1概(gai)述(shu)

無菌藥品是指法定藥品標準中列有無菌檢查項目的制劑和原料藥，一般包括注射劑、無菌原料藥及滴眼劑等。從嚴格意義上講，無菌藥品應完全不含有任何活的微生物，但由于目前檢驗手段的局限性，絕對無菌的概念不能適用于對整批產品的無菌性評價，因此目前所使用的“無菌”概(gai)念，是概(gai)率意義(yi)上(shang)的“無菌”。一批藥(yao)品的無菌特性(xing)只能通過該批藥(yao)品中活微生物存(cun)在的概率低至某個(ge)可接受的水(shui)平，即無菌保證(zheng)水(shui)平（Sterility Assurance Level, SAL）來表征(zheng)。而(er)這種概率(lv)意義上的無(wu)菌(jun)保證取決于合理且經過驗證的滅菌工藝過程、良好的無菌保證體系以及生產過程中嚴格的GMP管理。

無菌藥品通常的滅菌方式可分為：1）濕(shi)熱滅菌；2）干(gan)熱滅菌；3）輻射滅菌(jun)；4）氣體滅菌；5）除菌過(guo)濾。按工藝的不同分(fen)為最終滅菌工藝（sterilizing process）和無菌生產(chan)工藝(yi)（aseptic processing）。其中最終(zhong)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)工(gong)藝系指將完成最終(zhong)密封的產(chan)品進(jin)行適當滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)的工(gong)藝，由(you)此生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)的無(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)制劑稱(cheng)為(wei)最終(zhong)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)藥(yao)品，濕熱滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)和輻射滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)均屬于此范疇(chou)。無(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)工(gong)藝系指在(zai)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)環境條件(jian)下(xia)，通過(guo)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)操作來生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)藥(yao)品的方法(fa)，除菌(jun)(jun)(jun)過(guo)濾和無(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)均屬于無(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)工(gong)藝。部分或全部工(gong)序(xu)采用無(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)生(sheng)(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)工(gong)藝的藥(yao)品稱(cheng)為(wei)非最終(zhong)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)無(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)藥(yao)品。基于無(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)藥(yao)品滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)/除(chu)菌生產工(gong)藝(yi)的(de)(de)現(xian)狀，本(ben)指導原(yuan)則(ze)主(zhu)要對(dui)在注射劑與(yu)(yu)無菌(jun)(jun)原(yuan)料(liao)藥(yao)的(de)(de)生產中比較常用的(de)(de)濕(shi)熱滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)與(yu)(yu)無菌(jun)(jun)生產工(gong)藝(yi)進行(xing)討(tao)論。本(ben)指導原(yuan)則(ze)中的(de)(de)濕(shi)熱滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)工(gong)藝(yi)驗(yan)證主(zhu)要包括滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)條件的(de)(de)篩選和研究，濕(shi)熱滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)的(de)(de)物理確認，生物指示劑確認等內容(rong)；無菌(jun)(jun)生產工(gong)藝(yi)驗(yan)證主(zhu)要包括無菌(jun)(jun)分(fen)裝、除(chu)菌(jun)(jun)過(guo)濾(lv)、培養(yang)基(ji)模擬灌裝、過(guo)濾(lv)系統(tong)的(de)(de)驗(yan)證等驗(yan)證內容(rong)。

最終滅菌工藝和無菌生產工藝實現產品無菌的方法有本質上的差異，從而決定了由這兩類工藝生產的產品應該達到的最低無菌保證水平的巨大差異。最終滅菌無菌產品的無菌保證水平為殘存微生物污染概率≤10-6，非最終滅菌無菌產品的無菌保證水平至少應達到95%置信限下的污染概(gai)率<0.1%。由此可見，非最終滅(mie)菌(jun)無(wu)菌(jun)產(chan)(chan)品存在微(wei)生物污(wu)染的(de)概率遠(yuan)遠(yuan)高(gao)于最終滅(mie)菌(jun)無(wu)菌(jun)產(chan)(chan)品，為(wei)盡量減(jian)少(shao)非最終滅(mie)菌(jun)無(wu)菌(jun)產(chan)(chan)品污(wu)染微(wei)生物的(de)概率，鼓(gu)勵(li)企業在生產(chan)(chan)中(zhong)采(cai)用隔離艙等先進(jin)技(ji)術設備。

基于質(zhi)量源(yuan)于設計(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)品(pin)研(yan)發(fa)(fa)(fa)與(yu)質(zhi)量控(kong)制的(de)(de)(de)(de)(de)理念，為保(bao)(bao)(bao)證(zheng)(zheng)(zheng)無菌(jun)(jun)藥(yao)品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)無菌(jun)(jun)保(bao)(bao)(bao)證(zheng)(zheng)(zheng)水(shui)(shui)平(ping)符合要求，研(yan)發(fa)(fa)(fa)者在產(chan)(chan)品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)研(yan)發(fa)(fa)(fa)過程中(zhong)(zhong)應根據(ju)藥(yao)品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)特性(xing)選擇合適(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)方式，并系統(tong)地評估(gu)生(sheng)(sheng)產(chan)(chan)的(de)(de)(de)(de)(de)各環節及各種(zhong)因(yin)素對無菌(jun)(jun)保(bao)(bao)(bao)證(zheng)(zheng)(zheng)水(shui)(shui)平(ping)的(de)(de)(de)(de)(de)影響(xiang)，根據(ju)風(feng)險的(de)(de)(de)(de)(de)高低與(yu)風(feng)險發(fa)(fa)(fa)生(sheng)(sheng)的(de)(de)(de)(de)(de)可能性(xing)等(deng)來(lai)針對性(xing)地驗證(zheng)(zheng)(zheng)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)工藝(yi)(yi)的(de)(de)(de)(de)(de)可靠(kao)性(xing)，驗證(zheng)(zheng)(zheng)的(de)(de)(de)(de)(de)內容、范圍(wei)與(yu)批數等(deng)取決(jue)于工藝(yi)(yi)與(yu)產(chan)(chan)品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)復雜性(xing)以及生(sheng)(sheng)產(chan)(chan)企業對類似工藝(yi)(yi)的(de)(de)(de)(de)(de)經驗多少等(deng)因(yin)素。只有在研(yan)發(fa)(fa)(fa)中(zhong)(zhong)經過系統(tong)而(er)深入的(de)(de)(de)(de)(de)研(yan)究與(yu)驗證(zheng)(zheng)(zheng)，獲得可靠(kao)的(de)(de)(de)(de)(de)滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)工藝(yi)(yi)，并在日常的(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)產(chan)(chan)過程中(zhong)(zhong)嚴格執行該(gai)工藝(yi)(yi)，才能真(zhen)正保(bao)(bao)(bao)證(zheng)(zheng)(zheng)每批藥(yao)品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)無菌(jun)(jun)保(bao)(bao)(bao)證(zheng)(zheng)(zheng)水(shui)(shui)平(ping)符合預期的(de)(de)(de)(de)(de)要求。當然，在藥(yao)品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)整個生(sheng)(sheng)命周期內，隨著對所(suo)生(sheng)(sheng)產(chan)(chan)的(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)品(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)特性(xing)和(he)(he)生(sheng)(sheng)產(chan)(chan)工藝(yi)(yi)等(deng)的(de)(de)(de)(de)(de)了(le)解越來(lai)越全面和(he)(he)深入，滅(mie)(mie)菌(jun)(jun)工藝(yi)(yi)也在不斷的(de)(de)(de)(de)(de)完(wan)善，此時就會涉及到對變更后(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)工藝(yi)(yi)如何進行驗證(zheng)(zheng)(zheng)的(de)(de)(de)(de)(de)問題，本指導原則(ze)也適(shi)用于此種(zhong)情況。

由于滅菌/除菌工(gong)藝驗證的工(gong)作(zuo)(zuo)(zuo)在我國開展的時間不(bu)長，基礎還不(bu)牢靠，因(yin)此(ci)必然在實(shi)(shi)際工(gong)作(zuo)(zuo)(zuo)中(zhong)會遇到(dao)很多難以(yi)預料的問(wen)題(ti)(ti)，故本(ben)指導原則(ze)只是一(yi)個一(yi)般性原則(ze)，藥(yao)物(wu)(wu)研(yan)發(fa)者應從藥(yao)物(wu)(wu)研(yan)發(fa)的客觀規律出發(fa)，具體問(wen)題(ti)(ti)具體分析，必要(yao)時根據實(shi)(shi)際情況采用(yong)其他有(you)效的方法(fa)和手段(duan)。同時，本(ben)指導原則(ze)作(zuo)(zuo)(zuo)為階(jie)段(duan)性產物(wu)(wu)，必將隨著藥(yao)物(wu)(wu)研(yan)究者與(yu)評價者對滅菌工(gong)藝研(yan)究與(yu)驗證的認知加深，而(er)不(bu)斷(duan)進行(xing)修訂(ding)與(yu)完善。

2制劑濕熱滅菌工藝

2.1濕(shi)熱滅(mie)菌(jun)工藝的研究(jiu)

2.1.1 濕熱滅菌(jun)工藝(yi)的確定依(yi)據

滅菌工藝的選擇一般按照滅菌工藝的決策樹（詳見附件1）進行，濕(shi)(shi)熱(re)滅菌工(gong)(gong)(gong)藝是決(jue)策(ce)樹中(zhong)首(shou)先(xian)考(kao)(kao)慮的(de)(de)(de)滅菌工(gong)(gong)(gong)藝。濕(shi)(shi)熱(re)滅菌法是利用(yong)高(gao)壓飽(bao)和(he)蒸(zheng)汽、過熱(re)水噴淋(lin)等手段使微生(sheng)(sheng)物(wu)菌體中(zhong)的(de)(de)(de)蛋白質、核酸發生(sheng)(sheng)變性而殺(sha)滅微生(sheng)(sheng)物(wu)的(de)(de)(de)方法。高(gao)溫在殺(sha)滅微生(sheng)(sheng)物(wu)的(de)(de)(de)同(tong)時(shi)，可(ke)能(neng)對藥品的(de)(de)(de)質量也有(you)所(suo)影響(xiang)。如果產(chan)品不能(neng)耐受濕(shi)(shi)熱(re)滅菌，則需要考(kao)(kao)慮采用(yong)無菌生(sheng)(sheng)產(chan)工(gong)(gong)(gong)藝。所(suo)以，對于藥品的(de)(de)(de)滅菌工(gong)(gong)(gong)藝的(de)(de)(de)考(kao)(kao)察(cha)和(he)確定，首(shou)先(xian)是考(kao)(kao)察(cha)其能(neng)否(fou)采用(yong)濕(shi)(shi)熱(re)滅菌工(gong)(gong)(gong)藝，能(neng)否(fou)耐受濕(shi)(shi)熱(re)滅菌的(de)(de)(de)高(gao)溫。

目前濕熱滅菌方法主要有兩種：過度殺滅法（F0≥12）和殘存概率法（8≤F0<12）。用其它F0值小于8的終(zhong)端滅菌條件的工(gong)藝，則(ze)應該按照無(wu)菌生產工(gong)藝要求(qiu)。

以(yi)(yi)(yi)上(shang)兩種(zhong)濕(shi)(shi)熱(re)滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)(jun)方(fang)法(fa)都可以(yi)(yi)(yi)在實際生產(chan)中使(shi)用(yong)，具體(ti)選擇哪(na)種(zhong)滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)(jun)方(fang)法(fa)，在很大程(cheng)度上(shang)取決于被滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)(jun)產(chan)品的熱(re)穩定性(xing)(xing)。藥(yao)(yao)物是否(fou)能耐受(shou)濕(shi)(shi)熱(re)滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)(jun)工藝的高溫，除了(le)與藥(yao)(yao)物活(huo)性(xing)(xing)成分(fen)的化學性(xing)(xing)質(zhi)相(xiang)關外，還與活(huo)性(xing)(xing)成分(fen)存在的環境密切相(xiang)關，所(suo)以(yi)(yi)(yi)在初期的工藝設計過程(cheng)中需要通過對藥(yao)(yao)物熱(re)穩定性(xing)(xing)進行綜合(he)分(fen)析，以(yi)(yi)(yi)確定能否(fou)采用(yong)濕(shi)(shi)熱(re)滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)(jun)工藝。

2.1.1.1活(huo)性(xing)成分的化學結(jie)構特點與穩定性(xing)

