一、前言
本指導原則旨在(zai)指導注(zhu)(zhu)冊(ce)(ce)申請人(ren)對(dui)流行性感冒病毒（以下(xia)簡稱流感病毒）核酸檢測試劑注(zhu)(zhu)冊(ce)(ce)申報(bao)資料的(de)(de)準備及撰(zhuan)寫，同時也為技(ji)術(shu)審評部門對(dui)注(zhu)(zhu)冊(ce)(ce)申報(bao)資料的(de)(de)技(ji)術(shu)審評提(ti)供參(can)考。
本(ben)指(zhi)導原則(ze)是對(dui)(dui)流感病(bing)毒核酸(suan)檢(jian)測試劑的(de)(de)一般(ban)要(yao)求，申請人應依據(ju)產(chan)品的(de)(de)具(ju)(ju)體(ti)特(te)性確定其中內(nei)容是否(fou)適(shi)用，若不適(shi)用，需具(ju)(ju)體(ti)闡述理由及相應的(de)(de)科(ke)學依據(ju)，并依據(ju)產(chan)品的(de)(de)具(ju)(ju)體(ti)特(te)性對(dui)(dui)注冊申報資料的(de)(de)內(nei)容進行(xing)充實和細化(hua)。
本指(zhi)導原(yuan)(yuan)則是對申請人和審查(cha)人員(yuan)的指(zhi)導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政(zheng)事項，亦不作為法(fa)(fa)規強制執(zhi)行，如果(guo)有(you)能(neng)夠滿(man)足相關法(fa)(fa)規要求的其(qi)他方法(fa)(fa)，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證(zheng)資料，相關人員(yuan)應(ying)在(zai)遵循相關法(fa)(fa)規的前提下(xia)使用本指(zhi)導原(yuan)(yuan)則。
本指(zhi)導原(yuan)則(ze)是在(zai)現(xian)行法規和標準體系(xi)以及(ji)當(dang)前認知水平下制定(ding)的，隨著法規和標準的不(bu)斷(duan)完善(shan)，以及(ji)科學技術的不(bu)斷(duan)發展，本指(zhi)導原(yuan)則(ze)相(xiang)關內(nei)容也將適時進(jin)行調(diao)整。
二(er)、適用范圍
流(liu)感(gan)(gan)病毒核酸檢測(ce)試劑(ji)是指利(li)用熒光探針聚合酶鏈(lian)式反(fan)應（PCR）或(huo)其(qi)他類分子生(sheng)物(wu)(wu)學(xue)方法，以特定的流(liu)感(gan)(gan)病毒基(ji)因序列為(wei)檢測(ce)目標，對人咽(yan)拭子、呼吸(xi)道(dao)洗液、抽吸(xi)液或(huo)其(qi)他呼吸(xi)道(dao)分泌物(wu)(wu)樣本中的流(liu)感(gan)(gan)病毒進行體外定性(xing)檢測(ce)的試劑(ji)。
本指(zhi)導原(yuan)則(ze)適用于進行首次注冊(ce)申報和相關(guan)許(xu)可事項變更的產品(pin)。
三、注冊申報資料要求
（一）綜述(shu)資料
流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)包括甲(jia)、乙、丙三型(xing)(xing)(xing)，甲(jia)型(xing)(xing)(xing)最容易(yi)引起流(liu)(liu)(liu)(liu)行(xing)(xing)，乙型(xing)(xing)(xing)次之，丙型(xing)(xing)(xing)極(ji)少(shao)引起流(liu)(liu)(liu)(liu)行(xing)(xing)。依據病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)顆粒(li)外膜血(xue)凝素（HA）和(he)神經氨酸(suan)(suan)酶（NA）蛋白抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)不同，甲(jia)型(xing)(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)目(mu)前可(ke)分為(wei)(wei)16個H亞(ya)(ya)型(xing)(xing)(xing)（H1-H16）和(he)9個N亞(ya)(ya)型(xing)(xing)(xing)（N1-N9），目(mu)前已有(you)H1、H2、H3、H5、H7和(he)H9等亞(ya)(ya)型(xing)(xing)(xing)有(you)人(ren)(ren)(ren)(ren)感(gan)(gan)染(ran)的(de)(de)(de)(de)報道(dao)。由于編碼HA和(he)（或(huo)）NA的(de)(de)(de)(de)核苷酸(suan)(suan)序列容易(yi)發(fa)(fa)(fa)生(sheng)(sheng)突(tu)變(bian)(bian)(bian)(bian)，致(zhi)使HA和(he)（或(huo)）NA的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)表位發(fa)(fa)(fa)生(sheng)(sheng)改變(bian)(bian)(bian)(bian)，這(zhe)種抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)改變(bian)(bian)(bian)(bian)使人(ren)(ren)(ren)(ren)群原(yuan)(yuan)(yuan)有(you)的(de)(de)(de)(de)特異(yi)性(xing)(xing)免疫(yi)力失效，故甲(jia)型(xing)(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)常(chang)引起較大規模甚至世界性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)流(liu)(liu)(liu)(liu)行(xing)(xing)。按照流(liu)(liu)(liu)(liu)行(xing)(xing)特點，造成人(ren)(ren)(ren)(ren)間流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)流(liu)(liu)(liu)(liu)行(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)可(ke)區分為(wei)(wei)季節(jie)性(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)和(he)新型(xing)(xing)(xing)甲(jia)型(xing)(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)。