(pu)學(xue)方法和(he)(he)化學(xue)顯(xian)(xian)色。下(xia)面為(wei)熒光標(biao)記(ji)(ji)芯片(pian)技術指導(dao)原(yuan)則(ze)，采用(yong)金(jin)(jin)標(biao)記(ji)(ji)和(he)(he)酶聯顯(xian)(xian)色等的生(sheng)物芯片(pian)診斷試(shi)劑可(ke)參照核(he)酸芯片(pian)和(he)(he)蛋白芯片(pian)相關部(bu)分。
（1）主要生物原料
核酸檢(jian)測(ce)芯片(pian)的(de)(de)主(zhu)要(yao)生物(wu)原(yuan)(yuan)料包括模板DNA、dNTPs、引物(wu)、探(tan)針、標記物(wu)等。主(zhu)要(yao)生物(wu)原(yuan)(yuan)料若(ruo)為(wei)企業自己生產(chan)，其(qi)工藝(yi)必須相對穩定，企業應(ying)(ying)按照工藝(yi)要(yao)求對這類生物(wu)原(yuan)(yuan)料進(jin)行(xing)(xing)質(zhi)量(liang)檢(jian)驗(yan)，以保證(zheng)其(qi)達到規定的(de)(de)質(zhi)量(liang)標準；若(ruo)購買，其(qi)供應(ying)(ying)商要(yao)求相對固定，不(bu)能隨意變(bian)更供應(ying)(ying)商，同時，供應(ying)(ying)商應(ying)(ying)提供相應(ying)(ying)的(de)(de)質(zhi)量(liang)保證(zheng)證(zheng)明和相應(ying)(ying)的(de)(de)質(zhi)檢(jian)報告(gao)，達到生產(chan)規定的(de)(de)質(zhi)量(liang)標準。如果主(zhu)要(yao)原(yuan)(yuan)料（包括工藝(yi)）或其(qi)供應(ying)(ying)商有變(bian)更，應(ying)(ying)依(yi)據國家(jia)相關(guan)法規的(de)(de)要(yao)求進(jin)行(xing)(xing)變(bian)更申請。
①模板DNA
重組DNA：經測序驗(yan)證，關鍵(jian)堿基或(huo)序列沒有錯誤。1×TE溶解，濃度(du)為100ng/μl以上，-20℃保(bao)存。作為陽性(xing)參(can)考品(pin)時，其(qi)稀釋度(du)由企業根據產品(pin)標準確定。
②dNTPs（dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP）
HPLC純，PCR級，無DNase、RNase污染，-20℃以下保(bao)存。
③引物
生產中(zhong)的引(yin)物(wu)原材料為凍干(gan)粉(fen)，PAGE純或HPLC純。用標準DNA模板擴(kuo)增，電泳檢測(ce)，譜帶單(dan)一，大小(xiao)正確，與對(dui)照引(yin)物(wu)比較，產物(wu)量一致。符合視為合格引(yin)物(wu)，-20℃以(yi)下保存(cun)。
④探(tan)針（用于陣列制(zhi)備）
重組DNA, 凍干粉（或1×TE溶解液）：至少(shao)滿足一(yi)個(ge)批次的用量，酶切鑒定分(fen)析圖譜。
PCR產(chan)物，凍干粉（或1×TE溶解(jie)液）：至少滿足一(yi)個批次的用量(liang)，PCR電泳鑒定圖譜。
合(he)成(cheng)寡核苷酸：PAGE純或HPLC純，至少滿(man)足一個批次的(de)用(yong)量(liang)，提(ti)供(gong)該(gai)產品的(de)PAGE電(dian)泳分析(xi)圖譜或HPLC分析(xi)圖譜。
探針序列(lie)的正(zheng)確性：應用克隆鑒(jian)定的標準(zhun)DNA雜交鑒(jian)定或測序鑒(jian)定。
純(chun)度(du)和濃度(du)檢測(ce)：采用(yong)電(dian)泳方法，電(dian)泳圖(tu)譜(pu)沒有雜(za)帶，目(mu)的(de)條(tiao)帶的(de)強(qiang)度(du)與已知濃度(du)的(de)標準DNA條(tiao)帶進行參比計算其強(qiang)度(du)。純(chun)度(du)較高的(de)DNA，可用(yong)紫外分光(guang)光(guang)度(du)計進行定(ding)量。檢驗合(he)格后入庫，避(bi)光(guang)、-20℃以(yi)下保存(cun)。
⑤標記物