通(tong)過(guo)對活(huo)(huo)性(xing)(xing)成(cheng)分(fen)的(de)化(hua)學結構進行分(fen)析，可(ke)以初步(bu)判斷活(huo)(huo)性(xing)(xing)成(cheng)分(fen)的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)(xing)，如果活(huo)(huo)性(xing)(xing)成(cheng)分(fen)結構中(zhong)含有一些對熱不(bu)穩(wen)定(ding)的(de)結構基(ji)團(tuan)，則提(ti)示主成(cheng)分(fen)的(de)熱穩(wen)定(ding)性(xing)(xing)可(ke)能(neng)較差(cha)。在(zai)此基(ji)礎(chu)之上，還應該通(tong)過(guo)設計(ji)一系(xi)列的(de)強制降解試驗對活(huo)(huo)性(xing)(xing)成(cheng)分(fen)的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)(xing)做進一步(bu)研究確認，了解活(huo)(huo)性(xing)(xing)成(cheng)分(fen)在(zai)各種條件(jian)下可(ke)能(neng)發生的(de)降解反應，以便在(zai)處(chu)方工(gong)藝的(de)研究中(zhong)采取針對性(xing)(xing)的(de)措(cuo)施(shi)，保障(zhang)產(chan)品能(neng)夠(gou)采用濕(shi)熱滅菌工(gong)藝。

2.1.1.2 處方工藝的研究

在對活性成分的結構特點與穩定性進行研究的基礎上，可以有針對性的進行處方工藝的優化研究。如活性成分易發生氧化反應，則需要考慮是否需要在工藝中去除氧并采取充氮的生產工藝，或在處方中加入適宜的抗氧劑；如活性成分的穩定性與pH值相關，則需要(yao)通過研(yan)究尋(xun)找最利(li)于主成分(fen)穩定性的pH值，當然此時需(xu)要關注該pH值在(zai)臨床(chuang)治療時(shi)能(neng)否接(jie)受；如果(guo)主(zhu)成(cheng)分(fen)是因為(wei)某些(xie)雜質(zhi)的(de)存在(zai)影響了穩定(ding)性(xing)，則(ze)需要通過(guo)適宜的(de)手段去除相(xiang)關的(de)雜質(zhi)；如果(guo)是主(zhu)成(cheng)分(fen)在(zai)某種溶(rong)劑系(xi)(xi)統中穩定(ding)性(xing)較差，則(ze)需要考(kao)慮(lv)更換溶(rong)劑系(xi)(xi)統，此時(shi)同樣需要考(kao)慮(lv)所(suo)(suo)選(xuan)用的(de)溶(rong)劑系(xi)(xi)統在(zai)臨床(chuang)應用時(shi)能(neng)否被接(jie)受；濕熱滅(mie)菌(jun)的(de)不同滅(mie)菌(jun)溫度和滅(mie)菌(jun)時(shi)間的(de)組合對產品的(de)穩定(ding)性(xing)的(de)要求有所(suo)(suo)不同，可以在(zai)保(bao)證(zheng)提供所(suo)(suo)需的(de)SAL的基礎上(shang)，通過滅菌時間和滅菌溫(wen)度的調整來確定(ding)藥物可以耐受(shou)的濕熱滅菌工藝。

總之(zhi)(zhi)，需要通過各個方面的(de)(de)研究(jiu)，使藥物盡(jin)可(ke)(ke)能的(de)(de)可(ke)(ke)以采用濕(shi)熱滅(mie)菌(jun)工藝(yi)。只有在(zai)理論和實踐均證明即(ji)使采用了各種可(ke)(ke)行的(de)(de)技術(shu)方法之(zhi)(zhi)后，活(huo)性成分(fen)依然無法耐受(shou)濕(shi)熱滅(mie)菌(jun)的(de)(de)工藝(yi)時，才能選(xuan)擇無菌(jun)保證水平(ping)較低的(de)(de)無菌(jun)生產工藝(yi)。

2. 2.1.3穩定(ding)性研究

無論使用何種設計方法，都需要進行最終滅菌產品的穩定性研究。考察最終滅菌程序對產品性質穩定性影響的試驗可包括產品的降解、含量、pH值、顏色(se)、緩沖能力(li)以(yi)及產品的其它質(zhi)量特性。

滅菌時，殺滅微生物的效果和活性成分的降解都隨著時間和溫度而累積。這意味著加熱和冷卻的變化將影響產品的穩定性，同時影響殺滅效果。因此，穩定性研究用樣品最好選取處于最苛刻的滅菌條件的產品，如：可采用在熱穿透試驗中F0最大的位置(zhi)上(shang)滅菌的產(chan)品進行(xing)穩(wen)定(ding)性考察，以確保滅菌產品的質量仍能符合要求。

2.1.2過度殺滅法(fa)的工藝研(yan)究(jiu)

通常(chang)來說(shuo)，與殘存概率法相比，過度(du)滅(mie)殺(sha)法所需的(de)被(bei)滅(mie)菌品開始(shi)生產階(jie)段(duan)和日常(chang)監(jian)控階(jie)段(duan)生物負荷的(de)信息較少，但是過度(du)殺(sha)滅(mie)要求的(de)熱能比較大(da)，其(qi)后(hou)果(guo)是被(bei)滅(mie)菌品降(jiang)解(jie)的(de)可能性增大(da)。

過度殺滅法的目標是確保達到一定程度的無菌保證水平，而不管被滅菌產品初始菌的數量及其耐熱性如何。過度殺滅法假設的生物負荷和耐熱性都高于實際數，而大多數微生物的耐熱性都比較低，很少發現自然生成的微生物的D121℃值大于0.5分鐘(zhong)。因此(ci)，過度殺(sha)滅的(de)滅菌程序(xu)理論上能(neng)完全(quan)殺(sha)滅微生物，從而能提供很高(gao)的無菌(jun)(jun)保證值。由于(yu)該方法已經(jing)對生物負荷及(ji)耐(nai)熱性(xing)作了(le)最(zui)壞的假設，從技術角度(du)看，對被滅(mie)菌(jun)(jun)品進行初始菌(jun)(jun)監控(kong)就沒有多大必要了(le)。

但這并不意味著生產過程中對污染可以完全不加控制。僅從控制熱原的角度，也應當遵循工藝衛生規范，控制產品的微生物污染。如果實際生產中能夠嚴格遵循GMP的要求(qiu)，這一點是可以實(shi)現的。

2.1.3殘存(cun)概率法的工藝研究

與過度殺滅法相比，殘存概率法方法所需的信息量要大得多，包括被滅菌品生產開始階段及常規生產階段的信息、指示菌（對滅菌程序呈現強耐熱性的試驗菌）以及生物負荷的信息。只有積累了這類有價值的信息后，才能制定比過度殺滅法F0值低(di)的熱力滅菌程序，同時產(chan)(chan)品(pin)(pin)的無(wu)菌保證水平不(bu)會(hui)降低(di)。使(shi)用熱力較(jiao)低(di)滅菌程序更有利于(yu)藥(yao)品(pin)(pin)的穩(wen)定性(xing)，使(shi)產(chan)(chan)品(pin)(pin)的有效期(qi)延長(chang)。正是因為(wei)這個(ge)原因，殘(can)存概率法更適合那(nei)些處(chu)方(fang)耐熱性(xing)較(jiao)差(cha)的最終滅菌產(chan)(chan)品(pin)(pin)。

通(tong)常說來，不耐(nai)熱藥品的(de)(de)滅(mie)菌(jun)可(ke)(ke)(ke)能不能使用過度殺滅(mie)法，需要(yao)設計一(yi)個(ge)滅(mie)菌(jun)程序(xu)能夠恰當地殺滅(mie)生物負荷，同時不導致產(chan)品不可(ke)(ke)(ke)接受的(de)(de)降(jiang)解。這(zhe)種情(qing)況下，滅(mie)菌(jun)程序(xu)的(de)(de)確認就需研(yan)究產(chan)品的(de)(de)生物負荷和耐(nai)熱性。根據以下公式可(ke)(ke)(ke)以比(bi)較清楚的(de)(de)說明這(zhe)一(yi)點：

無菌保證值= F0 / D - lgN0

其中，無菌保證值是SAL的負對數，N0為滅菌開始時產品中的污染微生物總數，D為污染(ran)微生(sheng)物的耐熱參數。所以，菌工藝的無菌保證值與F0、N0、D密切相關。

2.1.3.1 滅菌前生(sheng)物負荷(he)的控(kong)制

采用殘(can)存概率法(fa)進行終(zhong)端滅菌(jun)的(de)產品(pin)，除了需要關注滅菌(jun)過程(cheng)本身，還需要在生產過程(cheng)中采用一些適當的(de)手段來監(jian)測和控(kong)制藥品(pin)滅菌(jun)前的(de)生物(wu)負荷。具體(ti)的(de)措施(shi)通常包括滅菌(jun)前微生物(wu)數量(liang)與(yu)耐熱性的(de)監(jian)測、藥液過濾、工藝參數的(de)控(kong)制等等。

滅(mie)(mie)菌(jun)前微(wei)生物污(wu)染水平(ping)的(de)(de)(de)(de)監測將在(zai)下面的(de)(de)(de)(de)章(zhang)節詳細闡述。產(chan)品(pin)過(guo)濾在(zai)終端(duan)滅(mie)(mie)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)產(chan)品(pin)中僅僅作為(wei)輔助的(de)(de)(de)(de)控制(zhi)(zhi)手段，但是在(zai)工(gong)藝(yi)確定的(de)(de)(de)(de)過(guo)程中，也(ye)應該對濾膜的(de)(de)(de)(de)孔徑、材(cai)質(zhi)、濾器(qi)的(de)(de)(de)(de)使用周期(qi)(qi)進(jin)行(xing)必要的(de)(de)(de)(de)篩選。在(zai)工(gong)藝(yi)參(can)數控制(zhi)(zhi)方面，由于微(wei)生物的(de)(de)(de)(de)特性，通常在(zai)藥液(ye)(ye)放置(zhi)期(qi)(qi)間也(ye)會(hui)逐(zhu)漸繁(fan)殖，尤其一些(xie)營(ying)養型的(de)(de)(de)(de)注(zhu)(zhu)射液(ye)(ye)，如葡萄糖注(zhu)(zhu)射液(ye)(ye)、復方氨(an)基酸注(zhu)(zhu)射液(ye)(ye)等，其環境更有利于微(wei)生物的(de)(de)(de)(de)生長(chang)和繁(fan)殖，因此應通過(guo)工(gong)藝(yi)篩選和驗證來確定溶(rong)液(ye)(ye)配制(zhi)(zhi)至過(guo)濾前、以及過(guo)濾后至滅(mie)(mie)菌(jun)前能夠放置(zhi)的(de)(de)(de)(de)最長(chang)時限，并(bing)相(xiang)應確定產(chan)品(pin)的(de)(de)(de)(de)批(pi)量、生產(chan)周期(qi)(qi)等關鍵工(gong)藝(yi)參(can)數。

2.1.3.2 滅菌前微生物污染的監測

滅菌前微生物污染水平的監測應在正常生產過程中取樣并覆蓋整個生產過程，取樣設計應選取生產過程中污染最大，最有代表性的樣品，且要充分考慮到產品從灌封到滅菌前的放置時間。一般而言，如果灌裝持續一段時間，可從每批產品灌裝開始、中間及結束時分別取樣。污染水平檢查可以采用如下的方法：先用滅菌的5%吐(tu)溫(wen)充分濕潤0.45um的濾(lv)膜，然后定(ding)量(liang)過(guo)濾(lv)藥液，將此濾(lv)膜移至營養瓊脂平板上，在30~35℃下培養3~7天(tian)，計數。

分離獲得的污染菌需要進行耐熱性的檢查。污染菌的耐熱性檢查可以采用以下的測定方法：先用滅菌的5%吐溫充分潤濕(shi)0.45um 的濾膜，然后過濾污(wu)染水(shui)平監測(ce)(ce)所取的藥液樣(yang)品(pin)，再將此膜移(yi)至裝有無菌的待監測(ce)(ce)產品(pin)的試(shi)管中，在沸水(shui)浴上煮沸約30分鐘，然后在30-35℃下在(zai)硫乙醇(chun)酸鹽肉湯中培養，觀察是否有耐熱菌生長(chang)。

當耐熱性檢查發現藥液存在耐熱污染菌污染時，可采用定時煮沸法將它和已知的生物指示劑的耐熱性加以比較，必要時，可再測試耐熱污染菌的D值（D值的具體(ti)檢測方法詳見附件2），然后根據(ju)滅菌的F0值及污染(ran)(ran)菌(jun)(jun)(jun)的數量與耐熱性對(dui)產品的無菌(jun)(jun)(jun)做出評(ping)價。當產品微生物污染(ran)(ran)水平超(chao)標準時，應(ying)對(dui)污染(ran)(ran)菌(jun)(jun)(jun)進行鑒(jian)別、調查污染(ran)(ran)菌(jun)(jun)(jun)的來源并采用(yong)相(xiang)應(ying)的糾正措(cuo)施(shi)。