季節(jie)性(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)通常(chang)在年(nian)(nian)度間發(fa)(fa)(fa)生(sheng)(sheng)小(xiao)范圍(wei)的(de)(de)(de)(de)基(ji)因(yin)變(bian)(bian)(bian)(bian)異(yi)，這(zhe)種基(ji)因(yin)變(bian)(bian)(bian)(bian)異(yi)會導(dao)(dao)致(zhi)微(wei)小(xiao)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)性(xing)(xing)改變(bian)(bian)(bian)(bian)，稱(cheng)為(wei)(wei)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)漂移（antigenic drift）。因(yin)此，季節(jie)性(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)雖具有(you)年(nian)(nian)度特異(yi)性(xing)(xing)且抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)改變(bian)(bian)(bian)(bian)使感(gan)(gan)染(ran)者不易(yi)獲得持久免疫(yi)力，但傳播范圍(wei)通常(chang)局限于較小(xiao)的(de)(de)(de)(de)人(ren)(ren)(ren)(ren)群范圍(wei)，一般不會造成太高的(de)(de)(de)(de)發(fa)(fa)(fa)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)率(lv)和(he)死亡率(lv)，易(yi)感(gan)(gan)人(ren)(ren)(ren)(ren)群多為(wei)(wei)老年(nian)(nian)人(ren)(ren)(ren)(ren)（>65歲）和(he)嬰幼兒(er)（<6歲）。在過(guo)去的(de)(de)(de)(de)幾十年(nian)(nian)中，季節(jie)性(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)主要集中在甲(jia)型(xing)(xing)(xing)H3N2和(he)H1N1亞(ya)(ya)型(xing)(xing)(xing)。近年(nian)(nian)來，新型(xing)(xing)(xing)甲(jia)型(xing)(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)亞(ya)(ya)型(xing)(xing)(xing)暴發(fa)(fa)(fa)流(liu)(liu)(liu)(liu)行(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)案例(li)時(shi)有(you)發(fa)(fa)(fa)生(sheng)(sheng)。例(li)如，2009年(nian)(nian)新型(xing)(xing)(xing)甲(jia)型(xing)(xing)(xing)H1N1流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)造成全球(qiu)性(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)大流(liu)(liu)(liu)(liu)行(xing)(xing)；人(ren)(ren)(ren)(ren)感(gan)(gan)染(ran)高致(zhi)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)性(xing)(xing)禽(qin)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)（H5亞(ya)(ya)型(xing)(xing)(xing)）病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)的(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)例(li)時(shi)有(you)報道(dao)，禽(qin)類甲(jia)型(xing)(xing)(xing)H5N1亞(ya)(ya)型(xing)(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)被認為(wei)(wei)具有(you)造成人(ren)(ren)(ren)(ren)間大范圍(wei)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)流(liu)(liu)(liu)(liu)行(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)潛力。新型(xing)(xing)(xing)甲(jia)型(xing)(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)通常(chang)由于基(ji)因(yin)的(de)(de)(de)(de)節(jie)段性(xing)(xing)重組所(suo)致(zhi)，這(zhe)種大范圍(wei)的(de)(de)(de)(de)基(ji)因(yin)改變(bian)(bian)(bian)(bian)易(yi)導(dao)(dao)致(zhi)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)特性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)重大改變(bian)(bian)(bian)(bian)，稱(cheng)為(wei)(wei)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)轉(zhuan)變(bian)(bian)(bian)(bian)（antigenic shift）。新型(xing)(xing)(xing)甲(jia)型(xing)(xing)(xing)H1N1流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)（2009）即同時(shi)包含(han)了禽(qin)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)、豬流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)和(he)人(ren)(ren)(ren)(ren)季節(jie)性(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)的(de)(de)(de)(de)基(ji)因(yin)片段從而(er)導(dao)(dao)致(zhi)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)在抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)水平發(fa)(fa)(fa)生(sheng)(sheng)了明顯改變(bian)(bian)(bian)(bian)。