含有(you)激發光(guang)波長(chang)(chang)和發射光(guang)波長(chang)(chang)介(jie)于280~680nm的所有(you)熒光(guang)分子，HPLC純。
⑥Taq DNA聚合酶(mei)
SDS-PAGE 檢測，純度＞95%，具(ju)有DNA聚合酶活(huo)性，無核酸內切(qie)酶活(huo)性；具(ju)熱穩定性，94℃保(bao)溫1小時后仍保(bao)持(chi)50％活(huo)性。產品(pin)-20℃保(bao)存。
⑦尿嘧啶糖基(ji)化酶（UNG）
具尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內切酶活性。1U UNG 37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模板被(bei)降解(jie)后(hou)不能產生擴增產物。產品-20℃保存(cun)。
⑧逆轉錄（RT） 酶
具有逆轉錄活(huo)性，無核(he)酸(suan)內切酶(mei)活(huo)性，-20℃保存。
⑨RT-PCR酶
具(ju)逆轉錄酶(mei)(mei)(mei)活(huo)性(xing)(xing)和(he)DNA聚合酶(mei)(mei)(mei)活(huo)性(xing)(xing)，無核酸內切酶(mei)(mei)(mei)活(huo)性(xing)(xing)，具(ju)熱穩定性(xing)(xing)，94℃ 1小(xiao)時(shi)后仍保持50%活(huo)性(xing)(xing)。產品(pin)-20℃保存。
⑩緩沖液
各類酶制品所需的(de)反(fan)應緩(huan)沖液由廠家隨(sui)酶制品提供，-20℃保(bao)存。
（2）主要生物輔料
主要(yao)(yao)(yao)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物輔(fu)料包括酶類（蛋白(bai)酶、核酸(suan)酶等(deng)(deng)）、核酸(suan)提(ti)取試劑、魚(yu)精DNA、封閉用蛋白(bai)、雜交液等(deng)(deng)，企(qi)業應(ying)(ying)(ying)建立相(xiang)(xiang)應(ying)(ying)(ying)的質量(liang)(liang)標準(zhun)。主要(yao)(yao)(yao)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物輔(fu)料若(ruo)為企(qi)業自己生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產（配制），其工(gong)藝必須相(xiang)(xiang)對穩定，并(bing)按(an)照工(gong)藝要(yao)(yao)(yao)求對這類生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)物原(yuan)料進行質量(liang)(liang)檢驗(yan)，以保證其達到(dao)規定的質量(liang)(liang)標準(zhun)；若(ruo)購買，其供應(ying)(ying)(ying)商(shang)(shang)要(yao)(yao)(yao)求相(xiang)(xiang)對固定，不能(neng)隨(sui)意變更(geng)供應(ying)(ying)(ying)商(shang)(shang)，同時(shi)，供應(ying)(ying)(ying)商(shang)(shang)應(ying)(ying)(ying)提(ti)供相(xiang)(xiang)應(ying)(ying)(ying)的質量(liang)(liang)保證證明和相(xiang)(xiang)應(ying)(ying)(ying)的質檢報告(gao)，達到(dao)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產規定的質量(liang)(liang)標準(zhun)。
（3）主(zhu)要化學原輔料
化學(xue)原材料(liao)的質(zhi)量標準參(can)照《中國生(sheng)物制(zhi)品主(zhu)要原輔材料(liao)質(zhi)控標準（2000年版）》分析(xi)純級別進行檢驗。主(zhu)要的檢測指標包括：溶(rong)(rong)液外觀(guan)、一般鹽類檢測、溶(rong)(rong)液pH值(zhi)、溶(rong)(rong)解情(qing)況、干燥失重、熾灼殘渣等。