2.2濕熱滅菌工(gong)藝的驗證

濕(shi)熱(re)滅(mie)菌工藝的驗(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)一(yi)般(ban)分為(wei)物(wu)理(li)驗(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)和生物(wu)學(xue)驗(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)兩(liang)部(bu)分，物(wu)理(li)驗(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)包括熱(re)分布(bu)、熱(re)穿透試(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)(yan)，生物(wu)學(xue)驗(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)主(zhu)要是(shi)微生物(wu)挑戰試(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)(yan)。物(wu)理(li)驗(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)(zheng)是(shi)證(zheng)(zheng)實滅(mie)菌效(xiao)果的間接方(fang)式，而微生物(wu)挑戰試(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)(yan)則直(zhi)接反映滅(mie)菌的效(xiao)果，兩(liang)者不能相(xiang)互替代。

2.2.1物理確認

2.2.1.1空載熱分布試驗

空(kong)載熱(re)分布的(de)(de)目(mu)的(de)(de)是主要是了解整(zheng)個滅(mie)(mie)菌(jun)設備(bei)的(de)(de)運(yun)行(xing)情況，確認滅(mie)(mie)菌(jun)室(shi)內的(de)(de)溫(wen)(wen)(wen)(wen)度(du)均勻(yun)性，測(ce)定滅(mie)(mie)菌(jun)腔(qiang)內不(bu)同位(wei)置(zhi)的(de)(de)溫(wen)(wen)(wen)(wen)差狀況，確定可能存在(zai)的(de)(de)冷點。空(kong)載熱(re)分布試驗通常采用(yong)足夠(gou)數量的(de)(de)熱(re)電(dian)偶或熱(re)電(dian)阻作(zuo)溫(wen)(wen)(wen)(wen)度(du)探(tan)(tan)頭(tou)(tou)(tou)，進行(xing)編號后將(jiang)它們固定在(zai)滅(mie)(mie)菌(jun)柜(ju)腔(qiang)室(shi)的(de)(de)不(bu)同位(wei)置(zhi)。溫(wen)(wen)(wen)(wen)度(du)探(tan)(tan)頭(tou)(tou)(tou)的(de)(de)安(an)放(fang)位(wei)置(zhi)需要根據設備(bei)類型和不(bu)同位(wei)置(zhi)下的(de)(de)滅(mie)(mie)菌(jun)風險評估而定，應(ying)包括可能的(de)(de)高溫(wen)(wen)(wen)(wen)點、低溫(wen)(wen)(wen)(wen)點，滅(mie)(mie)菌(jun)柜(ju)溫(wen)(wen)(wen)(wen)度(du)控制探(tan)(tan)頭(tou)(tou)(tou)處、靠近溫(wen)(wen)(wen)(wen)度(du)記錄(lu)探(tan)(tan)頭(tou)(tou)(tou)處，其(qi)他的(de)(de)探(tan)(tan)頭(tou)(tou)(tou)可以(yi)(yi)均勻(yun)地分布于(yu)滅(mie)(mie)菌(jun)柜(ju)腔(qiang)室(shi)內，以(yi)(yi)使溫(wen)(wen)(wen)(wen)度(du)的(de)(de)檢(jian)測(ce)具有(you)較(jiao)好的(de)(de)代表(biao)性。溫(wen)(wen)(wen)(wen)度(du)探(tan)(tan)頭(tou)(tou)(tou)在(zai)試驗前(qian)后至(zhi)少需要兩(liang)個溫(wen)(wen)(wen)(wen)度(du)點進行(xing)校(xiao)正。溫(wen)(wen)(wen)(wen)度(du)探(tan)(tan)頭(tou)(tou)(tou)安(an)放(fang)結束后，即可以(yi)(yi)按照設定的(de)(de)滅(mie)(mie)菌(jun)程序進行(xing)滅(mie)(mie)菌(jun)。

2.2.1.2裝載熱分布試驗

裝(zhuang)載(zai)(zai)熱(re)分(fen)布(bu)(bu)試驗(yan)的(de)(de)目的(de)(de)是了(le)解(jie)設備(bei)在(zai)(zai)裝(zhuang)載(zai)(zai)條件下內(nei)部的(de)(de)溫(wen)度分(fen)布(bu)(bu)狀(zhuang)況(kuang)，包(bao)括高溫(wen)點(dian)(dian)、低溫(wen)點(dian)(dian)的(de)(de)位置，為后續的(de)(de)評估和驗(yan)證打下基礎。裝(zhuang)載(zai)(zai)熱(re)分(fen)布(bu)(bu)一(yi)般(ban)在(zai)(zai)空(kong)載(zai)(zai)熱(re)分(fen)布(bu)(bu)的(de)(de)基礎上(shang)進行。溫(wen)度探頭(tou)的(de)(de)個(ge)數和安放(fang)的(de)(de)位置一(yi)般(ban)同空(kong)載(zai)(zai)熱(re)分(fen)布(bu)(bu)試驗(yan)，注意一(yi)定要在(zai)(zai)空(kong)載(zai)(zai)熱(re)分(fen)布(bu)(bu)試驗(yan)確定的(de)(de)冷點(dian)(dian)安放(fang)溫(wen)度探頭(tou)。溫(wen)度探頭(tou)安放(fang)在(zai)(zai)待(dai)(dai)滅(mie)菌的(de)(de)容(rong)器的(de)(de)周圍(wei)，注意不能介入(ru)待(dai)(dai)滅(mie)菌的(de)(de)容(rong)器。

裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)載熱分布(bu)試(shi)驗(yan)需要考慮最大、最小和(he)(he)生(sheng)產(chan)過程中(zhong)典型(xing)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)載量情況(kuang)，進行(xing)試(shi)驗(yan)時，應盡可(ke)能使用(yong)(yong)待滅菌(jun)(jun)產(chan)品(pin)(pin)(pin)，如(ru)果(guo)采(cai)用(yong)(yong)類(lei)似物(wu)，應結合產(chan)品(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)熱力學性(xing)質等(deng)進行(xing)適(shi)當的(de)(de)(de)風(feng)險評(ping)估(gu)。待滅菌(jun)(jun)產(chan)品(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)載方(fang)式(shi)和(he)(he)滅菌(jun)(jun)工藝的(de)(de)(de)各項參數(shu)的(de)(de)(de)設定應與(yu)正(zheng)常生(sheng)產(chan)時一(yi)致，應采(cai)用(yong)(yong)圖表(biao)的(de)(de)(de)方(fang)式(shi)說明產(chan)品(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)載情況(kuang)，并評(ping)估(gu)探(tan)頭放置是否合理(li)。如(ru)果(guo)待滅菌(jun)(jun)產(chan)品(pin)(pin)(pin)存在不同(tong)包(bao)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)規(gui)格(ge)或濃度規(gui)格(ge)，應評(ping)估(gu)驗(yan)證所采(cai)用(yong)(yong)的(de)(de)(de)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)和(he)(he)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)載方(fang)式(shi)是否能充分反映所有(you)樣(yang)品(pin)(pin)(pin)的(de)(de)(de)實際裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)載情況(kuang)。每一(yi)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)載量的(de)(de)(de)熱分布(bu)試(shi)驗(yan)需要至少(shao)進行(xing)三次。溫度探(tan)頭在試(shi)驗(yan)前后同(tong)樣(yang)均需要進行(xing)校正(zheng)。

2.2.1.3 熱(re)穿透試驗(yan)

熱穿透試驗是考察滅菌柜和滅菌程序對待滅菌產品適用性的一項試驗。熱穿透試驗的目的是確認產品內部也能達到預定的滅菌溫度。對于藥物而言，滅菌程序既要賦予產品一定的F0值，以保障產品的SAL≤10－6&nbsp;。同時(shi)滅菌程序又(you)不應使產品受(shou)熱過度而(er)造成藥物部(bu)分降解，以致同一(yi)滅菌批次的產品出(chu)現質量(liang)不均一(yi)。

熱(re)穿(chuan)透試驗所用的(de)溫(wen)(wen)度(du)(du)探(tan)(tan)(tan)頭(tou)的(de)個(ge)數(shu)和安放位置(zhi)需要根據(ju)熱(re)分(fen)布試驗的(de)結果確(que)定(ding)。一般(ban)可以采(cai)用足夠數(shu)量的(de)溫(wen)(wen)度(du)(du)探(tan)(tan)(tan)頭(tou)。應(ying)將熱(re)穿(chuan)透溫(wen)(wen)度(du)(du)探(tan)(tan)(tan)頭(tou)置(zhi)于液體容(rong)器(qi)中(zhong)的(de)冷(leng)點，即整(zheng)個(ge)包裝中(zhong)最難滅菌的(de)位置(zhi)。如果有(you)數(shu)據(ju)支(zhi)持(chi)或有(you)證據(ju)表明將探(tan)(tan)(tan)頭(tou)放在產品(pin)包裝之外也能(neng)夠反映出產品(pin)的(de)熱(re)穿(chuan)透情況，風險能(neng)夠充分(fen)得到控制，也可以考慮將探(tan)(tan)(tan)頭(tou)放在容(rong)器(qi)之外。插有(you)溫(wen)(wen)度(du)(du)探(tan)(tan)(tan)頭(tou)的(de)產品(pin)的(de)安放位置(zhi)包括熱(re)分(fen)布試驗確(que)定(ding)的(de)冷(leng)點和高溫(wen)(wen)點、其他可能(neng)的(de)高溫(wen)(wen)點、滅菌柜(ju)溫(wen)(wen)度(du)(du)探(tan)(tan)(tan)頭(tou)附近、溫(wen)(wen)度(du)(du)記錄探(tan)(tan)(tan)頭(tou)處。

熱穿透試驗的步驟及要求與裝載的熱分布試驗基本相同，每一裝載方式的熱穿透試驗也需要至少進行三次。通過熱穿透試驗可以確定在設定的滅菌程序下，滅菌柜內各個位置的待滅菌產品是否能夠到達設定的溫度。結合滅菌前微生物污染的檢測，可以確定滅菌柜內各個位置的待滅菌產品是否能夠獲得設定的F0值。

對于F0值最大點(dian)位(wei)置的樣(yang)品(pin)，由(you)于(yu)其受熱(re)情(qing)況最為強烈，因此應評估該(gai)位(wei)置下(xia)產(chan)品(pin)的穩(wen)定性情(qing)況，以進一步確認滅菌對于(yu)產(chan)品(pin)的穩(wen)定性沒有影響(xiang)。

2.2.1.4熱分布和熱穿透試驗數據(ju)的分析處理 

在(zai)物理確(que)認(ren)試驗中，應(ying)確(que)認(ren)關(guan)鍵(jian)和(he)重要(yao)的(de)(de)操作參數(shu)并有相應(ying)的(de)(de)文(wen)件和(he)記錄(lu)。通(tong)常需(xu)要(yao)關(guan)注的(de)(de)主要(yao)參數(shu)包(bao)括

- 每(mei)個探(tan)頭所測(ce)得溫度的變化范圍(wei)

- 不同探頭之間測得的溫度變化范(fan)圍(wei)

- 探頭測得的溫度與設定溫度之(zhi)間的差值(zhi)

- 探(tan)頭測得超(chao)過設(she)定溫度的最短及最長時(shi)間

- F0 的下限及(ji)上(shang)限

- 滅菌階段結束時的最低F0值

- 滅菌(jun)階(jie)段的(de)最(zui)低和最(zui)高壓力

- 飽和(he)蒸汽溫度(du)和(he)壓力之間的關系

- 滅菌階(jie)段腔室的最低和最高溫度

- 熱穿透溫度探頭之間的最大溫差或F0 的變化(hua)范(fan)圍

- 熱分布試驗(yan)中溫(wen)度(du)探頭間的最大(da)溫(wen)差

- 最長平衡(heng)時間

- 最少正常運行的探頭數

合格標準應結合滅菌條件、滅菌設備的特點以及產品的實際情況制定。通常情況下，滅菌柜腔室最冷、最熱點和平均溫度之間的溫差應不超過2.5℃。保溫時間內溫度波動應在±1.0℃之內，如果溫度差別過大，提示(shi)滅菌(jun)柜的性能(neng)不符合要求，需(xu)要尋找原因并(bing)進(jin)行(xing)改進(jin)，重新(xin)進(jin)行(xing)驗證。另外對于熱(re)(re)敏感的藥物，還應該(gai)控(kong)制滅菌(jun)柜的升溫和降溫時間，以保證熱(re)(re)能(neng)的輸入控(kong)制在合理的范圍以內，不會對產品(pin)的熱(re)(re)穩定性造成影響。

2.2.2 生物學確認

濕熱滅菌工藝的微生物挑戰試驗是指將一定量已知D值(zhi)的(de)耐熱(re)孢(bao)子（生物(wu)指(zhi)示(shi)劑）在設(she)定的(de)濕(shi)熱(re)滅菌(jun)條件(jian)下滅菌(jun)，以驗證設(she)定的(de)滅菌(jun)工藝是否(fou)確實(shi)能達到(dao)產品所需的(de)標(biao)準滅菌(jun)時間和F0。此項驗證工(gong)作(zuo)能夠如實反映滅(mie)菌(jun)工(gong)藝(yi)條(tiao)件對微生物的(de)殺滅(mie)效果，從而證明該滅(mie)菌(jun)工(gong)藝(yi)所(suo)賦予相關產品的(de)無(wu)菌(jun)保證水(shui)平是否符合要求。