由于抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)明顯改變(bian)(bian)(bian)(bian)以(yi)及可(ke)能由此造成的(de)(de)(de)(de)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)毒(du)(du)(du)(du)力的(de)(de)(de)(de)增(zeng)強，病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)的(de)(de)(de)(de)傳染(ran)性(xing)(xing)和(he)致(zhi)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)嚴重程(cheng)度都有(you)所(suo)增(zeng)加，故新型(xing)(xing)(xing)甲(jia)型(xing)(xing)(xing)流(liu)(liu)(liu)(liu)感(gan)(gan)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)毒(du)(du)(du)(du)可(ke)能造成更高的(de)(de)(de)(de)發(fa)(fa)(fa)病(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)(bing)率(lv)和(he)死亡率(lv)。
流(liu)(liu)感(gan)病(bing)毒(du)(du)主要經空氣(qi)飛沫傳播(bo)，常引起發熱(re)、乏力、肌肉酸痛(tong)以及輕到(dao)中(zhong)度(du)的(de)呼吸道癥狀，重者(zhe)可(ke)致肺炎、心肌炎和心衰。流(liu)(liu)感(gan)病(bing)毒(du)(du)核酸檢(jian)測(ce)試劑可(ke)用于流(liu)(liu)感(gan)的(de)輔助診斷，甲型(xing)流(liu)(liu)感(gan)病(bing)毒(du)(du)各亞(ya)型(xing)檢(jian)測(ce)試劑還可(ke)用于區分季節性(xing)流(liu)(liu)感(gan)病(bing)毒(du)(du)和新型(xing)甲型(xing)流(liu)(liu)感(gan)病(bing)毒(du)(du)，并可(ke)獲得關于流(liu)(liu)感(gan)暴(bao)發的(de)流(liu)(liu)行病(bing)學(xue)信息。
用于流感病毒檢(jian)(jian)測(ce)的樣本采集(ji)無法(fa)標準(zhun)化，且具(ju)有一定的隨意性，利用核酸定量檢(jian)(jian)測(ce)的方法(fa)對流感病人進行(xing)病情監(jian)測(ce)或療效觀察，并無合理的臨床(chuang)指導意義，甚至可能(neng)導致(zhi)錯誤的醫學解釋(shi)，誤導用藥量的增減或其(qi)他診療措施(shi)，因(yin)此，不(bu)建(jian)議企業研發流感病毒核酸的定量檢(jian)(jian)測(ce)試劑。
在(zai)注冊申報資料中(zhong)，流(liu)感病毒(du)(du)的(de)命(ming)名應采用(yong)世界衛生組(zu)織關(guan)于流(liu)感病毒(du)(du)毒(du)(du)株(zhu)(zhu)命(ming)名的(de)相(xiang)關(guan)要求進行(xing)。流(liu)感病毒(du)(du)毒(du)(du)株(zhu)(zhu)命(ming)名包括6個要素：型別(bie)/宿主(zhu)/分(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)地區/毒(du)(du)株(zhu)(zhu)序(xu)號/分(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)年份（Hn和(he)Nn），H和(he)N分(fen)(fen)(fen)別(bie)代(dai)表(biao)血(xue)凝(ning)素和(he)神經氨酸酶(mei)，n是阿拉(la)伯數字，對(dui)于人(ren)流(liu)感病毒(du)(du)可以(yi)省(sheng)略宿主(zhu)信息。如名為“A/Shanghai/37T/2009（H1N1）”的(de)病毒(du)(du)株(zhu)(zhu)代(dai)表(biao)2009年在(zai)上海分(fen)(fen)(fen)離(li)(li)(li)的(de)以(yi)人(ren)為宿主(zhu)的(de)甲型H1N1亞型流(liu)感病毒(du)(du)，毒(du)(du)株(zhu)(zhu)序(xu)號為37T。
綜述(shu)資料(liao)主(zhu)要(yao)(yao)包括產(chan)(chan)品(pin)預期用途(tu)、產(chan)(chan)品(pin)描述(shu)、有關生物安全性的(de)(de)說明、研究(jiu)結(jie)(jie)果的(de)(de)總結(jie)(jie)評價以(yi)及(ji)同(tong)類產(chan)(chan)品(pin)上市(shi)情況介紹(shao)(shao)等(deng)內容，其中同(tong)類產(chan)(chan)品(pin)上市(shi)情況介紹(shao)(shao)部分(fen)應著(zhu)重從方法學(xue)及(ji)不同(tong)類型毒株檢出能(neng)力(li)等(deng)方面(mian)寫明擬申報產(chan)(chan)品(pin)與(yu)目前(qian)市(shi)場上已獲批(pi)準的(de)(de)同(tong)類產(chan)(chan)品(pin)之間的(de)(de)主(zhu)要(yao)(yao)區(qu)別。應符合《體外診(zhen)斷試劑(ji)注冊管(guan)理(li)辦(ban)法（試行）》（以(yi)下簡稱《辦(ban)法》）和《體外診(zhen)斷試劑(ji)注冊申報資料(liao)基本要(yao)(yao)求》（國食(shi)藥監(jian)械〔2007〕609號）的(de)(de)相關要(yao)(yao)求。
（二）產(chan)品說(shuo)明(ming)書