主要(yao)化學原(yuan)材料(liao)的供(gong)應商要(yao)求(qiu)相對(dui)固定，不(bu)得隨(sui)意發生(sheng)(sheng)變(bian)更(geng)。化學原(yuan)材料(liao)在(zai)購入時，原(yuan)材料(liao)的生(sheng)(sheng)產商必須提供(gong)該批次(ci)化學原(yuan)材料(liao)的質(zhi)量保證(zheng)材料(liao)和質(zhi)檢報告，其質(zhi)量標(biao)準應達到生(sheng)(sheng)產所需的質(zhi)量標(biao)準。
（4）其他物料
①載玻片
外觀：明亮處用肉眼觀察無缺刻(ke)，無劃傷等。規格按設計要求(qiu)。
激光(guang)掃描儀掃描（波長(chang)為(wei)芯(xin)片檢測波長(chang)）：包被(bei)層基本均勻。
②試管、吸頭、試劑瓶等
一次性使用，由(you)生(sheng)產廠家提供質量(liang)保證，達到設計要求。
③其他：
包(bao)括(kuo)試劑(ji)瓶標簽、鋁箔袋(dai)、襯墊(dian)、可(ke)密封塑料袋(dai)、說(shuo)明(ming)書(shu)、干燥劑(ji)和(he)(he)包(bao)裝外盒等，應(ying)(ying)參照國(guo)家食品藥品監督(du)管理(li)局頒(ban)布的《體外診斷試劑(ji)說(shuo)明(ming)書(shu)編(bian)寫指導(dao)原則》和(he)(he)《醫療器械說(shuo)明(ming)書(shu)、標簽和(he)(he)包(bao)裝標識管理(li)規定》建立相應(ying)(ying)質(zhi)量(liang)標準(zhun)。
2.蛋白檢測芯片
（1）主要生物原料
與生產的產品質(zhi)量(liang)最密(mi)切相(xiang)(xiang)關(guan)(guan)的生物(wu)(wu)原(yuan)料(liao)包括(kuo)各種天然抗原(yuan)、重組抗原(yuan)、單(dan)克隆杭體(ti)、多克隆抗體(ti)以及(ji)多肽類生物(wu)(wu)原(yuan)科(ke)。這類原(yuan)料(liao)可用于點(dian)膜、標記相(xiang)(xiang)關(guan)(guan)酶、納米金、光學基團及(ji)中(zhong)和反應(ying)(ying)用抗原(yuan)或抗體(ti)等。使用前應(ying)(ying)按照工(gong)(gong)藝要(yao)(yao)求(qiu)對這類生物(wu)(wu)原(yuan)料(liao)進行質(zhi)量(liang)檢驗，以保證其達(da)到規定(ding)的質(zhi)量(liang)標準。主要(yao)(yao)生物(wu)(wu)原(yuan)料(liao)若為企(qi)業自己(ji)生產，其工(gong)(gong)藝必須(xu)相(xiang)(xiang)對穩定(ding)；若購買(mai)，其供(gong)應(ying)(ying)商要(yao)(yao)求(qiu)相(xiang)(xiang)對固定(ding)，不能(neng)隨意變更供(gong)應(ying)(ying)商，如(ru)果主要(yao)(yao)原(yuan)料(liao)（包括(kuo)工(gong)(gong)藝）或其供(gong)應(ying)(ying)商有(you)變更，應(ying)(ying)依(yi)據(ju)國家相(xiang)(xiang)關(guan)(guan)法(fa)規的要(yao)(yao)求(qiu)變更申請。
主(zhu)要生物原料的常(chang)規檢(jian)驗項目一般包括：
① 外觀
肉(rou)眼觀(guan)察(cha)，大部分生物原(yuan)料為澄清均一液體，不含(han)異(yi)物、渾濁(zhuo)或(huo)搖不散(san)的沉淀(dian)或(huo)顆粒(li)；或(huo)者為白色粉末(mo)，不含(han)其他(ta)顏(yan)色雜質；特殊生物原(yuan)料應(ying)具備相(xiang)應(ying)外觀(guan)標準。
② 純度和分子量