2.2.2.1生(sheng)物指示(shi)劑選用(yong)的一般原則(ze)

一般情(qing)況下，生物指示(shi)劑(ji)選擇的(de)原(yuan)則性(xing)要求(qiu)是：孢(bao)子穩定(ding)、非致病(bing)菌、易于培(pei)養(yang)、有(you)效(xiao)期長、保存及使用(yong)(yong)方便、安全性(xing)好。針對具(ju)體(ti)的(de)滅菌工藝和具(ju)體(ti)的(de)產品(pin)，還應(ying)注(zhu)意所用(yong)(yong)的(de)生物指示(shi)劑(ji)的(de)耐熱性(xing)應(ying)強于待滅菌產品(pin)中的(de)污染菌。

濕(shi)熱(re)(re)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)工藝常用的(de)生物指示劑(ji)(ji)有(you)以(yi)下幾(ji)種，嗜熱(re)(re)脂(zhi)(zhi)肪芽(ya)(ya)孢(bao)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)，枯草芽(ya)(ya)孢(bao)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)，凝結芽(ya)(ya)孢(bao)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)，梭狀(zhuang)芽(ya)(ya)孢(bao)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)等。對于采用過度(du)殺滅(mie)法的(de)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)程(cheng)序(xu)，生物指示劑(ji)(ji)系統主要(yao)是(shi)嗜熱(re)(re)脂(zhi)(zhi)肪芽(ya)(ya)孢(bao)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)的(de)孢(bao)子。殘(can)存概率法由(you)于其熱(re)(re)輸入量比較低，因此在驗證中使用的(de)生物指示劑(ji)(ji)的(de)耐熱(re)(re)性可以(yi)小于嗜熱(re)(re)脂(zhi)(zhi)肪芽(ya)(ya)孢(bao)桿(gan)(gan)(gan)(gan)菌(jun)(jun)(jun)的(de)孢(bao)子。

2.2.2.2生物指示劑的使用和放置

實際驗證過程中可以直接采用市售的生物指示劑成品或將生物指示劑接種在待滅菌產品上。采用市售品時，只要供應商具有相應的質量體系認證資質，在測試中其提供的生物指示劑的D值就(jiu)可以被(bei)接受。采(cai)用將生物指示劑接種到待滅菌產品的方法，由于生物指示劑在不同介質或環境中的耐熱性會有所不同，首先應考慮產品對生物指示劑耐熱性的影響。所以對于具體的品種而言，如果需要將生物指示劑接種至產品之中，應測定生物指示劑在該產品中的耐熱性，即D值。如果生物(wu)指(zhi)示劑與(yu)(yu)產(chan)品不相容，可以用與(yu)(yu)產(chan)品相似的溶液來代替產(chan)品。

生物指示劑的用量需要根據生物指示劑在待滅菌樣品中的耐熱性來確定，其用量應符合挑戰性試驗的要求。生物指示劑的用量可以采用陰性分數法或者殘存曲線法計算，可以根據實際情況（如污染菌的耐熱性，擬用的生物指示劑的D值等）選擇合適的(de)計算方法，具體(ti)檢測方法見附件3。

應(ying)結(jie)(jie)合產品特點(dian)和熱分布、熱穿透的(de)(de)實際結(jie)(jie)果來確(que)定生物(wu)指示(shi)劑的(de)(de)放(fang)置(zhi)位置(zhi)。裝(zhuang)(zhuang)有生物(wu)指示(shi)劑的(de)(de)容器應(ying)緊挨于裝(zhuang)(zhuang)有測溫探頭的(de)(de)容器，在(zai)滅(mie)菌(jun)設備(bei)的(de)(de)冷點(dian)處必需放(fang)置(zhi)生物(wu)指示(shi)劑。滅(mie)菌(jun)柜的(de)(de)其他部位應(ying)裝(zhuang)(zhuang)載(zai)產品或者類似(si)物(wu)，以盡可(ke)能的(de)(de)模仿(fang)實際生產時(shi)的(de)(de)狀(zhuang)況。

2.2.2.3滅菌

生物指示劑的(de)(de)驗(yan)證應(ying)該按照(zhao)產品設定的(de)(de)滅(mie)菌工(gong)藝進(jin)行(xing)滅(mie)菌。

2.2.2.4檢查和培養

可以(yi)(yi)根據(ju)生(sheng)物(wu)(wu)指示劑(ji)的(de)(de)生(sheng)長(chang)特性(xing)以(yi)(yi)及驗證時(shi)的(de)(de)包裝(zhuang)方(fang)式，采用適(shi)當(dang)的(de)(de)方(fang)法進行(xing)檢查和(he)培(pei)養(yang)(yang)。將指示劑(ji)放入(ru)培(pei)養(yang)(yang)基中進行(xing)培(pei)養(yang)(yang)。需要注意(yi)不同(tong)的(de)(de)生(sheng)物(wu)(wu)指示劑(ji)所(suo)需要的(de)(de)培(pei)養(yang)(yang)條件也各不相同(tong)，針對使用的(de)(de)生(sheng)物(wu)(wu)指示劑(ji)確定培(pei)養(yang)(yang)條件，同(tong)時(shi)應放置陰性(xing)和(he)陽性(xing)對照樣品(pin)。

2.2.3.5試(shi)驗結果的評價

根據生物指示劑的D值(zhi)和接種量推算產品在滅菌過(guo)程中(zhong)實際達(da)到的(de)SAL值。驗(yan)證新的滅菌工藝時，每(mei)個(ge)產品的每(mei)個(ge)規格的每(mei)一滅菌程序，至(zhi)少需要(yao)連續進行三次(ci)生物指示劑(ji)驗(yan)證試驗(yan)。如果試驗的重現性好，所有試驗的結果均提示SAL≤10-6，則(ze)驗證(zheng)結果(guo)提示該滅(mie)菌(jun)工藝(yi)為驗證(zheng)合格的滅(mie)菌(jun)工藝(yi)。如果(guo)各次驗證(zheng)的結果(guo)不一致，需要分析原因，采取相(xiang)應(ying)的改進措(cuo)施后重新進行驗證(zheng)工作。

3制(zhi)劑(ji)無菌生產工藝

3.1無菌生產工藝的研究

無(wu)菌(jun)(jun)(jun)藥品應(ying)首選采用終(zhong)端滅菌(jun)(jun)(jun)工(gong)藝(yi)(yi)。如不(bu)能耐受(shou)終(zhong)端滅菌(jun)(jun)(jun)工(gong)藝(yi)(yi)條件，應(ying)盡量優(you)化(hua)處方工(gong)藝(yi)(yi)，以改善(shan)其耐熱性(xing)。如確實無(wu)法耐受(shou)終(zhong)端滅菌(jun)(jun)(jun)工(gong)藝(yi)(yi)，則可采用無(wu)菌(jun)(jun)(jun)生產(chan)工(gong)藝(yi)(yi)。無(wu)菌(jun)(jun)(jun)生產(chan)工(gong)藝(yi)(yi)通(tong)常(chang)包括(kuo)無(wu)菌(jun)(jun)(jun)分裝(zhuang)生產(chan)工(gong)藝(yi)(yi)和(he)除(chu)菌(jun)(jun)(jun)過濾生產(chan)工(gong)藝(yi)(yi)。

3.1.1無菌分裝生產工藝的研究

無菌分裝生產工藝是將采用經驗證的滅菌/除菌(jun)工(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)過(guo)程處(chu)理后的(de)(de)(de)原(yuan)料(liao)(liao)藥(yao)(yao)或(huo)者原(yuan)料(liao)(liao)藥(yao)(yao)和(he)(he)輔料(liao)(liao)，用無(wu)菌(jun)生(sheng)(sheng)產的(de)(de)(de)方法分裝到采用經驗(yan)證的(de)(de)(de)滅(mie)菌(jun)工(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)處(chu)理的(de)(de)(de)容器中(zhong)，密封得到的(de)(de)(de)。無(wu)菌(jun)分裝生(sheng)(sheng)產工(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)的(de)(de)(de)工(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)研(yan)究和(he)(he)生(sheng)(sheng)產過(guo)程控(kong)制(zhi)的(de)(de)(de)重點是影響無(wu)菌(jun)保(bao)證水平的(de)(de)(de)工(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)步驟(zou)，主要包(bao)括物(wu)料(liao)(liao)（包(bao)括原(yuan)料(liao)(liao)藥(yao)(yao)、輔料(liao)(liao)、內包(bao)裝材(cai)料(liao)(liao)等）的(de)(de)(de)質量控(kong)制(zhi)、原(yuan)材(cai)料(liao)(liao)暴露于環境(jing)中可能(neng)再污染的操作步驟等(deng)。

關于物料的質量控制，采用無菌分裝生產工藝的制劑所涉及的各種物料，都必須采用適當的滅菌/除(chu)菌(jun)(jun)工藝處理后方(fang)可(ke)使用。各種物料的滅(mie)菌(jun)(jun)/除菌(jun)工藝(yi)，都應(ying)(ying)是經過驗證的(de)、控制良(liang)好的(de)工藝(yi)。同(tong)時(shi)需要對(dui)各種(zhong)物料的(de)無菌(jun)性(xing)、細(xi)菌(jun)內毒素水平等進行嚴格(ge)控制，通過研究確定相應(ying)(ying)的(de)質控標(biao)準。

無菌分裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)的(de)生產(chan)工藝是將原料(liao)藥或(huo)者原料(liao)藥和(he)輔料(liao)經(jing)分裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)設(she)備分裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)至內包(bao)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)材料(liao)中后密封(feng)得到。分裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)步驟是影響產(chan)品質量和(he)無菌保證水平的(de)關鍵生產(chan)步驟，應結合生產(chan)設(she)備和(he)產(chan)品特點進(jin)行工藝參數的(de)研究，包(bao)括分裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)速度和(he)分裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)時間等。

無菌分裝生產工藝能否達到設定的無菌保證水平，與整個生產過程的控制密切相關，應按照GMP要求及產品具體生產工(gong)藝情(qing)況進行(xing)生產環境和生產過(guo)程的控制。在進行(xing)無菌生產工(gong)藝驗證時，應采用最差條(tiao)件(jian)進行驗證，在(zai)實際生產過程中，對生產過程和工藝參(can)數(shu)的控(kong)制均不能超過經驗證的最差條(tiao)件(jian)的控(kong)制范(fan)圍。

3.1.2 過濾除菌生產工藝的(de)研(yan)究

過(guo)(guo)濾(lv)除(chu)菌(jun)的(de)(de)(de)(de)無(wu)菌(jun)生(sheng)產(chan)(chan)工藝(yi)(yi)是通過(guo)(guo)除(chu)菌(jun)過(guo)(guo)濾(lv)器，將(jiang)藥液(ye)中(zhong)的(de)(de)(de)(de)微生(sheng)物(wu)除(chu)去得到(dao)無(wu)菌(jun)濾(lv)液(ye)。采用過(guo)(guo)濾(lv)除(chu)菌(jun)工藝(yi)(yi)時，同(tong)樣(yang)需要(yao)對影響(xiang)無(wu)菌(jun)保證水平的(de)(de)(de)(de)工藝(yi)(yi)步驟及工藝(yi)(yi)參數(shu)進行詳(xiang)細的(de)(de)(de)(de)研究，主要(yao)包括物(wu)料的(de)(de)(de)(de)質量控制、除(chu)菌(jun)過(guo)(guo)濾(lv)器的(de)(de)(de)(de)選擇及除(chu)菌(jun)過(guo)(guo)濾(lv)工藝(yi)(yi)參數(shu)的(de)(de)(de)(de)研究、除(chu)菌(jun)過(guo)(guo)濾(lv)生(sheng)產(chan)(chan)過(guo)(guo)程的(de)(de)(de)(de)控制等。

對于采用過(guo)濾(lv)除(chu)菌(jun)生(sheng)(sheng)產工(gong)藝(yi)的(de)制劑(ji)，需注(zhu)意對配制藥液使用的(de)原料藥、輔料（包(bao)括注(zhu)射用水）等原材料的(de)微(wei)生(sheng)(sheng)物種類及數量進行檢(jian)查，掌(zhang)握潛在的(de)污染微(wei)生(sheng)(sheng)物的(de)總體特(te)性(xing)情況，通(tong)過(guo)研究確定(ding)相應的(de)質控標準。采用過(guo)濾(lv)除(chu)菌(jun)生(sheng)(sheng)產工(gong)藝(yi)的(de)制劑(ji)所使用的(de)內包(bao)裝材料，必須采用適當的(de)經(jing)驗證(zheng)的(de)滅菌(jun)工(gong)藝(yi)處理后方可使用。