說(shuo)(shuo)明(ming)書(shu)(shu)承(cheng)載了產品預(yu)期用途、標本采集及(ji)處理(li)、實驗(yan)方法(fa)、檢測結果解釋以及(ji)注意事項等(deng)重(zhong)(zhong)要信息，是(shi)指(zhi)導實驗(yan)室工作人員正確操作、臨床(chuang)醫(yi)生針對檢驗(yan)結果給出合理(li)醫(yi)學解釋的(de)重(zhong)(zhong)要依據，因此，產品說(shuo)(shuo)明(ming)書(shu)(shu)是(shi)體(ti)(ti)外診斷試劑注冊(ce)申報最重(zhong)(zhong)要的(de)文(wen)件(jian)之一(yi)(yi)。產品說(shuo)(shuo)明(ming)書(shu)(shu)的(de)格式(shi)應符(fu)合《體(ti)(ti)外診斷試劑說(shuo)(shuo)明(ming)書(shu)(shu)編寫指(zhi)導原(yuan)則(ze)》的(de)要求，境(jing)外試劑的(de)中文(wen)說(shuo)(shuo)明(ming)書(shu)(shu)除格式(shi)要求外，其內(nei)(nei)容應盡(jin)量保持(chi)(chi)與原(yuan)文(wen)說(shuo)(shuo)明(ming)書(shu)(shu)的(de)一(yi)(yi)致性，翻譯力求準確且符(fu)合中文(wen)表(biao)達(da)習慣(guan)。產品說(shuo)(shuo)明(ming)書(shu)(shu)的(de)所有內(nei)(nei)容均應與申請人提(ti)交的(de)注冊(ce)申報資料中的(de)相關(guan)研究結果保持(chi)(chi)一(yi)(yi)致，如(ru)某(mou)些內(nei)(nei)容引用自參(can)考文(wen)獻，則(ze)應以規(gui)范格式(shi)對此內(nei)(nei)容進(jin)行標注，并單(dan)獨列明(ming)文(wen)獻的(de)相關(guan)信息。
結合《體(ti)外診斷試(shi)劑(ji)說明(ming)(ming)書(shu)編(bian)(bian)寫指導原(yuan)則》的要求(qiu)，下面對(dui)流(liu)感(gan)病毒核酸檢測試(shi)劑(ji)說明(ming)(ming)書(shu)的重(zhong)點內(nei)容(rong)進行詳細(xi)說明(ming)(ming)，以指導注冊申(shen)報人員更(geng)合理(li)地完成說明(ming)(ming)書(shu)編(bian)(bian)制(zhi)。
1.【預期用途】 應至少包括(kuo)以下幾(ji)部(bu)分內容：
（1）試劑盒(he)用于定(ding)性檢測人鼻咽(yan)拭子、口咽(yan)拭子、呼(hu)吸(xi)道抽吸(xi)液、洗(xi)液和(he)/或其(qi)他(ta)呼(hu)吸(xi)道分(fen)泌物樣本的(de)流感(gan)病毒核(he)酸，適用樣本類型應結(jie)合(he)實際的(de)臨床研究(jiu)完(wan)成情(qing)況進行確認。
（2）簡單(dan)介(jie)紹待測目標的特(te)征，如病毒種系淵(yuan)源、生物學(xue)性狀、宿主特(te)性、致(zhi)病性、感染后臨(lin)床表現(xian)、待測靶基因特(te)征等。
（3）待測人群特征(zheng)介紹：具有流感(gan)樣癥狀的患者(zhe)、相(xiang)關的密切(qie)接觸(chu)者(zhe)、地域要求或年齡限制（如有）等。
（4）強(qiang)調：實(shi)(shi)驗(yan)操作(zuo)人員應接受(shou)過(guo)基因(yin)擴增(zeng)或分(fen)子生(sheng)物學(xue)方法檢測的(de)專業(ye)培訓，具備(bei)相關的(de)實(shi)(shi)驗(yan)操作(zuo)資格，實(shi)(shi)驗(yan)室應具備(bei)合理的(de)生(sheng)物安全防備(bei)設施及防護(hu)程序。
2.【主要組成成份】
（1）說明(ming)試劑(ji)盒包含(han)組(zu)分(fen)的名(ming)稱、數量(liang)、比例(li)或(huo)(huo)濃(nong)度等信息，陰性(xing)/陽性(xing)對(dui)照品(pin)（或(huo)(huo)質控品(pin)）可能含(han)有人源組(zu)分(fen)，應提供其生(sheng)物(wu)學(xue)來源、活性(xing)及(ji)其他特性(xing)；不同批號試劑(ji)盒中各組(zu)分(fen)是否(fou)可以互(hu)換。
（2）試劑盒中不包含但對該項檢測必須的(de)組分(fen)，企業應列出相關(guan)試劑/耗材的(de)名稱(cheng)、貨號及其他相關(guan)信(xin)息。
（3）如果(guo)試劑(ji)盒中不包含(han)用于核酸分(fen)離/純化(hua)(hua)的(de)試劑(ji)組分(fen)，則應在此注明經驗證后(hou)推(tui)薦(jian)配合使用的(de)商品(pin)化(hua)(hua)核酸分(fen)離/純化(hua)(hua)試劑(ji)盒的(de)生(sheng)產企(qi)業、產品(pin)名稱以及(ji)產品(pin)貨號等(deng)詳細(xi)信息。
3.【儲存條件及有效期】
試劑(ji)盒的效期穩(wen)定(ding)(ding)性、開封(feng)穩(wen)定(ding)(ding)性、復融穩(wen)定(ding)(ding)性、運輸(shu)穩(wen)定(ding)(ding)性、凍融次(ci)數要求(qiu)等。
4.【樣(yang)本要(yao)求(qiu)】 重點明(ming)確(que)以下內容：
（1）樣(yang)本采集時間點(dian)的選擇：是否受臨床癥狀、用(yong)藥(yao)情況等(deng)因素(su)的影(ying)響。
（2）對(dui)采樣(yang)(yang)拭(shi)(shi)(shi)子(zi)(zi)、容器及保存(cun)液(ye)的要求(qiu)(qiu)：對(dui)采樣(yang)(yang)拭(shi)(shi)(shi)子(zi)(zi)的材質(zhi)要求(qiu)(qiu)（包括(kuo)對(dui)拭(shi)(shi)(shi)子(zi)(zi)頭和拭(shi)(shi)(shi)子(zi)(zi)桿的要求(qiu)(qiu)）、保存(cun)容器、轉運(yun)保存(cun)液(ye)的要求(qiu)(qiu)、轉運(yun)條件(jian)等。
（3）樣本采(cai)集(ji)：具體采(cai)集(ji)部位及(ji)類型，詳述具體的操作(zuo)方法或(huo)列(lie)出(chu)相(xiang)關操作(zuo)指南(nan)文(wen)件以指導使(shi)用者（最(zui)好能夠給出(chu)具體圖(tu)示），盡(jin)量減少由于樣本采(cai)集(ji)或(huo)處(chu)理不當對實(shi)驗造成(cheng)的影響。
（4）樣本(ben)(ben)處(chu)理及保(bao)存(cun)：核酸(suan)提取(qu)前的預處(chu)理、保(bao)存(cun)條件(jian)及期限(xian)(xian)（短(duan)期、長期）、運輸條件(jian)等。冷藏/冷凍樣本(ben)(ben)檢測前是否須恢(hui)復(fu)室溫，凍融次數限(xian)(xian)制(zhi)。
5.【適(shi)用(yong)機型(xing)】所有適(shi)用(yong)的儀器(qi)型(xing)號(hao)，并(bing)提供與儀器(qi)有關的重要信息以指導(dao)用(yong)戶操作。