生(sheng)物(wu)原料(liao)(liao)經(jing)SDS-PAGE 電泳(yong)(yong)(yong)后，利用電泳(yong)(yong)(yong)掃(sao)描(miao)儀進(jin)(jin)行(xing)(xing)分析(xi)；也可用其(qi)他適(shi)宜的(de)方法，如高(gao)效液相(xiang)法等進(jin)(jin)行(xing)(xing)分析(xi)。根據所檢測(ce)生(sheng)物(wu)原料(liao)(liao)的(de)分子量選擇適(shi)宜聚丙烯(xi)酰胺凝(ning)膠(jiao)(jiao)濃度(du)(du)(du)進(jin)(jin)行(xing)(xing)電泳(yong)(yong)(yong)。一般每個(ge)電泳(yong)(yong)(yong)道加樣量為5μg；電泳(yong)(yong)(yong)后的(de)凝(ning)膠(jiao)(jiao)可用考馬斯亮藍染(ran)色(se)(se)或銀(yin)染(ran)法染(ran)色(se)(se)。染(ran)色(se)(se)后的(de)凝(ning)膠(jiao)(jiao)用電泳(yong)(yong)(yong)掃(sao)描(miao)儀分析(xi)原料(liao)(liao)的(de)純度(du)(du)(du)和分子量，純度(du)(du)(du)應達到(dao)相(xiang)應的(de)質量標準(zhun)，分子量大小應在正(zheng)確(que)的(de)條帶位置。
③ 蛋白濃度
蛋白濃度可通(tong)過Lowry法(fa)、280nm 光吸(xi)收(shou)法(fa)、雙縮脲法(fa)或其它適(shi)宜(yi)方法(fa)進(jin)行(xing)檢測。
④ 效價
效價的測定一般(ban)根據蛋白含量測定結果，通過(guo)倍比稀釋法進行。效價應達到規(gui)定的要求。
⑤ 功能性實驗
功能性實(shi)驗是指生(sheng)物原(yuan)(yuan)料用于試(shi)劑(ji)盒實(shi)際生(sheng)產中的情況(kuang)，一般考(kao)查使用該原(yuan)(yuan)料的試(shi)劑(ji)的靈敏度、特異性和穩定性等，并比較其與(yu)上批次原(yuan)(yuan)料的相關性。
（2）主要生物輔料
生(sheng)物輔料指的是在生(sheng)產過程中作為蛋(dan)(dan)白保護劑用途的一類生(sheng)物原料，主(zhu)要(yao)包括小牛(niu)血清(qing)、山羊血清(qing)、牛(niu)血清(qing)白蛋(dan)(dan)白和(he)酪蛋(dan)(dan)白等。這些生(sheng)物原料的質量標(biao)準應符合(he)《中國生(sheng)物制(zhi)品主(zhu)要(yao)原輔材料質控標(biao)準（2000年版(ban)）》規(gui)定的質量標(biao)準要(yao)求，并且要(yao)適合(he)于企業生(sheng)產。
建議作以下檢驗：
① 牛血清或羊血清
外(wai)觀：為淺黃(huang)色澄清(qing)稍粘稠的液(ye)體，無溶血或異物
無(wu)菌試驗：將(jiang)血(xue)清直接37℃放(fang)置7天，放(fang)在明亮處觀察，不得出現(xian)混濁或(huo)沉淀。
總蛋白含(han)量：用雙縮脲(niao)法測定，標準為不小于32mg/ml。
球蛋白含(han)量：取(qu)待測血清1ml，采用飽(bao)和硫(liu)酸銨法(fa)進行沉(chen)淀(dian)。沉(chen)淀(dian)溶于(yu)0.85%NaCl溶液至1ml，用Lowry法(fa)測定蛋白含(han)量不能大(da)于(yu)2mg/ml。
② 牛血清白蛋白：
外觀：應為淺(qian)黃色(se)(se)、黃色(se)(se)或乳白色(se)(se)的(de)凍干粉末，無吸潮，無結塊，無肉眼(yan)可見的(de)其它雜質顆粒(li)。
溶解性：將(jiang)牛血(xue)清白蛋白配成10%溶液，溶解時(shi)間在18-26℃時(shi)應不大于15分鐘。pＨ值應為6.5~7.1。
總(zong)蛋白含量(liang)：用雙縮(suo)脲法(fa)測定，其標準為不小于干重的95％。
總蛋(dan)(dan)白中的BSA含量(liang)：采用硝(xiao)酸纖維素膜電泳法(fa)，其標(biao)準為(wei)不小于總蛋(dan)(dan)白含量(liang)的95%。
BSA的凈含(han)量：總蛋白(bai)含(han)量乘(cheng)總蛋白(bai)中的BSA含(han)量，其標準為不小(xiao)于(yu)90%。
③ 酪蛋白：
應符合生(sheng)產(chan)所需的質量標準。
④ 標記用酶
應(ying)在產(chan)品的(de)(de)質量(liang)標準中(zhong)明示所(suo)使用的(de)(de)標記用酶(mei)的(de)(de)名稱（如辣根過(guo)氧(yang)化物酶(mei)、堿(jian)性磷酸酶(mei)等），同時應(ying)根據不(bu)同生(sheng)產(chan)廠家的(de)(de)檢驗(yan)方法和質量(liang)標準進行檢驗(yan)，酶(mei)的(de)(de)純度RZ值（OD403nm/OD280nm）應(ying)大(da)于3.0。