除菌過濾生產工藝所使用的除菌過濾器，通常為標稱孔徑0.2微米(mi)或更小(xiao)的除(chu)(chu)(chu)菌(jun)級(ji)的過(guo)濾器(qi)。除(chu)(chu)(chu)菌(jun)過(guo)濾器(qi)的過(guo)濾效(xiao)能(neng)(neng)是評(ping)價除(chu)(chu)(chu)菌(jun)過(guo)濾工(gong)藝的重要參(can)數(shu)，需要對除(chu)(chu)(chu)菌(jun)過(guo)濾器(qi)的過(guo)濾效(xiao)能(neng)(neng)進行驗(yan)證。通常(chang)，影響(xiang)除(chu)(chu)(chu)菌(jun)過(guo)濾器(qi)的除(chu)(chu)(chu)菌(jun)過(guo)濾效(xiao)能(neng)(neng)的因素包括：①藥液的性質，如藥液的粘度、表面張力、pH值、滲(shen)透壓(ya)等(deng)；② 過濾步驟的工藝參數，如過濾的壓力、流速、時間、溫度等；③ 除菌過濾器的相關參數，如除菌過濾器與藥液的相容性、除菌過濾器的過濾總量和使用周期等。除菌過濾器的過濾效能可因產品和操作條件不同而顯著不同。除菌過濾器的選擇及工藝參數的研究可結合上述影響除菌過濾器的過濾效能的因素進行。在實際生產過程中，在過濾除菌前后均需要進行濾器完整性測試。由于微生物通過過濾器的概率隨著待過濾溶液中微生物數量的增加而增加，除菌過濾工藝中需對待過濾溶液的微生物負荷情況進行研究和控制，通常情況下，最終除菌過濾前，料液的微生物負荷應不超過10cfu/100ml。應通過(guo)研(yan)究確(que)定無(wu)菌生產各(ge)操(cao)作環(huan)節的(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)間(jian)控制范圍，如料(liao)液(ye)配制后(hou)待過(guo)濾的(de)(de)(de)(de)存放(fang)時(shi)(shi)間(jian)、藥液(ye)過(guo)濾操(cao)作的(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)間(jian)、過(guo)濾后(hou)至灌裝前放(fang)置的(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)間(jian)、灌封操(cao)作的(de)(de)(de)(de)時(shi)(shi)間(jian)、滅菌后(hou)的(de)(de)(de)(de)內包裝材料(liao)及(ji)密封件允許的(de)(de)(de)(de)放(fang)置時(shi)(shi)間(jian)等。各(ge)生產環(huan)節操(cao)作時(shi)(shi)間(jian)的(de)(de)(de)(de)確(que)定需提供相應的(de)(de)(de)(de)試驗數據。

3.2 無菌生產工藝的驗證

無(wu)菌(jun)(jun)生(sheng)(sheng)產(chan)工(gong)(gong)藝的(de)(de)(de)(de)驗證主(zhu)要包括(kuo)培養基模(mo)(mo)擬(ni)灌裝(zhuang)(zhuang)試(shi)驗，應(ying)當盡可(ke)能模(mo)(mo)擬(ni)常規的(de)(de)(de)(de)無(wu)菌(jun)(jun)生(sheng)(sheng)產(chan)工(gong)(gong)藝，包括(kuo)所有對無(wu)菌(jun)(jun)結果有影響(xiang)的(de)(de)(de)(de)關鍵(jian)操作，及生(sheng)(sheng)產(chan)中可(ke)能出現的(de)(de)(de)(de)各種干預和最差條件。新建的(de)(de)(de)(de)無(wu)菌(jun)(jun)生(sheng)(sheng)產(chan)工(gong)(gong)藝的(de)(de)(de)(de)生(sheng)(sheng)產(chan)線在正式投產(chan)前必須進行連續三(san)批無(wu)菌(jun)(jun)培養基模(mo)(mo)擬(ni)灌裝(zhuang)(zhuang)試(shi)驗。在生(sheng)(sheng)產(chan)用的(de)(de)(de)(de)設備、設施、人(ren)員(yuan)結構及工(gong)(gong)藝方法有重大變更(geng)時都應(ying)進行培養基模(mo)(mo)擬(ni)灌裝(zhuang)(zhuang)試(shi)驗。實際生(sheng)(sheng)產(chan)中每半年應(ying)至(zhi)少(shao)進行一次培養基模(mo)(mo)擬(ni)灌裝(zhuang)(zhuang)試(shi)驗。

對于除菌(jun)過濾(lv)無菌(jun)生產工藝(yi)的(de)(de)驗證(zheng)(zheng)，還包括(kuo)對除菌(jun)過濾(lv)系(xi)統(tong)的(de)(de)驗證(zheng)(zheng)，如過濾(lv)器(qi)(qi)的(de)(de)微生物截留驗證(zheng)(zheng)、過濾(lv)器(qi)(qi)與待過濾(lv)藥(yao)液的(de)(de)相容性(xing)驗證(zheng)(zheng)、過濾(lv)器(qi)(qi)的(de)(de)完整性(xing)驗證(zheng)(zheng)等。

3.2.1培養基(ji)模(mo)擬灌(guan)裝試驗

3.2.1.1培養基

培養(yang)基模擬灌裝試(shi)驗需要(yao)選(xuan)擇合適(shi)的培養(yang)基，并對(dui)培養(yang)基的質量進行控制。

應當根據產品的劑型、培養基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的適用性選擇培養基。一般選用胰胨大豆肉湯培養基（TSB），按每30g加1L過(guo)濾(lv)純化水(shui)的比例，配(pei)制足夠量。某些特殊情況下也可以選用厭氧生長培養基，如硫(liu)乙醇酸鹽培養基（FTM）。

培(pei)養基的質量控制主要包括培(pei)養基的微生物生長性(xing)能和無菌性(xing)。

培(pei)(pei)養(yang)基(ji)的(de)(de)微生物生長(chang)性能：在按(an)照標準操作(zuo)規程制備(bei)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)并(bing)滅菌(jun)后，可按(an)照中國藥(yao)典附錄進(jin)行(xing)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)微生物生長(chang)性能試驗(yan)，確認所(suo)制備(bei)的(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)基(ji)應出(chu)現明顯的(de)(de)所(suo)接(jie)種的(de)(de)微生物的(de)(de)生長(chang)。

培養基的(de)無(wu)菌(jun)性：可按照中(zhong)國藥典附錄進(jin)行(xing)培養基無(wu)菌(jun)性檢查，結果應符合規定。

在培養基模擬灌裝試驗中，需進行陽性對照試驗，即取低濃度的菌種接種于進行陽性試驗用的對照容器中，與培養基模擬灌裝試驗在同一條件下進行培養。除了中國藥典附錄中規定的陽性菌，建議使用生產環境中常見的微生物，如枯草芽孢桿菌、白色念珠球菌，或者在同一生產環境中曾被檢出過的菌種。接種量一般每個容器102以下，每個菌種接種2瓶，通(tong)常需均證實有菌(jun)生長，該培養基(ji)模(mo)擬(ni)灌(guan)裝試驗方有效。

如果試驗中需要使用模擬分裝用粉末，同樣需要對模擬分裝用粉末進行選擇和質量控制。模擬分裝用粉末的選擇一般遵循以下原則：①可以在干粉狀態下滅菌，滅菌后的無菌性達到藥典規定的標準；②流動性較好，可以用分裝機分裝；③可溶于液體培養基；④在模擬試驗應用的濃度下無抑菌性。常用的模擬分裝材料有乳糖、甘露醇、PEG6000、PEG8000等，也可以采用培養基干粉作為模擬分裝(zhuang)用無菌粉末。

3.2.1.2模擬(ni)無菌生(sheng)產(chan)工藝(yi)的操作過(guo)程(cheng)

培養基模(mo)擬(ni)灌裝試(shi)驗(yan)中使(shi)用的(de)(de)(de)內包裝材(cai)料的(de)(de)(de)清(qing)洗、滅菌(jun)，分裝設備(bei)(bei)的(de)(de)(de)清(qing)洗、消毒及(ji)與(yu)產(chan)品(pin)(pin)接觸的(de)(de)(de)分裝設備(bei)(bei)部(bu)件(jian)的(de)(de)(de)清(qing)洗、滅菌(jun)、安裝過程(cheng)均應遵循與(yu)實際生(sheng)產(chan)操作相(xiang)同的(de)(de)(de)標準(zhun)操作規程(cheng)。培養基模(mo)擬(ni)灌裝試(shi)驗(yan)過程(cheng)中應制訂取樣計劃，對使(shi)用的(de)(de)(de)內包裝材(cai)料間隔一定數(shu)量后隨機取樣進行無菌(jun)性(xing)檢查；同時，全(quan)部(bu)與(yu)產(chan)品(pin)(pin)接觸的(de)(de)(de)設備(bei)(bei)表面(mian)應無菌(jun)。某些特(te)殊情(qing)況下(xia)，如膠(jiao)塞(sai)具有抑菌(jun)性(xing)，則需要(yao)考慮更換采(cai)用其他相(xiang)當的(de)(de)(de)但無抑菌(jun)性(xing)的(de)(de)(de)膠(jiao)塞(sai)。

應當注意有足夠數量的培養基與容器的內表面充分接觸，灌裝培養基時，每個容器的灌裝體積一般為1/3-1/2之間，最多不能超過容器的85%。應注意，對于凍(dong)干粉針劑的(de)(de)驗證(zheng)試驗，在(zai)培養基(ji)灌(guan)裝半壓塞后，只需(xu)模(mo)擬(ni)樣品(pin)進入和移出凍(dong)干機(ji)的(de)(de)過程(cheng)即可(ke)，而不必模(mo)擬(ni)凍(dong)干過程(cheng)，以保證(zheng)一旦有細菌，能夠保持較好(hao)的(de)(de)生(sheng)存能力。同時，還應模(mo)擬(ni)一些可(ke)能造(zao)成污染(ran)的(de)(de)操作步驟，如(ru)抽真空(kong)，充氮等步驟。

培養基模擬灌裝(zhuang)試(shi)驗應(ying)當(dang)盡可(ke)能模擬常規的(de)(de)(de)(de)無(wu)菌(jun)生(sheng)產(chan)工藝，應(ying)當(dang)包(bao)括所有(you)對無(wu)菌(jun)結(jie)果有(you)影(ying)響的(de)(de)(de)(de)關鍵操作(zuo)，包(bao)括生(sheng)產(chan)中可(ke)能出現的(de)(de)(de)(de)各(ge)種干(gan)預(yu)(yu)和(he)最(zui)(zui)差條(tiao)件(jian)，各(ge)種干(gan)預(yu)(yu)和(he)最(zui)(zui)差條(tiao)件(jian)的(de)(de)(de)(de)考(kao)慮(lv)需要體(ti)現風險控制的(de)(de)(de)(de)理念。通常可(ke)能出現的(de)(de)(de)(de)各(ge)種干(gan)預(yu)(yu)和(he)最(zui)(zui)差條(tiao)件(jian)包(bao)括：①人員數量(liang)和(he)他們的(de)(de)(de)(de)活動、換(huan)班、休(xiu)息、更衣（需要時）；②設備(bei)調試(shi)，正(zheng)常停車(che)、非正(zheng)常停車(che)、意外事故（如檢修等）；③采用滅菌(jun)后所允許(xu)放置的(de)(de)(de)(de)最(zui)(zui)長(chang)時間(jian)的(de)(de)(de)(de)設備(bei)或者車(che)間(jian)進(jin)行生(sheng)產(chan)；④模擬生(sheng)產(chan)時間(jian)最(zui)(zui)長(chang)的(de)(de)(de)(de)批量(liang)所需的(de)(de)(de)(de)時間(jian)；⑤采用最(zui)(zui)慢的(de)(de)(de)(de)填充速度和(he)最(zui)(zui)大的(de)(de)(de)(de)包(bao)裝(zhuang)容(rong)器（即最(zui)(zui)長(chang)的(de)(de)(de)(de)暴露時間(jian)）；采用最(zui)(zui)快的(de)(de)(de)(de)填充速度和(he)最(zui)(zui)小的(de)(de)(de)(de)包(bao)裝(zhuang)容(rong)器（即容(rong)易(yi)伴隨(sui)更多(duo)干(gan)預(yu)(yu)的(de)(de)(de)(de)生(sheng)產(chan)情況(kuang)）。總(zong)之，在試(shi)驗計劃(hua)中，總(zong)體(ti)研(yan)究設計和(he)運行時間(jian)應(ying)該模擬可(ke)能出現的(de)(de)(de)(de)各(ge)種干(gan)預(yu)(yu)和(he)最(zui)(zui)差操作(zuo)條(tiao)件(jian)，覆(fu)蓋所有(you)實際(ji)生(sheng)產(chan)過程涉及的(de)(de)(de)(de)操作(zuo)。