6.【檢驗方(fang)法】 詳細(xi)說明實驗操作(zuo)的各個(ge)步驟，包(bao)括：
（1）實驗(yan)條(tiao)件(jian)：實驗(yan)室分區、實驗(yan)環境(jing)的溫度、濕度、空調氣流方向控制等注意事項。
（2）試劑配制方法、注意事(shi)項。
（3）詳述待測樣本及(ji)相關對照品(pin)（質控品(pin)）核(he)酸提取的條件(jian)、步(bu)驟及(ji)注意(yi)事項。
（4）核酸提取方(fang)法的(de)詳細介紹。
（5）擴(kuo)增反應前(qian)準備：加樣體積、順序等(deng)。
（6）RT-PCR各階段的溫度、時間設(she)置、循(xun)環數設(she)置及相關注意事項。
（7）儀(yi)器設置：特殊參數、結合探針的熒光素標(biao)記(ji)情(qing)況對待測(ce)基因及內標(biao)的熒光通(tong)道選擇。
（8）基線、循環閾值（Ct值）的選擇方法。
7.【檢驗結果的解釋(shi)】
結(jie)(jie)合陽性(xing)對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)、陰性(xing)對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)、內對(dui)(dui)照(zhao)(zhao)（內標）以及(ji)樣本管(guan)靶(ba)基因檢(jian)測結(jie)(jie)果(guo)(guo)的(de)(de)Ct值(zhi)，以列(lie)表的(de)(de)形(xing)式對(dui)(dui)所有可能(neng)出現(xian)的(de)(de)結(jie)(jie)果(guo)(guo)組合及(ji)相應(ying)的(de)(de)解(jie)(jie)釋(shi)進(jin)(jin)行詳(xiang)(xiang)述(shu)。如存在檢(jian)測灰區，應(ying)對(dui)(dui)灰區結(jie)(jie)果(guo)(guo)的(de)(de)處理(li)方式一并(bing)詳(xiang)(xiang)述(shu)。另(ling)外，如果(guo)(guo)PCR體系中包(bao)含(han)了(le)兩個或(huo)以上的(de)(de)熒(ying)光探針對(dui)(dui)靶(ba)基因序列(lie)進(jin)(jin)行檢(jian)測，則在結(jie)(jie)果(guo)(guo)解(jie)(jie)釋(shi)時(shi)，應(ying)對(dui)(dui)每個探針所對(dui)(dui)應(ying)熒(ying)光通(tong)道的(de)(de)Ct值(zhi)的(de)(de)結(jie)(jie)果(guo)(guo)及(ji)可能(neng)產生的(de)(de)結(jie)(jie)果(guo)(guo)組合均進(jin)(jin)行合理(li)解(jie)(jie)釋(shi)。說明對(dui)(dui)何種條件下(xia)需要進(jin)(jin)行重復(fu)檢(jian)測以及(ji)在重復(fu)檢(jian)測時(shi)對(dui)(dui)待測樣本可能(neng)采(cai)取(qu)的(de)(de)優化(hua)條件等進(jin)(jin)行詳(xiang)(xiang)述(shu)。
8.【檢驗方法局限性】
（1）本試劑(ji)盒的(de)(de)檢測結果僅供(gong)臨床參(can)考，對(dui)患者的(de)(de)臨床診(zhen)治(zhi)應結合其癥(zheng)狀(zhuang)/體征、病史(shi)、其他實驗室檢查及治(zhi)療(liao)反應等情況綜合考慮。
（2）有關假陰(yin)性結果的可(ke)能(neng)性分析
①不合(he)理(li)(li)的樣(yang)本(ben)采集、轉運(yun)及處(chu)理(li)(li)、樣(yang)本(ben)中病毒滴(di)度過(guo)低均有可能(neng)導(dao)致假陰(yin)性結果。
②流感病毒待測靶序列(lie)的(de)變(bian)異或其他原因導致(zhi)的(de)序列(lie)改(gai)變(bian)可能會導致(zhi)假陰(yin)性結果。
③對于突發(fa)的新型(xing)(xing)甲型(xing)(xing)流(liu)感病毒，其檢測(ce)的最適樣(yang)本類型(xing)(xing)及感染后(hou)的最佳采樣(yang)時(shi)間(jian)可能(neng)尚未確認，因(yin)此，在同一患(huan)者分次、多部位(wei)采集樣(yang)本會降低假陰性結果的可能(neng)性。
④未經驗證的其他干擾(rao)或PCR抑(yi)制因子，如……等可能會(hui)導致假陰(yin)性結果(guo)（如有）。
9.【產品性(xing)能指標】 詳(xiang)述(shu)以下性(xing)能指標：
（1）對相應(ying)國(guo)家(jia)參考品（如有(you)）檢(jian)測(ce)的符(fu)合(he)情況。對于甲(jia)型流感通用型核酸(suan)檢(jian)測(ce)試劑，應(ying)列出所有(you)驗(yan)證過的甲(jia)型各亞型病毒株(zhu)的信息。
（2）最(zui)低檢(jian)測(ce)限（分(fen)析(xi)靈敏度）：說明試劑的最(zui)低檢(jian)出濃度，建議采(cai)(cai)用(yong)生(sheng)物學方式表示病毒滴度，如半數組織培養感染量(liang)（TCID50）或(huo)空斑(ban)形成(cheng)單(dan)位（PFU）的形式，簡單(dan)介(jie)紹最(zui)低檢(jian)測(ce)限的確定方法以及(ji)對(dui)最(zui)低檢(jian)測(ce)限驗證所采(cai)(cai)用(yong)的病毒株信息。
（3）企業(ye)內部陽性(xing)/陰性(xing)參考(kao)品(pin)(pin)符合率，簡單介紹陽性(xing)參考(kao)品(pin)(pin)的來源、濃度梯度、陰性(xing)參考(kao)品(pin)(pin)組成、來源以及濃度梯度設置等信(xin)息。
（4）精(jing)密(mi)度：精(jing)密(mi)度參考品的組分、濃度及評價(jia)標準。
（5）分析特異性
①甲(jia)型流(liu)感病毒各亞型間的交(jiao)叉反應(ying)驗證：針對(dui)甲(jia)型流(liu)感病毒亞型檢測的試劑(ji)盒，則應(ying)對(dui)較(jiao)常見的除目(mu)的基因外的其他亞型進行交(jiao)叉反應(ying)驗證并對(dui)結果進行合理(li)分(fen)析；
②交(jiao)叉反應：易產生交(jiao)叉反應的其(qi)他(ta)病原體核(he)酸的驗證情況，建議以列表的方式表示經過交(jiao)叉反應驗證的病原體名稱、型別(bie)、濃度等信息；
③干擾物質(zhi)：樣本(ben)中常(chang)見干擾物質(zhi)對(dui)檢測結果的影(ying)響，如血(xue)液、粘(zhan)蛋白、膿液等(deng)；
④藥物影響(xiang)(xiang)：治療感(gan)冒或其他呼吸道癥狀患者外用或內服的常見藥物對(dui)檢測結果的影響(xiang)(xiang)，如(ru)常見抗感(gan)冒藥物、糖皮(pi)質(zhi)激素、抗生素、中藥等。