對于小(xiao)牛血(xue)清或山(shan)羊(yang)血(xue)清、牛血(xue)清白蛋白以(yi)及酪蛋白等，還應(ying)進行(xing)功能性(xing)實(shi)驗，即以(yi)其為(wei)原料(liao)配制一(yi)定(ding)濃度的稀(xi)釋液作為(wei)樣品，進行(xing)測定(ding)，均(jun)不得出現非特異(yi)性(xing)反應(ying)。
生物輔料的供應(ying)商同樣要(yao)求(qiu)相對固定(ding)，不(bu)得(de)隨意變更供應(ying)商。
（3）化學原輔料
參照《中國(guo)生物制品主要原輔材料質控標準（2000年版）》分(fen)析純級別進行(xing)檢驗(yan)。主要的檢測指標包括：溶(rong)液外觀、一(yi)般鹽類、溶(rong)液pH值(zhi)、溶(rong)解情況、干燥失重、熾灼殘渣等。
主要化學原材(cai)料(liao)的(de)供應(ying)商(shang)(shang)要求相對固(gu)定，不得隨意發生變(bian)更。化學原材(cai)料(liao)在購(gou)入(ru)時，原材(cai)料(liao)的(de)生產商(shang)(shang)必須提(ti)供該批次(ci)化學原材(cai)料(liao)的(de)質(zhi)量保證材(cai)料(liao)和質(zhi)檢報告，其質(zhi)量標準應(ying)達(da)到生產所需的(de)質(zhi)量標準。
（4）其他物料
①基質
以硝酸纖(xian)維素膜為(wei)例：孔徑符(fu)合(he)設計要求（0.45μm、0.22μm等）、均一(yi)性（厚(hou)度(du)及毛(mao)細遷移速(su)度(du)±20％）、尺寸（與標識吻(wen)合(he)）
②試劑瓶和干燥劑
由生產廠家(jia)提供質(zhi)量保證，達到規(gui)定(ding)要求。
③其(qi)他：說明書(shu)、包裝外(wai)盒等
應參(can)照國家食(shi)品藥品監督管理(li)局頒布(bu)的《體外診(zhen)斷(duan)試劑說明(ming)書編寫指導(dao)原則》和(he)《醫療器械說明(ming)書、標簽和(he)包裝(zhuang)標識管理(li)規(gui)(gui)定》建立相應質量控制標準(zhun)，如數量、規(gui)(gui)格等。
（三）試劑盒各組分的生產
生(sheng)物芯(xin)(xin)片主(zhu)要包括DNA芯(xin)(xin)片、蛋白(bai)芯(xin)(xin)片、組織芯(xin)(xin)片和細胞芯(xin)(xin)片等。生(sheng)物芯(xin)(xin)片診斷(duan)試劑(ji)產品基本(ben)可分成(cheng)二個部分，一部分是芯(xin)(xin)片，另一部分檢測用工作液。如果有(you)配(pei)套的檢測儀(yi)器，還需對儀(yi)器及處理軟件的應用加(jia)以說明(ming)。
1.芯片的生產
芯(xin)片生產的基(ji)本(ben)過程包括探針的獲取方法，純(chun)化，點樣，固定。
（1）探針獲取
不同芯(xin)片，主(zhu)要是探針不同，生物芯(xin)片的探針主(zhu)要包括以(yi)下幾(ji)類，其它探針可參(can)考(kao)制(zhi)定相應(ying)的技術(shu)及質量標準。
① DNA探針(zhen)的獲取
探針(zhen)的形式包括PCR產物、克(ke)隆DNA、人工合成(cheng)DNA片(pian)段等；要求有生產程序和質量指標(biao)及(ji)檢(jian)測方法，要進行(xing)純(chun)化(hua)，有固定的純(chun)化(hua)程序。
② 抗原的生產
抗原獲得方法包括(kuo)細胞培(pei)養、從生物材料中分離(li)提取、基(ji)(ji)因工(gong)(gong)程表達(da)(da)以及(ji)合成肽等(deng)。基(ji)(ji)因工(gong)(gong)程表達(da)(da)產物又分為純抗原蛋白(bai)(bai)、融(rong)合蛋白(bai)(bai)等(deng)。
③ 抗體
抗體(ti)分單克隆(long)抗體(ti)和(he)多(duo)克隆(long)抗體(ti)。抗體(ti)制(zhi)備包(bao)括細胞培養，動物(wu)腹(fu)水，基(ji)因工程表達等方(fang)式。
④ 細胞和組織