培養基模擬灌(guan)裝(zhuang)的數量(liang)應當足以保證(zheng)評價(jia)的有(you)效性，批量(liang)較(jiao)小的產品(pin)，培養基模擬灌(guan)裝(zhuang)的數量(liang)應當至少等(deng)于(yu)產品(pin)的批量(liang)。

3.2.1.3試驗結果的評(ping)價

培(pei)(pei)養(yang)基(ji)模擬(ni)灌(guan)裝試驗(yan)需要對所有灌(guan)裝樣品進(jin)行培(pei)(pei)養(yang)和(he)無菌檢查。培(pei)(pei)養(yang)基(ji)模擬(ni)灌(guan)裝試驗(yan)的目標是零污(wu)染，應當符(fu)合以下要求：

一(yi)旦發現污染，需(xu)要進行偏差(cha)調(diao)查，包括污染菌的(de)鑒別、污染情況(kuang)的(de)評估、是否(fou)可以重復進行試驗等(deng)等(deng)。

3.2.2 除菌過濾系統的驗證

除(chu)菌過濾系統的驗(yan)證一般包括：微生物截(jie)留研究(jiu)(jiu)、析出物研究(jiu)(jiu)、化(hua)學兼容性研究(jiu)(jiu)和藥液吸附研究(jiu)(jiu)。

3.2.2.1微生物截留研究

過(guo)濾(lv)(lv)器的(de)(de)微生(sheng)(sheng)物(wu)截(jie)留驗(yan)證的(de)(de)目的(de)(de)：除(chu)菌(jun)過(guo)濾(lv)(lv)器微生(sheng)(sheng)物(wu)截(jie)留試(shi)驗(yan)是通過(guo)模擬實(shi)際過(guo)濾(lv)(lv)工藝(yi)，過(guo)濾(lv)(lv)含有一(yi)定量生(sheng)(sheng)物(wu)指示菌(jun)的(de)(de)溶液，確認除(chu)菌(jun)過(guo)濾(lv)(lv)器的(de)(de)微生(sheng)(sheng)物(wu)截(jie)留能力。

過濾器(qi)的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)截留(liu)驗證的(de)設(she)計：

（1）挑戰用微生物(wu)的選擇

通常采用(yong)缺陷(xian)性(xing)(xing)假單(dan)胞菌(jun)作為挑戰性(xing)(xing)試驗用(yong)菌(jun)。在(zai)有些情況(kuang)下，缺陷(xian)性(xing)(xing)假單(dan)胞菌(jun)可能不能代(dai)表最壞條件，則需要(yao)考(kao)慮采用(yong)其他(ta)細菌(jun)。如果使用(yong)其他(ta)細菌(jun)，應(ying)(ying)保證(zheng)該細菌(jun)足(zu)夠細小至(zhi)足(zu)以(yi)挑戰除菌(jun)級別濾器的(de)(de)截留性(xing)(xing)能，并(bing)能模擬產(chan)品中發(fa)現的(de)(de)最小微(wei)生(sheng)物。應(ying)(ying)盡可能的(de)(de)進行微(wei)生(sheng)物負荷的(de)(de)鑒別和(he)量化研究，掌握所(suo)分離的(de)(de)微(wei)生(sheng)物的(de)(de)形態學(xue)特征，為挑戰性(xing)(xing)微(wei)生(sheng)物的(de)(de)選(xuan)擇(ze)提供依據。

挑戰性微生物的大小可以通過其可穿過0.45微(wei)米級別的(de)濾(lv)膜(mo)來確證。通常情況下，標準(zhun)培養條件下生長的(de)缺陷性假單胞菌，在高挑戰濃度（如≧107）時，能少量穿過0.45微米級別(bie)的濾(lv)膜(mo)。

（2）微生物截留試驗條件

在試驗室模擬(ni)生(sheng)產(chan)(chan)工(gong)藝(yi)(yi)條(tiao)件(jian)，將定量缺陷性(xing)假單胞(bao)菌加入到料液中，進(jin)行過濾。根據(ju)實(shi)際生(sheng)產(chan)(chan)條(tiao)件(jian)，考慮確定微(wei)生(sheng)物截留試驗的(de)過濾時間(jian)(jian)及溫(wen)度(du)(du)、壓差(cha)(cha)、流速等。建議(yi)對實(shi)際生(sheng)產(chan)(chan)的(de)過濾工(gong)藝(yi)(yi)進(jin)行一次徹底評估，包括溶劑(ji)性(xing)質(zhi)（例如水性(xing)的(de)、酸、堿、有機的(de)）、過濾時間(jian)(jian)、工(gong)藝(yi)(yi)壓差(cha)(cha)、工(gong)藝(yi)(yi)流速、工(gong)藝(yi)(yi)溫(wen)度(du)(du)和過濾器設計規范，以(yi)便合(he)理設計微(wei)生(sheng)物截留試驗條(tiao)件(jian)。

過(guo)濾(lv)時間(jian)(jian)和(he)壓差會影響細菌截留試(shi)驗的(de)結果。在(zai)完(wan)整的(de)生(sheng)產時間(jian)(jian)進行微生(sheng)物截留試(shi)驗可以對(dui)那(nei)些與時間(jian)(jian)有關的(de)因素進行評估，如過(guo)濾(lv)器(qi)兼(jian)容(rong)性(xing)，完(wan)整性(xing)的(de)維持，時間(jian)(jian)依賴性(xing)的(de)穿透等(deng)。

微生物截留試驗過程中的壓差應達到或超過實際生產過程的最大壓差和/或最大流速（在過濾(lv)器制造(zao)商(shang)的設計規范內）。在驗(yan)證過程中同(tong)時模擬壓(ya)差和(he)流速可能是(shi)不可能的。在設計挑戰試(shi)驗(yan)條件時過濾(lv)器的使用者(zhe)應該確(que)認哪個參數與特定工藝的相關性更高，以便為微生物截留試(shi)驗(yan)條件的確(que)定提(ti)供依據。

微生物截留驗證研究應包括多個批次的濾膜（通常三個批次）。在用于微生物截留驗證研究的三個批次的濾膜中，至少應有一個批次是進行預研究時或使用前物理完整性測試時的數值通過但是接近（例如，10％之(zhi)內）過(guo)濾器生(sheng)產商(shang)提供的合(he)格規范限值的。

（3）微生(sheng)物截留驗證研究(jiu)中使(shi)用的過濾膜的物理完整(zheng)性(xing)檢測數值應包(bao)括在(zai)實驗報(bao)告中。物理完整(zheng)性(xing)檢測應使(shi)用已有規范值的水(shui)、產(chan)品或其它潤濕(shi)流體來進行測試，并在(zai)進行微生(sheng)物挑戰前完成。

如果(guo)微生物(wu)(wu)(wu)截(jie)留驗證研(yan)究后，測(ce)試用微生物(wu)(wu)(wu)在(zai)(zai)任何(he)過(guo)(guo)濾(lv)器的(de)下游(you)被檢測(ce)到，那么(me)就需要對此進(jin)行(xing)調(diao)(diao)查。如果(guo)調(diao)(diao)查確(que)認測(ce)試用微生物(wu)(wu)(wu)能(neng)穿透(tou)完整性(xing)檢測(ce)達標的(de)過(guo)(guo)濾(lv)器，那么(me)就應重新考慮此種過(guo)(guo)濾(lv)器在(zai)(zai)這些工作條(tiao)件下的(de)適用性(xing)。

需要關(guan)注(zhu)的(de)是，過(guo)濾(lv)(lv)器的(de)重復使(shi)用(yong)(yong)通(tong)常是不(bu)被推薦(jian)的(de)。如(ru)果需要重復使(shi)用(yong)(yong)除菌級過(guo)濾(lv)(lv)器，需要說明理由，重復使(shi)用(yong)(yong)的(de)相關(guan)參數（如(ru)過(guo)濾(lv)(lv)量等）也需要經過(guo)嚴格的(de)驗(yan)證后確定相應(ying)的(de)范圍。

3.2.2.2析出物(wu)和釋(shi)放物(wu)研究

析出物指在人為或挑戰性條件（如溶劑、溫度或時間）下，從某一材料中脫離的任何化學組分。釋放物是指在正常儲存或使用條件下，從接觸面上進入產品或工藝流體中的物質。潛在的析出物或釋放物的來源包括但不限于：膜組件（如：成形劑、表面活性劑、抗氧化劑、殘留溶劑、支架層）和塑料組件（如：封蓋、外殼、支架、O型(xing)圈）。影響(xiang)釋放物(wu)的(de)因(yin)素(su)可能包括過(guo)濾液(ye)的(de)化學性質、滅菌方法(fa)、接(jie)觸時間(jian)、溫度(du)和過(guo)濾量與(yu)面積之比。有機溶液(ye)的(de)過(guo)濾產生的(de)釋放物(wu)可能比水溶液(ye)過(guo)濾要(yao)更高。

析出物數據可從過濾器生產商處獲得，也可以由過濾器使用者進行試驗取得。考慮到析出物的來源不同和影響析出物的因素較多，建議過濾器使用者在開展研究時盡可能使用實際產品，并使用與實際生產相同類型的過濾器。有些情況下可能需使用替代溶液進行試驗，例如，產品會干擾分析方法或產品有抑菌性等。這時，替代溶液必須與待過濾產品性質盡可能一致。另外，也可以選擇使用幾種溶液來涵蓋實際過濾溶液的pH、離子強度或(huo)有機(ji)成(cheng)分的(de)含量等特性。如果使(shi)用了替代(dai)溶液(ye)(ye)或(huo)幾種溶液(ye)(ye)合(he)并的(de)方式(shi)，則必(bi)須提供溶液(ye)(ye)選擇的(de)合(he)理依據。

一旦確定好用于析出試驗的萃取溶液（產品、替代液或幾類溶液合并使用），則應在設計試驗時模擬實際生產條件下最劣工況，具體應考慮諸如溫度、時間、pH和預處理（如(ru)：沖洗、滅(mie)菌(jun)）工序等關鍵變量。析(xi)出試驗應采用(yong)(yong)過濾裝置(zhi)處于最劣生產條(tiao)件時(shi)的(de)(de)接觸時(shi)間(jian)和溫度(du)，使用(yong)(yong)經(jing)過高壓滅(mie)菌(jun)或消毒(du)過的(de)(de)過濾器(qi)(qi)來完成。可以用(yong)(yong)靜態(tai)浸(jin)泡(pao)或循環流動的(de)(de)方(fang)法(fa)。采用(yong)(yong)靜態(tai)浸(jin)泡(pao)法(fa)時(shi)，過濾器(qi)(qi)在給(gei)定(ding)溫度(du)的(de)(de)析(xi)出溶液(ye)中(zhong)浸(jin)泡(pao)一(yi)段既定(ding)的(de)(de)時(shi)間(jian)。而采用(yong)(yong)循環流動法(fa)時(shi)，萃取(qu)液(ye)在既定(ding)的(de)(de)時(shi)間(jian)內循環反復穿越(yue)過濾器(qi)(qi)。將萃取(qu)液(ye)收集并檢測，從而確(que)定(ding)其中(zhong)的(de)(de)過濾器(qi)(qi)析(xi)出物。

在取得過(guo)濾器萃取液后，通過(guo)分析(xi)可以(yi)確定來自過(guo)濾器的物質(zhi)種(zhong)(zhong)類和含量(liang)。除了對過(guo)濾器析(xi)出物的種(zhong)(zhong)類和含量(liang)進行確定外，必要時還可以(yi)采用已被認(ren)可的生(sheng)物反應性試(shi)驗對其安全性進行評估。