（6）對(dui)比(bi)試驗研究（如(ru)有）：簡(jian)要介紹參比(bi)試劑（方(fang)法(fa)(fa)）的(de)信息、所采用的(de)統(tong)計學(xue)方(fang)法(fa)(fa)及(ji)統(tong)計分析結果(guo)。
10.【注意(yi)事項】應至少包括(kuo)以下(xia)內(nei)容(rong)：
（1）有關人(ren)源(yuan)(yuan)組(zu)分（如(ru)有）的警告，如(ru)：試劑盒內對(dui)照品（質控品）或(huo)其他可能含(han)有人(ren)源(yuan)(yuan)物質的組(zu)分，雖(sui)已經通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢(jian)(jian)測，但截(jie)至(zhi)目前，沒有任何(he)一(yi)項檢(jian)(jian)測可以確保絕(jue)對(dui)安全(quan)，故仍(reng)應將這些(xie)組(zu)分作為潛在傳染(ran)源(yuan)(yuan)對(dui)待。
（2）實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)管理應(ying)嚴格按照國家有關(guan)分(fen)子生物(wu)(wu)學實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)、臨(lin)床基因擴(kuo)增(zeng)實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)的管理規(gui)范執行。實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)人員必須(xu)進行專(zhuan)(zhuan)業培訓；實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)過程應(ying)分(fen)區進行（試劑(ji)準備區、樣本制備區、擴(kuo)增(zeng)和(he)產物(wu)(wu)分(fen)析區），實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)操作(zuo)的每個階(jie)段(duan)使(shi)用(yong)專(zhuan)(zhuan)用(yong)的儀器和(he)設備，各(ge)區各(ge)階(jie)段(duan)用(yong)品不得交叉使(shi)用(yong)；各(ge)區間人員流動及空氣流向應(ying)有嚴格要求，最大限(xian)度避免交叉污(wu)染(ran)；實(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)用(yong)消(xiao)耗品（如(ru)離心(xin)管、吸頭等）應(ying)有合(he)理的清潔(jie)和(he)質檢(jian)程序(xu)，避免RNA酶污(wu)染(ran)或擴(kuo)增(zeng)反應(ying)抑制物(wu)(wu)造成假陰(yin)性結果(guo)。
（三）擬定產品(pin)標(biao)準及編制(zhi)說明
擬定(ding)產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)標(biao)準(zhun)應符合《辦法》和《體外(wai)診斷(duan)試(shi)劑(ji)注冊申報資料(liao)基本要(yao)求》的相關規(gui)定(ding)。另外(wai)，對(dui)于國產(chan)(chan)試(shi)劑(ji)，應參考《中(zhong)國生物制品(pin)(pin)(pin)規(gui)程(cheng)》（2000年版），將(jiang)擬申報產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)的主要(yao)原材料(liao)、生產(chan)(chan)工藝(yi)及半成品(pin)(pin)(pin)檢定(ding)等內(nei)容(rong)(rong)作為(wei)附錄(lu)附于標(biao)準(zhun)正(zheng)文后(hou)，并在正(zheng)文的“產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)分類”項(xiang)中(zhong)引(yin)出該附錄(lu)內(nei)容(rong)(rong)。附錄(lu)中(zhong)應將(jiang)待測(ce)靶基因的基因位點、全序列，引(yin)物/探針序列、來(lai)源及驗證(zheng)(zheng)情況，各種酶(mei)的來(lai)源、特性(xing)以(yi)及驗證(zheng)(zheng)等重(zhong)點內(nei)容(rong)(rong)予以(yi)明(ming)確。
流(liu)(liu)感病(bing)毒核(he)酸檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)的(de)注(zhu)冊檢(jian)測(ce)應(ying)(ying)(ying)主要包括以下性(xing)(xing)能指標：物理性(xing)(xing)狀、試(shi)劑(ji)盒內陰性(xing)(xing)/陽性(xing)(xing)對(dui)照品(pin)(pin)（質控品(pin)(pin)）的(de)Ct值要求（包括內標）、陽性(xing)(xing)/陰性(xing)(xing)參(can)(can)考品(pin)(pin)符(fu)合(he)率、精密(mi)度、最低檢(jian)測(ce)限（分析(xi)靈敏(min)度）等。陽性(xing)(xing)參(can)(can)考品(pin)(pin)主要考察對(dui)不同(tong)(tong)來源的(de)病(bing)毒株(zhu)、不同(tong)(tong)滴度的(de)檢(jian)測(ce)符(fu)合(he)性(xing)(xing)，對(dui)于甲型(xing)流(liu)(liu)感病(bing)毒核(he)酸通(tong)用型(xing)檢(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)，在此還(huan)應(ying)(ying)(ying)考慮不同(tong)(tong)亞型(xing)的(de)覆蓋檢(jian)測(ce)能力。陰性(xing)(xing)參(can)(can)考品(pin)(pin)則是對(dui)分析(xi)特(te)異性(xing)(xing)（交叉(cha)反應(ying)(ying)(ying)）的(de)驗證，應(ying)(ying)(ying)主要包括易發生交叉(cha)反應(ying)(ying)(ying)的(de)其他病(bing)原體的(de)假陽性(xing)(xing)情況的(de)考核(he)。
如果擬申報試劑已有相應的國家(jia)/行業標(biao)準發布，則企業標(biao)準的要求不得低(di)于上述(shu)標(biao)準要求。