包(bao)括細(xi)胞或組(zu)織(zhi)類(lei)型，固(gu)定方法(fa)。組(zu)織(zhi)材(cai)料包(bao)括固(gu)定，包(bao)埋，切(qie)片等。
（2）陣列的排(pai)列設計
陣(zhen)列的排列可以是依次排列、隨機(ji)排列、對角線排列以及其(qi)它排列方式，但設計時需(xu)考慮重復(fu)次數和對照(zhao)等(deng)因(yin)素。
（3）點陣的制作
使用儀器的(de)需要確定(ding)型號，程序；手(shou)工制(zhi)作(zuo)的(de)也應有標準操(cao)作(zuo)程序。
（4）固(gu)定：包括固(gu)定方式，固(gu)定條件等。
應對芯片(pian)生產(chan)的過程進(jin)行相應的質量控(kong)制，如點樣和固定過程的監控(kong)、點樣均(jun)一性檢驗等。
2.工作液配制
（1）芯片生產所需試(shi)劑(ji)，包(bao)括細胞(bao)培養基，探針制備(bei)試(shi)劑(ji)，陣列制作和固定試(shi)劑(ji)等。
（2）樣(yang)品處理(li)(li)試(shi)(shi)(shi)劑(ji)，芯片檢(jian)測(ce)(ce)靶分子分為(wei)核酸和蛋(dan)白質。檢(jian)測(ce)(ce)核酸的樣(yang)品處理(li)(li)試(shi)(shi)(shi)劑(ji)包括(kuo)臨床取樣(yang)，DNA提(ti)取或RNA提(ti)取試(shi)(shi)(shi)劑(ji)，逆轉(zhuan)錄試(shi)(shi)(shi)劑(ji)，PCR擴增試(shi)(shi)(shi)劑(ji)，核酸標記試(shi)(shi)(shi)劑(ji)等(deng)；檢(jian)測(ce)(ce)蛋(dan)白的處理(li)(li)試(shi)(shi)(shi)劑(ji)包括(kuo)取樣(yang)試(shi)(shi)(shi)劑(ji)，蛋(dan)白稀(xi)釋液以及特(te)殊試(shi)(shi)(shi)劑(ji)等(deng)。
（3）反(fan)應(ying)液(ye)(ye)(ye)：檢(jian)測核酸時的反(fan)應(ying)液(ye)(ye)(ye)包(bao)括預雜交(jiao)液(ye)(ye)(ye)，雜交(jiao)液(ye)(ye)(ye)，洗脫液(ye)(ye)(ye)等；檢(jian)測蛋(dan)白時，包(bao)括封閉(bi)液(ye)(ye)(ye)，抗原(yuan)/抗體(ti)反(fan)應(ying)液(ye)(ye)(ye)，洗脫液(ye)(ye)(ye)，顯色(se)液(ye)(ye)(ye)，顯色(se)終(zhong)止液(ye)(ye)(ye)等。
3.數據判讀
（1）判斷標準及依(yi)據，包括Cut off值(zhi)的確(que)定依(yi)據。
（2）數(shu)據判(pan)(pan)讀(du)方式：人工(gong)還是軟件(jian)判(pan)(pan)讀(du)。
（3）如果是(shi)軟件判(pan)(pan)讀(du)，應提供軟件判(pan)(pan)斷的科學(xue)依據(ju)（包括(kuo)生物(wu)學(xue)原(yuan)理、數據(ju)獲取原(yuan)理和判(pan)(pan)斷實(shi)驗是(shi)否成立的依據(ju)）以及實(shi)驗測試的原(yuan)始報告（或(huo)數據(ju)），并需要說明：
①軟件的來源：購買或自(zi)己編(bian)制，是否獲得注冊等。
②軟件的用(yong)途：包括對數據(ju)的分(fen)析、存(cun)儲、解讀、含義(yi)等。
③軟件(jian)的(de)(de)使用(yong)(yong)：基本(ben)的(de)(de)使用(yong)(yong)程序。
(四)半成品質量控制
1.抽樣
檢(jian)驗人(ren)員(yuan)按批(pi)號抽(chou)取檢(jian)驗需(xu)要(yao)數量的半成品，作好標記，待檢(jian)。
2.半成品檢驗
利用上一批檢(jian)(jian)驗合格的試劑(ji)盒的相應組分(fen)，對本批生產(chan)出的各種試劑(ji)盒組分(fen)分(fen)別進行檢(jian)(jian)驗，檢(jian)(jian)驗結果達到(dao)產(chan)品(pin)的質量(liang)標準。