3.2.2.3 相容性研究

過(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)器的(de)相(xiang)(xiang)容(rong)(rong)性(xing)研究用(yong)(yong)來評(ping)估過(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)裝(zhuang)置(zhi)(zhi)與料(liao)液(ye)的(de)化(hua)學(xue)(xue)相(xiang)(xiang)容(rong)(rong)性(xing)，以避免(mian)可能的(de)過(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)器受(shou)損(sun)或(huo)變形，并能防止料(liao)液(ye)受(shou)到釋(shi)放(fang)物或(huo)微粒物質的(de)污(wu)染。化(hua)學(xue)(xue)相(xiang)(xiang)容(rong)(rong)性(xing)試(shi)驗(yan)(yan)應(ying)涵蓋整個裝(zhuang)置(zhi)(zhi)，試(shi)驗(yan)(yan)的(de)設計應(ying)考慮料(liao)液(ye)性(xing)質、過(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)溫度和(he)接(jie)觸時間(jian)(jian)等(deng)。由于過(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)裝(zhuang)置(zhi)(zhi)與過(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)料(liao)液(ye)或(huo)溶劑之(zhi)間(jian)(jian)可能存(cun)在諸多化(hua)學(xue)(xue)相(xiang)(xiang)互作用(yong)(yong)，過(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)器生產(chan)商所(suo)提(ti)供的(de)代表(biao)性(xing)的(de)化(hua)學(xue)(xue)相(xiang)(xiang)容(rong)(rong)性(xing)表(biao)通常只(zhi)作為過(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)器使用(yong)(yong)者(zhe)的(de)參考，過(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)器使用(yong)(yong)者(zhe)需要進行(xing)更(geng)全面(mian)的(de)測試(shi)。通常的(de)化(hua)學(xue)(xue)相(xiang)(xiang)容(rong)(rong)性(xing)試(shi)驗(yan)(yan)包括(kuo)：接(jie)觸料(liao)液(ye)前后的(de)目視檢(jian)查、過(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)過(guo)(guo)(guo)(guo)程中流速變化(hua)、濾(lv)膜(mo)重(zhong)量變化(hua)、過(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)前后起(qi)泡點變化(hua)等(deng)。

3.2.2.4 吸(xi)附性(xing)研(yan)究(jiu)

吸附是所過濾的料液中的某些成分粘附在濾膜上的過程，可能影響料液的構成和濃度。過濾器中吸附性的材料包括濾膜、硬件和支撐性材料。吸附試驗條件可以根據實際生產條件確定，流速、過濾時間、料液濃度、防腐劑濃度、溫度和pH值等因素(su)都可能影(ying)響(xiang)吸(xi)附效(xiao)果。吸(xi)附試驗中采用的檢測(ce)方法可以采用產品質量標準中所確(que)定的相關檢測(ce)方法。

4原料藥無菌生(sheng)產工藝(yi)

無(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)原(yuan)(yuan)料(liao)藥(yao)(yao)是指在(zai)法(fa)定的(de)(de)(de)藥(yao)(yao)品標準中規定無(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)檢(jian)查項(xiang)目的(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)料(liao)藥(yao)(yao)。化(hua)學原(yuan)(yuan)料(liao)藥(yao)(yao)的(de)(de)(de)常用生(sheng)產(chan)工(gong)(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)包括化(hua)學合成(cheng)工(gong)(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)、微生(sheng)物(wu)發(fa)酵(jiao)工(gong)(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)，以及采用微生(sheng)物(wu)發(fa)酵(jiao)產(chan)品作為起始原(yuan)(yuan)料(liao)的(de)(de)(de)半合成(cheng)工(gong)(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)；而原(yuan)(yuan)料(liao)藥(yao)(yao)的(de)(de)(de)無(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)工(gong)(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)特指對制成(cheng)的(de)(de)(de)原(yuan)(yuan)料(liao)藥(yao)(yao)進(jin)行(xing)無(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)化(hua)處理的(de)(de)(de)相(xiang)關工(gong)(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)，無(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)工(gong)(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)之前的(de)(de)(de)生(sheng)產(chan)過程不屬本章節(jie)的(de)(de)(de)討(tao)論范(fan)疇(chou)。但對于用于無(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)制劑生(sheng)產(chan)的(de)(de)(de)無(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)輔料(liao)（如鹽酸(suan)精氨酸(suan)、碳酸(suan)氫鈉等）的(de)(de)(de)無(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)工(gong)(gong)(gong)(gong)藝(yi)(yi)驗證(zheng)也可以參考本指導原(yuan)(yuan)則的(de)(de)(de)相(xiang)關要求。

與無菌(jun)(jun)(jun)制劑工(gong)(gong)藝(yi)相(xiang)比(bi)，無菌(jun)(jun)(jun)原(yuan)(yuan)料(liao)藥(yao)的(de)生產工(gong)(gong)藝(yi)一(yi)般要(yao)(yao)(yao)更復雜(za)，設備(bei)類型(xing)多種多樣(yang)，且不同的(de)工(gong)(gong)藝(yi)有不同的(de)特點。工(gong)(gong)藝(yi)過程中的(de)物料(liao)、內包裝材(cai)料(liao)、設備(bei)（包括閥(fa)門(men)、管道等相(xiang)關部件(jian)）的(de)滅菌(jun)(jun)(jun)和無菌(jun)(jun)(jun)傳(chuan)遞、對接、組裝等操作(zuo)相(xiang)比(bi)無菌(jun)(jun)(jun)制劑要(yao)(yao)(yao)復雜(za)的(de)多。原(yuan)(yuan)料(liao)藥(yao)從非無菌(jun)(jun)(jun)轉(zhuan)化(hua)成無菌(jun)(jun)(jun)狀態的(de)常用方法是通過除菌(jun)(jun)(jun)過濾(lv)(lv)來(lai)實現(xian)。該過程受料(liao)液性質影響(xiang)很大，需要(yao)(yao)(yao)根據(ju)料(liao)液的(de)性質選(xuan)擇適當的(de)過濾(lv)(lv)器(qi)及(ji)濾(lv)(lv)芯的(de)材(cai)質。另外，原(yuan)(yuan)料(liao)藥(yao)的(de)生產設備(bei)通常體(ti)積較大且內部結構復雜(za)，在選(xuan)擇放置位置或進行投料(liao)、取(qu)樣(yang)、回收操作(zuo)時應(ying)考慮如何保證潔凈區內的(de)氣流流向符合要(yao)(yao)(yao)求，以及(ji)如何匹(pi)配好高效過濾(lv)(lv)器(qi)的(de)位置與設備(bei)本(ben)體(ti)之間的(de)位置分布(bu)等等。

盡管無(wu)菌(jun)(jun)制(zhi)劑(ji)和(he)無(wu)菌(jun)(jun)原(yuan)(yuan)料藥(yao)在生(sheng)產過程和(he)質量控制(zhi)特點上存在諸多不同(tong)，但(dan)就(jiu)無(wu)菌(jun)(jun)保證的基(ji)本原(yuan)(yuan)則(ze)，以及生(sheng)產管理和(he)驗證的基(ji)本原(yuan)(yuan)則(ze)而言，兩者的要(yao)(yao)求又(you)是相通的。因此(ci)在生(sheng)產設備、廠(chang)房設施、潔凈級別及監(jian)測、滅菌(jun)(jun)工藝(yi)與方(fang)法及質量控制(zhi)要(yao)(yao)求等方(fang)面，無(wu)菌(jun)(jun)原(yuan)(yuan)料藥(yao)和(he)無(wu)菌(jun)(jun)制(zhi)劑(ji)的要(yao)(yao)求可以相互參考。

4.1 無菌原料藥生產工藝(yi)特點(dian)

無(wu)菌(jun)原(yuan)料(liao)(liao)藥可以通過(guo)最(zui)終(zhong)(zhong)滅(mie)菌(jun)或(huo)非最(zui)終(zhong)(zhong)滅(mie)菌(jun)的(de)方(fang)式獲得。對于采用最(zui)終(zhong)(zhong)滅(mie)菌(jun)的(de)無(wu)菌(jun)原(yuan)料(liao)(liao)藥，必須嚴格控制微生物污染、細菌(jun)內毒素和不溶性(xing)微粒的(de)水平。由于多數原(yuan)料(liao)(liao)藥的(de)耐熱性(xing)較差，所以通常無(wu)菌(jun)原(yuan)料(liao)(liao)藥采用非終(zhong)(zhong)端滅(mie)菌(jun)的(de)方(fang)式生產。

無菌原料的精制過程和除菌過程經常結合在一起，作為生產工藝的一個單元操作來完成。目前生產上最常用的方法是無菌過濾法；即將非無菌的中間體或原材料配制成溶液，再通過0.22μm孔徑的(de)過濾器(qi)以達到(dao)除去細菌的(de)目的(de)。無菌原(yuan)料藥常用(yong)工藝(yi)包括溶媒結晶和冷凍(dong)干燥(zao)(zao)兩種(zhong)，前期國內也有采用(yong)噴霧(wu)干燥(zao)(zao)工藝(yi)的(de)無菌原(yuan)料藥，但是多(duo)因為(wei)其(qi)生產工藝(yi)不能滿(man)足(zu)無菌工藝(yi)的(de)驗證(zheng)要求而逐漸被放(fang)棄或進行了工藝(yi)變更。

溶(rong)媒結晶工藝和冷(leng)凍(dong)干燥(zao)工藝涉及的具體設備和操作各(ge)不相同，但(dan)都采用除菌過濾的方(fang)式使料液從非無菌狀態(tai)轉變為無菌狀態(tai)，并且要在此(ci)后的干燥(zao)、粉碎(sui)、混合以及分裝過程中(zhong)始終(zhong)保持無菌狀態(tai)。

4.1.1 溶媒(mei)結晶工藝

典(dian)型的(de)(de)(de)(de)(de)(de)溶媒結(jie)晶(jing)(jing)(jing)工藝流程包括非(fei)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)原(yuan)料(liao)藥的(de)(de)(de)(de)(de)(de)溶解、除菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)過(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)、結(jie)晶(jing)(jing)(jing)、固液(ye)(ye)分(fen)離（如常(chang)用(yong)過(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)、離心(xin)等(deng)方法）、洗滌、干(gan)燥、粉碎、混合(he)、分(fen)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)等(deng)過(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)程。溶解環(huan)(huan)節(jie)(jie)應(ying)(ying)(ying)關(guan)(guan)(guan)注(zhu)物(wu)料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)負(fu)荷、溶劑(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)質量、設(she)(she)(she)(she)(she)(she)備(bei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)污染水(shui)平(ping)以及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)使用(yong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)料(liao)液(ye)(ye)輸送動(dong)力源(yuan)（如空氣(qi)或(huo)氮氣(qi)）的(de)(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)污染水(shui)平(ping)。除菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)過(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)環(huan)(huan)節(jie)(jie)應(ying)(ying)(ying)關(guan)(guan)(guan)注(zhu)濾(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)本(ben)身的(de)(de)(de)(de)(de)(de)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、過(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)與料(liao)液(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)相(xiang)容(rong)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、濾(lv)(lv)(lv)芯本(ben)身及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)配后(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)完整(zheng)(zheng)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、過(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)清洗及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)周(zhou)期、過(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)除菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)效率、除菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)濾(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)前(qian)料(liao)液(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)生(sheng)(sheng)物(wu)污染水(shui)平(ping)等(deng)。結(jie)晶(jing)(jing)(jing)環(huan)(huan)節(jie)(jie)應(ying)(ying)(ying)關(guan)(guan)(guan)注(zhu)設(she)(she)(she)(she)(she)(she)備(bei)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、密封(feng)(feng)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)密封(feng)(feng)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)置的(de)(de)(de)(de)(de)(de)可(ke)(ke)靠(kao)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、設(she)(she)(she)(she)(she)(she)備(bei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)清洗及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)周(zhou)期、呼(hu)吸器(qi)(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)完整(zheng)(zheng)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)；如需加(jia)入晶(jing)(jing)(jing)種，晶(jing)(jing)(jing)種本(ben)身應(ying)(ying)(ying)符合(he)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)藥品的(de)(de)(de)(de)(de)(de)要求，并且(qie)應(ying)(ying)(ying)驗證晶(jing)(jing)(jing)種加(jia)入過(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)程的(de)(de)(de)(de)(de)(de)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)保(bao)證。過(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)或(huo)離心(xin)環(huan)(huan)節(jie)(jie)應(ying)(ying)(ying)關(guan)(guan)(guan)注(zhu)設(she)(she)(she)(she)(she)(she)備(bei)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、密封(feng)(feng)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)能(neng)及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)密封(feng)(feng)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)置的(de)(de)(de)(de)(de)(de)可(ke)(ke)靠(kao)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、清洗及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)周(zhou)期、呼(hu)吸器(qi)(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)完整(zheng)(zheng)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)等(deng)。洗滌環(huan)(huan)節(jie)(jie)應(ying)(ying)(ying)關(guan)(guan)(guan)注(zhu)洗滌溶劑(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)。干(gan)燥環(huan)(huan)節(jie)(jie)應(ying)(ying)(ying)關(guan)(guan)(guan)注(zhu)干(gan)燥設(she)(she)(she)(she)(she)(she)備(bei)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、密封(feng)(feng)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)能(neng)及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)密封(feng)(feng)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)置的(de)(de)(de)(de)(de)(de)可(ke)(ke)靠(kao)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、清洗及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)周(zhou)期、呼(hu)吸器(qi)(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)完整(zheng)(zheng)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)，以及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)真空系統的(de)(de)(de)(de)(de)(de)防倒(dao)吸設(she)(she)(she)(she)(she)(she)置（如使用(yong)真空，應(ying)(ying)(ying)在管路上(shang)安(an)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)除菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)級別的(de)(de)(de)(de)(de)(de)過(guo)(guo)(guo)(guo)(guo)濾(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)）。粉碎環(huan)(huan)節(jie)(jie)應(ying)(ying)(ying)關(guan)(guan)(guan)注(zhu)設(she)(she)(she)(she)(she)(she)備(bei)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、密封(feng)(feng)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)能(neng)及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)密封(feng)(feng)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)置的(de)(de)(de)(de)(de)(de)可(ke)(ke)靠(kao)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)；粉碎用(yong)氣(qi)體（如使用(yong)氣(qi)流粉碎機）的(de)(de)(de)(de)(de)(de)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)保(bao)證、給(gei)料(liao)方式(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)保(bao)證水(shui)平(ping)等(deng)。混合(he)環(huan)(huan)節(jie)(jie)應(ying)(ying)(ying)關(guan)(guan)(guan)注(zhu)設(she)(she)(she)(she)(she)(she)備(bei)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、密封(feng)(feng)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)能(neng)及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)密封(feng)(feng)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)置的(de)(de)(de)(de)(de)(de)可(ke)(ke)靠(kao)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、清洗及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)周(zhou)期等(deng)。分(fen)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)環(huan)(huan)節(jie)(jie)應(ying)(ying)(ying)關(guan)(guan)(guan)注(zhu)分(fen)裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)設(she)(she)(she)(she)(she)(she)備(bei)本(ben)身的(de)(de)(de)(de)(de)(de)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)或(huo)者(zhe)其產品暴露潔(jie)凈(jing)級別是否(fou)達到(dao)A級區標準，關(guan)(guan)(guan)注(zhu)內包裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)材料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)、內包裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)材料(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)遞入方式(shi)、內包裝(zhuang)(zhuang)(zhuang)容(rong)器(qi)(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)密封(feng)(feng)性(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)(xing)以及(ji)(ji)(ji)(ji)(ji)取樣(yang)環(huan)(huan)節(jie)(jie)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)無(wu)(wu)(wu)(wu)(wu)菌(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)(jun)保(bao)證。