（四(si)）注冊(ce)檢測
根(gen)據(ju)《辦法》要求，首(shou)次申請注冊的(de)(de)(de)(de)(de)第三類產品(pin)(pin)應(ying)該在(zai)國(guo)家食(shi)品(pin)(pin)藥品(pin)(pin)監督管理局認可(ke)的(de)(de)(de)(de)(de)、具(ju)有(you)相應(ying)承(cheng)檢(jian)范圍的(de)(de)(de)(de)(de)醫療(liao)器械檢(jian)測機構進行連續(xu)3個生產批次樣(yang)品(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)注冊檢(jian)測。對(dui)(dui)于(yu)已經(jing)有(you)國(guo)家標(biao)(biao)準品(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)流感(gan)病毒項目(mu)(mu)，在(zai)注冊檢(jian)測時應(ying)采用相應(ying)的(de)(de)(de)(de)(de)國(guo)家標(biao)(biao)準品(pin)(pin)進行,對(dui)(dui)于(yu)目(mu)(mu)前尚無國(guo)家標(biao)(biao)準品(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)(de)項目(mu)(mu)，生產企業應(ying)建立自己(ji)的(de)(de)(de)(de)(de)參考(kao)品(pin)(pin)體系并提(ti)供相應(ying)的(de)(de)(de)(de)(de)內部參考(kao)品(pin)(pin)。
（五）主要原材(cai)料(liao)研究資(zi)料(liao)
應(ying)(ying)提(ti)供(gong)(gong)(gong)主(zhu)要原(yuan)材料(liao)如引物(wu)、探針、企(qi)業參考品或標準品的(de)選擇與來源、制(zhi)備過(guo)程(cheng)、質量(liang)(liang)分析(xi)和質控標準等的(de)相(xiang)關(guan)研(yan)究資(zi)料(liao)。若主(zhu)要原(yuan)材料(liao)為企(qi)業自(zi)己(ji)生產，其生產工藝必須相(xiang)對(dui)穩定；如主(zhu)要原(yuan)材料(liao)購自(zi)其他供(gong)(gong)(gong)貨商，應(ying)(ying)提(ti)供(gong)(gong)(gong)的(de)資(zi)料(liao)包括：對(dui)物(wu)料(liao)供(gong)(gong)(gong)應(ying)(ying)商審核的(de)相(xiang)關(guan)資(zi)料(liao)、供(gong)(gong)(gong)貨方(fang)提(ti)供(gong)(gong)(gong)的(de)質量(liang)(liang)標準、出廠檢定報告，以及(ji)該(gai)原(yuan)材料(liao)到貨后的(de)質量(liang)(liang)檢驗資(zi)料(liao)。
1.核酸分離/純化組分（如(ru)有）的主要組成、原理介紹及相關的驗證(zheng)資料。
2.RT-PCR組分的主要材料（包括引物、探針(zhen)、各種酶及其(qi)他主要原料）的選擇、制備、質量標準及實驗(yan)研究資料，主要包括以下(xia)內容：
（1）脫(tuo)氧三(san)磷酸核苷（dNTP）
核酸的組成(cheng)成(cheng)分，包括(kuo)：dATP、dUTP、dGTP、dCTP和dTTP，對純度(du)、濃度(du)、保存穩定性等驗證資料(liao)。
（2）引物(wu)
由一定(ding)數量(liang)的dNTP構成(cheng)的特定(ding)序列，通常采用(yong)DNA合(he)(he)成(cheng)儀人工合(he)(he)成(cheng)，合(he)(he)成(cheng)后經聚丙烯酰胺凝(ning)膠電泳（PAGE）或其他(ta)適宜(yi)方法(fa)純(chun)(chun)化。需(xu)提(ti)供對序列準確(que)性(xing)(xing)、純(chun)(chun)度(du)、穩定(ding)性(xing)(xing)、功(gong)能性(xing)(xing)實驗(yan)等驗(yan)證(zheng)資料。如為外購，應提(ti)供合(he)(he)成(cheng)機構出具的合(he)(he)成(cheng)產物的質(zhi)檢證(zheng)明，如PAGE電泳結果或高(gao)效液相色譜(pu)法(fa)（HPLC）分析圖譜(pu)。
（3）探(tan)針
特定的(de)帶有示蹤(zong)物(wu)(wu)（標(biao)記(ji)物(wu)(wu)）的(de)已知核酸(suan)片(pian)段（寡聚核苷酸(suan)片(pian)段），能與互(hu)補核酸(suan)序(xu)列退火(huo)雜交(jiao)，用于特定核酸(suan)序(xu)列的(de)探測。合成(cheng)后經(jing)聚丙烯酰胺凝(ning)膠電泳或(huo)其他適宜方法純化(hua)，在5-端(和/或(huo)3-端)進行(xing)標(biao)記(ji)，并經(jing)HPLC或(huo)其他適宜方法純化(hua)。純度(du)應達到HPLC純，應提(ti)供合成(cheng)機構出(chu)具的(de)合成(cheng)產物(wu)(wu)的(de)質(zhi)檢證明。
（4）PCR反(fan)應所需(xu)酶
DNA聚合(he)(he)酶(mei)(mei)，應(ying)具(ju)有DNA聚合(he)(he)酶(mei)(mei)活(huo)(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)，無(wu)(wu)(wu)核(he)酸內(nei)切(qie)酶(mei)(mei)活(huo)(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)，具(ju)熱穩定性(xing)(xing)(xing)，如：94℃保溫1小時(shi)后仍保持(chi)50%活(huo)(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)；尿嘧(mi)啶糖基(ji)化酶(mei)(mei)（UNG），具(ju)有尿嘧(mi)啶糖基(ji)化活(huo)(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)，無(wu)(wu)(wu)核(he)酸外(wai)切(qie)酶(mei)(mei)及核(he)酸內(nei)切(qie)酶(mei)(mei)活(huo)(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)，應(ying)對酶(mei)(mei)活(huo)(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)有合(he)(he)理驗證；逆(ni)轉錄(lu)酶(mei)(mei)，具(ju)逆(ni)轉錄(lu)酶(mei)(mei)活(huo)(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)，無(wu)(wu)(wu)核(he)酸內(nei)切(qie)酶(mei)(mei)活(huo)(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)。應(ying)提供(gong)有關(guan)保存穩定性(xing)(xing)(xing)、活(huo)(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)(xing)及功能實驗等的驗證資料。