半成品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)檢驗，一般使(shi)用國家(jia)標(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)（參(can)考(kao)(kao)(kao)(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)）或經(jing)(jing)國家(jia)標(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)（參(can)考(kao)(kao)(kao)(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)）標(biao)化后(hou)的企(qi)業參(can)考(kao)(kao)(kao)(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)進(jin)行。若某類試劑沒有國家(jia)標(biao)準品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)（參(can)考(kao)(kao)(kao)(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)），則(ze)使(shi)用企(qi)業參(can)考(kao)(kao)(kao)(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)，企(qi)業參(can)考(kao)(kao)(kao)(kao)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)的制備應(ying)有規范的質量控(kong)制程序，以保證(zheng)產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)的安(an)全性、有效性及(ji)質量可控(kong)，其質量應(ying)不(bu)低于國家(jia)食(shi)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)藥品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)監督管理局已經(jing)(jing)批準的同類產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)(pin)(pin)的質量。
檢(jian)測所抽樣的半(ban)成品試(shi)劑盒的性(xing)能，包括陰/陽性(xing)參考品的符合率、靈敏度(du)（最低檢(jian)出量）、精(jing)密性(xing)等，均應(ying)達到相應(ying)質量標準(zhun)(zhun)的要(yao)求(qiu)。精(jing)密性(xing)用(yong)比(bi)最低檢(jian)測限高一個數(shu)(shu)量級(ji)的質控(kong)品，重(zhong)復檢(jian)測10次，判(pan)定(ding)(ding)結果一致。對定(ding)(ding)量檢(jian)測試(shi)劑，同(tong)時應(ying)分(fen)析其線性(xing)相關系數(shu)(shu)和(he)校準(zhun)(zhun)品檢(jian)測結果的準(zhun)(zhun)確性(xing)。
企業應該(gai)對(dui)每(mei)一批(pi)試(shi)(shi)(shi)劑的半(ban)成(cheng)品(pin)進行(xing)穩定(ding)性測試(shi)(shi)(shi)。穩定(ding)性試(shi)(shi)(shi)驗可在(zai)在(zai)特(te)定(ding)溫度或(huo)特(te)定(ding)條件下完成(cheng)。對(dui)蛋白芯片(pian)，應完成(cheng)37℃熱穩定(ding)性試(shi)(shi)(shi)驗，試(shi)(shi)(shi)驗結果應符合產(chan)品(pin)的質(zhi)量(liang)標準。
(五)成品質量控制
產品包(bao)(bao)裝完成后，質(zhi)檢(jian)人(ren)員根據試劑的批號、實際包(bao)(bao)裝量(liang)、抽(chou)(chou)(chou)(chou)樣(yang)(yang)申請單(dan)的要求進行(xing)抽(chou)(chou)(chou)(chou)樣(yang)(yang)，同(tong)時填寫(xie)抽(chou)(chou)(chou)(chou)樣(yang)(yang)數量(liang)和(he)抽(chou)(chou)(chou)(chou)樣(yang)(yang)日(ri)期，并(bing)且由(you)抽(chou)(chou)(chou)(chou)樣(yang)(yang)人(ren)簽(qian)名。抽(chou)(chou)(chou)(chou)樣(yang)(yang)數量(liang)應包(bao)(bao)括檢(jian)驗用數量(liang)和(he)留樣(yang)(yang)數量(liang)。質(zhi)檢(jian)人(ren)員同(tong)時應檢(jian)查相關原始(shi)記錄。