4.1.2 冷凍干燥工(gong)藝

凍(dong)(dong)干(gan)(gan)無菌原料藥的(de)(de)(de)(de)典型流程(cheng)包括原料藥的(de)(de)(de)(de)溶解(jie)、除菌過濾(lv)(lv)、冷凍(dong)(dong)干(gan)(gan)燥(zao)、粉碎、混合和分裝。其(qi)中(zhong)除冷凍(dong)(dong)干(gan)(gan)燥(zao)環節外(wai)，其(qi)它工(gong)藝(yi)步驟(zou)的(de)(de)(de)(de)關(guan)(guan)注(zhu)重點可(ke)參考溶媒(mei)結晶(jing)工(gong)藝(yi)的(de)(de)(de)(de)相關(guan)(guan)要求。凍(dong)(dong)干(gan)(gan)工(gong)藝(yi)環節中(zhong)應(ying)關(guan)(guan)注(zhu)的(de)(de)(de)(de)主要問題包括凍(dong)(dong)干(gan)(gan)機本身及(ji)(ji)附(fu)屬裝置的(de)(de)(de)(de)無菌性(xing)、密封(feng)性(xing)能及(ji)(ji)密封(feng)裝置的(de)(de)(de)(de)可(ke)靠(kao)性(xing)、清(qing)洗及(ji)(ji)滅(mie)(mie)菌周(zhou)期、設備的(de)(de)(de)(de)可(ke)清(qing)洗及(ji)(ji)可(ke)滅(mie)(mie)菌性(xing)；真空系(xi)統的(de)(de)(de)(de)保(bao)證及(ji)(ji)干(gan)(gan)燥(zao)后(hou)的(de)(de)(de)(de)壓力平衡(heng)，補(bu)氣(qi)過程(cheng)的(de)(de)(de)(de)無菌保(bao)證（宜補(bu)充無菌氣(qi)體或者在凍(dong)(dong)干(gan)(gan)機上安(an)裝除菌呼吸過濾(lv)(lv)器(qi)），以及(ji)(ji)物(wu)料進出設備時的(de)(de)(de)(de)無菌保(bao)證。

4.2 無(wu)菌原料藥工藝驗證

采用終(zhong)(zhong)端(duan)(duan)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)工(gong)(gong)藝(yi)的(de)(de)無菌(jun)(jun)(jun)原料(liao)藥工(gong)(gong)藝(yi)驗證可(ke)參考制劑(ji)終(zhong)(zhong)端(duan)(duan)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)工(gong)(gong)藝(yi)驗證的(de)(de)相關(guan)(guan)要求。非終(zhong)(zhong)端(duan)(duan)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)無菌(jun)(jun)(jun)原料(liao)藥工(gong)(gong)藝(yi)驗證主要包括(kuo)培養基模擬灌裝(zhuang)驗證和(he)過濾除菌(jun)(jun)(jun)系統(tong)驗證。其(qi)中的(de)(de)過濾除菌(jun)(jun)(jun)系統(tong)驗證可(ke)參考無菌(jun)(jun)(jun)制劑(ji)的(de)(de)相關(guan)(guan)要求，并(bing)重(zhong)點關(guan)(guan)注進入(ru)結(jie)晶罐的(de)(de)所(suo)有物料(liao)（如原料(liao)藥、溶(rong)媒、酸堿(jian)、氣體等）均(jun)應除菌(jun)(jun)(jun)過濾，并(bing)進行相關(guan)(guan)驗證。

4.2.1 驗證批量

常規(gui)生(sheng)(sheng)產批(pi)量(liang)較(jiao)小的(de)(de)無(wu)菌原料藥，應最大(da)(da)限度模擬(ni)大(da)(da)生(sheng)(sheng)產的(de)(de)批(pi)量(liang)。對(dui)于常規(gui)生(sheng)(sheng)產批(pi)量(liang)較(jiao)大(da)(da)的(de)(de)無(wu)菌原料藥，考(kao)慮到模擬(ni)大(da)(da)生(sheng)(sheng)產批(pi)量(liang)的(de)(de)可行(xing)性(xing)和實際介質培養的(de)(de)可行(xing)性(xing)，模擬(ni)灌裝批(pi)量(liang)可以比(bi)大(da)(da)生(sheng)(sheng)產批(pi)量(liang)小，但模擬(ni)介質應能(neng)夠接(jie)觸到所有產品可能(neng)接(jie)觸的(de)(de)設備內表(biao)面。并能(neng)夠充分模擬(ni)實際生(sheng)(sheng)產可能(neng)遇到的(de)(de)其它各種最差條件。

4.2.2 最差條(tiao)件(jian)

選擇最差條件時，應考慮進出人數（包括維修人員）、生產材料、設備設施在無菌區的暴露時間、設備滅菌后至開始灌裝前的間隔時間，以及微生物抑制因素（如溫度、氮保護、抗生素）的調整和消除等。應確認模擬介質是否能接觸到實際生產工藝過程中所有無菌產品可能接觸到的表面，時間間隔是否具有可比性（比如溶解過濾時間應不短于實際生產過程中使用的時間），可將時間延長來模擬最差條件，如果縮短時間來模擬，需要說明/論證是否(fou)縮短時間后的條件(jian)可等同于生產(chan)工藝的最差條件(jian)。

其它(ta)要求可(ke)參考無菌制劑的驗證相關內容。

附件1：滅菌(jun)工(gong)藝選擇的決策樹

溶液劑型產品滅菌方法(fa)選擇的決策樹

附件2：D值的測定方法

一般可以采用毛細管暴熱計時法測定污染微(wei)生(sheng)物的耐熱參數D值(zhi)，測定主(zhu)要包(bao)括以下幾個步驟：

①制(zhi)樣：將(jiang)產品中(zhong)的(de)(de)微生物分(fen)離，將(jiang)菌(jun)膜(mo)或者孢子懸浮液(ye)分(fen)別放(fang)入注射用水或者磷酸鹽(yan)緩沖(chong)液(ye)中(zhong)，采用適宜的(de)(de)設備振(zhen)動使其分(fen)散均(jun)勻，制(zhi)備成濃度約為108個(ge)/ml的(de)(de)懸浮液(ye)，然后在沸水中(zhong)加熱(re)約10分(fen)鐘以(yi)殺滅(mie)可(ke)能存在的(de)(de)芽孢繁殖體(ti)。

②測(ce)定(ding)：將(jiang)上述懸浮液注(zhu)入適宜長度的(de)毛細管中，使每管的(de)菌量為106個孢子，封口，置于校正過的(de)121℃的(de)油浴中曝(pu)熱。每隔(ge)1-3分(fen)鐘取出(chu)兩支毛細管并迅(xun)速冷卻，制備孢子溶液，培(pei)養后(hou)計數(shu)。

③計算：根(gen)據公式(shi)lgNt=lgN0-t/D ，其中，N0和Nt分別為(wei)零時(shi)和曝熱(re)t 時(shi)間的(de)(de)孢子的(de)(de)濃度。

由以(yi)(yi)上的D值(zhi)的測定方法可知，測定所(suo)需(xu)的儀器并不非(fei)常復(fu)雜，但需(xu)要專業技術人員和經(jing)驗的積累。在不具(ju)備D值(zhi)測定條件時，可以(yi)(yi)采用測定污染菌的耐熱性來代替(ti)。

附件(jian)3：生物(wu)指示劑(ji)用量的確定方法。

① 陰性分(fen)數(shu)法

根據公式：

F0=L×t，其(qi)中L為滅菌(jun)溫(wen)度的(de)滅菌(jun)率(lv)（Z=10），t為滅菌(jun)時(shi)間。

SLR=FO/Dbi  ，其中SLR為spore log reduction，即孢子對(dui)數(shu)下(xia)降值，Dbi為所(suo)選用的生物指示(shi)劑的D值。

SLR=lgNO- lgNt  ，其中NO為(wei)滅(mie)菌前容(rong)器內初(chu)始(shi)孢(bao)子數(shu)(shu)，Nt為(wei)滅(mie)菌后(hou)容(rong)器內殘(can)存(cun)孢(bao)子數(shu)(shu)。

lgNt=2.303×lg(n/q) ，其中n為(wei)挑戰性試驗瓶(ping)樣品總(zong)數，q為(wei)挑戰性試驗結(jie)果為(wei)陰(yin)性的瓶(ping)數)

可以得到：

lgNO  =lgNt +SLR= 2.303×lg(n/q) +&nbsp;FO/Dbi  =2.303×lg(n/q) + L×t /Dbi

當濕熱滅(mie)菌工(gong)藝的(de)(de)滅(mie)菌溫度和(he)滅(mie)菌時間確(que)定(ding)后(hou)，L、t可以(yi)(yi)確(que)定(ding)；生物指示劑確(que)定(ding)后(hou)，Dbi可以(yi)(yi)確(que)定(ding)；微生物挑戰試(shi)驗(yan)方案確(que)定(ding)后(hou)，n、q可以(yi)(yi)確(que)定(ding)。所以(yi)(yi)，通過以(yi)(yi)上的(de)(de)幾個(ge)公式，可以(yi)(yi)計算出(chu)生物指示劑的(de)(de)用量，即(ji)NO。

需要說明的是，在常規的生(sheng)(sheng)產條(tiao)件下，如采(cai)用(yong)115℃滅(mie)菌(jun)30分鐘，假定(ding)采(cai)用(yong)的生(sheng)(sheng)物(wu)指示(shi)劑的D值為(wei)1，那么，計算得到(dao)的生(sheng)(sheng)物(wu)指示(shi)劑的用(yong)量為(wei)106，這也是微生(sheng)(sheng)物(wu)挑(tiao)戰試驗時常規采(cai)用(yong)的用(yong)量。

② 殘存曲線法(fa)

根據公式：

FT/Dbi = lgNO  +1，其中FT 為(wei)(wei)T滅(mie)菌值(zhi)，即(ji)給定(ding)Z（Z=10）值(zhi)下(xia)，滅(mie)菌程序(xu)在溫度T下(xia)的(de)(de)等效滅(mie)菌時間，FT= F0/L；Dbi為(wei)(wei)所選用的(de)(de)生物指(zhi)示劑的(de)(de)D值(zhi)；NO為(wei)(wei)滅(mie)菌前容器內(nei)初始孢子數。

當濕熱滅菌(jun)工藝的滅菌(jun)溫度確定(ding)(ding)(ding)(ding)后(hou)，L可(ke)以確定(ding)(ding)(ding)(ding)；生物指(zhi)示(shi)(shi)劑確定(ding)(ding)(ding)(ding)后(hou)，Dbi可(ke)以確定(ding)(ding)(ding)(ding)；當F0設定(ding)(ding)(ding)(ding)后(hou)，即可(ke)計算出生物指(zhi)示(shi)(shi)劑的用(yong)量，即NO。