1 適用范圍
本方法規定了采用液相色譜-串聯質譜法測定化妝品中7種禁用物質：米諾地爾（CAS：38304-91-5）、氫化可的松（CAS：50-23-7）、螺內酯（CAS：52-01-7），雌酮（CAS：53-16-7）、坎利酮（CAS：976-71-6）、醋酸曲安奈德（CAS：3870-07-3）、黃體酮（CAS：57-83-0）的方法。
本方法適用化妝品中禁用物質：米諾地爾、氫化可的松、螺內酯、雌酮、坎利酮、醋酸曲安奈德、黃體酮含量的測定。 2 方法提要
樣品經過提取后，用液相色譜-串聯質譜法測定，以多反應離子監測模式進行監測，采用特征離子豐度比進行定性，待測化合物峰面積定量，以標準曲線法計算含量。本方法的檢出限、定量限和取樣品1 g時的檢出濃度、定量濃度見表1.
表1 各違禁成分的檢出限和檢出濃度 化合物 | 檢出限（ng/mL） | 定量限（ng/mL） | 檢出濃度(ng/g) | 定量濃度(ng/g) | 米諾地爾 | 0.2 | 0.5 | 2 | 5 | 氫化可的松 | 1 | 2 | 10 | 20 | 螺內酯 | 1 | 2 | 10 | 20 | 雌酮 | 5 | 10 | 50 | 100 | 坎利酮 | 1 | 2 | 10 | 20 | 醋酸曲安奈德 | 0.2 | 0.5 | 2 | 5 | 黃體酮 | 0.5 | 1 | 5 | 10 |
3 試劑和材料
除另有規定外，所用試劑均為分析純，水為去離子水。
3.1 乙腈，色譜純。
3.2 甲醇，色譜純。
3.3 乙腈溶液[φ（乙腈）= 90%]：量取10 mL水于100 mL量瓶中，加乙腈（3.1）稀釋至刻度，混勻。
3.4 米諾地爾、氫化可的松、螺內酯、雌酮、坎利酮、醋酸曲安奈德、黃體酮對照品，由中國食品藥品檢定研究院提供。
3.5 混合標準儲備溶液[r（待測成分）= 1 mg/mL]：精密稱取米諾地爾、氫化可的松、螺內酯、雌酮、坎利酮、醋酸曲安奈德、黃體酮對照品10 mg（精確至0. 1 mg）置于同一10 mL量瓶中，加甲醇（3.2）使溶解并定容至刻度，搖勻，即得質量濃度為1 mg/mL的混合標準儲備溶液。
3.6 系列濃度標準溶液：用90%乙腈（3.5）稀釋混合標準儲備溶液，精密配制得質量濃度為10、20、50、100、200、500、1000、1500 ng/mL的系列濃度標準溶液。
4 儀器
4.1 液相色譜-三重四極桿質譜聯用儀。
4.2 分析天平：感量0.0001 g
4.3 分析天平：感量0.00001 g。
4.4 超聲波清洗儀。
4.5 離心機
4.6 渦旋混合儀 5 測定步驟
5.1 樣品處理
稱取樣品約1.0 g（精確至0.001 g），置于10 mL比色管中，加入1mL飽和氯化鈉溶液，渦旋30s后加入乙腈，定容至刻度，渦旋30 s，超聲提取30 min，渦旋1 min，4500 rpm離心5 min，取上清液經0.45 μm微孔濾膜過濾后，濾液作為待測液備用。
5.2 液相色譜-三重四極桿質譜聯用分析條件
5.2.1 色譜條件
色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱 (3.5 μm, 2.1*150mm)，螺內酯和坎利酮兩個化合物色譜峰分離度要求大于1.5。
流動相：溶液A：0.2%甲酸水，溶液B：甲醇（含0.2%甲酸），梯度程序見表2
表2 流動相的梯度程序 時間（min） | 溶液A（%） | 溶液B（%） | 0 | 95 | 5 | 2 | 75 | 25 | 4 | 45 | 55 | 11 | 20 | 80 | 18 | 10 | 90 |
流速：0.3 mL/min；
柱溫：30 ℃；
進樣量：5 μL。
5.2.2 質譜參考條件
離子源：電噴霧離子源（ESI源）；
監測模式：正離子監測模式； 監測離子對及相關電壓參數設定見表3
噴霧壓力：40 psi；
干燥氣流速：8 L/min；
干燥氣溫度：325 ℃；
毛細管電壓：4000 V；
0 ～3.5 min：不進入質譜儀分析, 3.5 ～18 min：進入質譜儀分析。
表3 三重四極桿離子對及相關電壓參數設定表 編號 | 物質名稱 | 母離子（m/z） | Frag.(V) | 子離子（m/z） | CE（V） | 1 | 米諾地爾 | 210．0 | 110 | 193.2 | 10 | 110 | 164.1* | 25 | 2 | 氫化可的松 | 363.1 | 125 | 327 | 10 | 125 | 121* | 25 | 3 | 螺內酯 | 341.1 | 147 | 107.1* | 35 | 165 | 90.9 | 65 | 4 | 雌酮 | 271.2 | 105 | 253.1* | 5 | 105 | 132.8 | 22 | 5 | 坎利酮 | 341.1 | 147 | 107.1* | 35 | 165 | 90.9 | 65 | 6 | 醋酸曲安奈德 | 477.1 | 100 | 457.2* | 5 | 100 | 439.1 | 10 | 7 | 黃體酮 | 315.2 | 140 | 109 | 25 | 140 | 97* | 23 | *指定量離子對
5.3 定性判定
用液相色譜-串聯質譜法對樣品進行定性判定，在相同試驗條件下，樣品中被測禁用物質的質量色譜峰保留時間與標準溶液中對應物質的質量色譜峰保留時間一致；樣品色譜圖中所選擇的監測離子對的相對豐度比與相當濃度標準溶液的離子相對豐度比的偏差不超過表4規定范圍，則可以判斷樣品中存在對應的禁用物質。
表4 定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差
相對離子豐度（k） | k≥50% | 50 %> k ≥ 20 % | 20 %> k ≥ 10 % | k≤ 10 % | 允許的最大偏差 | ±20% | ±25% | ±30% | ±50% |
5.4 定量測定
在“5.2”項液相色譜-三重四極桿質譜聯用分析條件下，用系列濃度標準溶液（3.6）分別進樣，以禁用物質的系列濃度為橫坐標，禁用物質的峰面積為縱坐標，進行線性回歸，建立溶液標準曲線，其線性相關系數應 大于0.99。取“5.1”項下處理得到的待測溶液進樣5 μL，禁用物質的峰面積代入溶液標準曲線，計算禁用物質的質量濃度，按“6 項計算”，計算樣品中禁用物質的質量分數。
5.5 平行實驗
按以上步驟操作，對同一樣品獨立進行測定獲得的兩次獨立測試結果的絕對差值不得超過算術平均值的15%。
式中：w——化妝品中禁用物質的質量分數，μg /g；
m ——樣品取樣量，g；
r ——代入回歸方程計算得到的待測樣液中禁用物質的質量濃度，ng/mL；
V——定容體積，mL；
D—— 稀釋倍數（不稀釋則為1）。
7 回收率和精密度
多家實驗室驗證的平均方法回收率為90.4%~113.0%，相對標準偏差小于8.6%。
8 色譜圖
色譜峰：1.米諾地爾，2.氫化可的松，3.螺內酯，4.雌酮，5.坎利酮，6.醋酸曲安奈德，7.黃體酮
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