每一批生物(wu)芯片類診斷(duan)試(shi)劑報批批量不少于2000人份。
1.成品檢驗
一般使用國(guo)(guo)家(jia)標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)（參(can)(can)考品(pin)(pin)）或經國(guo)(guo)家(jia)標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)（參(can)(can)考品(pin)(pin)）標(biao)化后的(de)(de)企(qi)業(ye)參(can)(can)考品(pin)(pin)進行。若某類(lei)試劑沒有國(guo)(guo)家(jia)標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)(pin)（參(can)(can)考品(pin)(pin)），則使用企(qi)業(ye)參(can)(can)考品(pin)(pin)，企(qi)業(ye)參(can)(can)考品(pin)(pin)的(de)(de)制備應有規范的(de)(de)質(zhi)量(liang)控(kong)制程序，以保證產品(pin)(pin)的(de)(de)安全性、有效性及質(zhi)量(liang)可控(kong)，其質(zhi)量(liang)應不(bu)低于國(guo)(guo)家(jia)食品(pin)(pin)藥(yao)品(pin)(pin)監(jian)督(du)管理局已經批準(zhun)(zhun)的(de)(de)同(tong)類(lei)產品(pin)(pin)的(de)(de)質(zhi)量(liang)。
2.穩定性試驗
試劑批(pi)(pi)放行(xing)(xing)前(qian)，應完成穩(wen)定性試驗。穩(wen)定性試驗可在特定溫(wen)度或特定條件下(xia)完成。對蛋(dan)白芯(xin)片，每批(pi)(pi)試劑批(pi)(pi)放行(xing)(xing)前(qian)，應完成37℃熱穩(wen)定性試驗，達到相應的質(zhi)量(liang)標準。
四、名詞解釋
生物芯片類檢測試劑：本指(zhi)導原則所(suo)定義的(de)(de)(de)(de)生物(wu)芯(xin)片檢(jian)測(ce)(ce)試劑(ji)是指(zhi)將多個生物(wu)探針（包括DNA片段，寡核苷(gan)酸(suan)、抗原、抗體，組織，細胞等(deng)）按預(yu)先(xian)設(she)計的(de)(de)(de)(de)排列方式固定在特制(zhi)的(de)(de)(de)(de)基質（包括玻璃片，尼(ni)龍膜，硝酸(suan)纖維素膜等(deng)）上(shang)，用(yong)特定的(de)(de)(de)(de)方法(fa)提取生物(wu)靶分(fen)(fen)子(zi)(zi)并進(jin)行(xing)標記(ji)，然后與固定在基質上(shang)的(de)(de)(de)(de)生物(wu)探針特異性(xing)的(de)(de)(de)(de)結合，再用(yong)相應的(de)(de)(de)(de)檢(jian)測(ce)(ce)設(she)備（如激光掃描(miao)儀、CCD檢(jian)測(ce)(ce)儀等(deng)）和分(fen)(fen)析(xi)方法(fa)（包括軟件）進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)(ce)、記(ji)錄、分(fen)(fen)析(xi)，實現對生物(wu)靶分(fen)(fen)子(zi)(zi)的(de)(de)(de)(de)定性(xing)或定量檢(jian)測(ce)(ce)的(de)(de)(de)(de)試劑(ji)。
五、參考文獻
1.《中國(guo)生物(wu)制(zhi)品規(gui)程》（2000年(nian)版），化學工業出(chu)版社
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