3.對照品（質控(kong)品）的原料選擇、制(zhi)備(bei)、定值過程及試驗資料。
4.核酸類檢測試劑(ji)的包裝材料和耗材應(ying)無DNase和RNase污(wu)染。
（六）主要生(sheng)產(chan)工藝及反應體系(xi)的研究(jiu)資料
基本生產工藝主要(yao)(yao)包括(kuo)：配制工作(zuo)液(ye)、半成品檢(jian)定、分裝和(he)包裝。配制工作(zuo)液(ye)的各種原材(cai)(cai)料及其配比應符合要(yao)(yao)求，原材(cai)(cai)料應混合均勻，配制過程應對pH、電導率等(deng)關(guan)鍵(jian)參數進行(xing)有效控(kong)制。
生產工(gong)藝研究資料應(ying)(ying)能(neng)對反應(ying)(ying)體(ti)系涉及到的基本內(nei)容，如臨床樣本用量(liang)、試(shi)劑(ji)用量(liang)、反應(ying)(ying)條(tiao)件、質控體(ti)系設置、Ct（臨界）值確定等，提供確切的依據(ju)，主要(yao)包括以(yi)下內(nei)容：
1.主要(yao)生產工藝介紹，可(ke)以(yi)圖(tu)表(biao)方式表(biao)示。
2.反(fan)應(ying)原理介紹(shao)。
3.基因位(wei)點選擇、RT-PCR方法學特性介(jie)紹。
4.確定最佳(jia)RT-PCR反應體系的研(yan)究資料，包括酶濃(nong)(nong)度、引物(wu)/探針濃(nong)(nong)度、dNTP濃(nong)(nong)度、陽離子濃(nong)(nong)度等。
5.確定RT-PCR反(fan)應各階(jie)段溫度、時間及循環(huan)數的(de)研究資(zi)料(liao)。
6.對于基線閾值（threshold）和閾值循(xun)環(huan)數（Ct）確定的研究(jiu)資料(liao)。
7.不同適用機型的反應條件如果有(you)差(cha)異(yi)應分別(bie)詳述(shu)。
另外，對于試劑盒(he)的對照（質控）品設置，建(jian)議企業參考以下(xia)要求(qiu)執行：
（1）流感病毒核酸(suan)(suan)檢測(ce)試(shi)(shi)劑盒的(de)(de)(de)(de)外部對(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)（質控）品(pin)(pin)應(ying)(ying)至少(shao)設置臨界陽性(xing)(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)（質控）品(pin)(pin)和陰(yin)性(xing)(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)（質控）品(pin)(pin)，均(jun)應(ying)(ying)參(can)與(yu)樣本(ben)核酸(suan)(suan)的(de)(de)(de)(de)平行提(ti)(ti)取，以對(dui)核酸(suan)(suan)提(ti)(ti)取、RT-PCR反(fan)應(ying)(ying)過程(cheng)、試(shi)(shi)劑/設備、交叉污染等環節進(jin)行合理質量控制，企業應(ying)(ying)對(dui)各種對(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)（質控）品(pin)(pin)的(de)(de)(de)(de)Ct值做出明確的(de)(de)(de)(de)范圍(wei)要求(qiu)。注意，建議采用(yong)與(yu)實際檢測(ce)樣本(ben)具有相同或(huo)相似性(xing)(xing)狀的(de)(de)(de)(de)基(ji)質溶液作為陰(yin)性(xing)(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)（質控）品(pin)(pin)，不推薦采用(yong)水作為陰(yin)性(xing)(xing)對(dui)照(zhao)(zhao)(zhao)（質控）品(pin)(pin)。
（2）樣本反應(ying)管(guan)應(ying)設(she)置合(he)理的(de)(de)(de)內(nei)對(dui)照（內(nei)標）以(yi)對(dui)管(guan)內(nei)抑制(zhi)可能造(zao)成(cheng)的(de)(de)(de)假(jia)(jia)陰性(xing)(xing)結果進行質控。申請人應(ying)對(dui)內(nei)標的(de)(de)(de)引(yin)物(wu)、探針和模板的(de)(de)(de)濃度做精(jing)確(que)(que)驗證(zheng)，既要保證(zheng)內(nei)標熒光通(tong)道呈明(ming)顯的(de)(de)(de)陽性(xing)(xing)曲線又要盡量(liang)降低(di)對(dui)靶基因檢測造(zao)成(cheng)的(de)(de)(de)競爭(zheng)性(xing)(xing)抑制(zhi)而導致假(jia)(jia)陰性(xing)(xing)。對(dui)內(nei)標的(de)(de)(de)Ct值也應(ying)有明(ming)確(que)(que)的(de)(de)(de)范圍(wei)要求。
（3）關(guan)于對照品的(de)原料選擇(ze)：內對照（內標）應采用(yong)(yong)具有蛋白外殼的(de)病(bing)毒(du)顆粒，如(ru)滅活的(de)流(liu)感病(bing)毒(du)或缺陷病(bing)毒(du)（假病(bing)毒(du)）等，外部(bu)陽性(xing)對照可(ke)以采用(yong)(yong)滅活病(bing)毒(du)、假病(bing)毒(du)或質粒。
（七）分析性能(neng)評估(gu)資料
企業應提交原廠(chang)在產品研制階(jie)段對(dui)試劑盒進(jin)行的(de)所有性(xing)能(neng)驗證的(de)研究資料，包(bao)括具體研究方法(fa)、內控(kong)標(biao)準、實驗數據、統計(ji)分析(xi)等詳細資料。對(dui)于流感病毒核酸類定性(xing)檢測試劑，建議著重對(dui)以下(xia)分析(xi)性(xing)能(neng)進(jin)行研究。
1.流感(gan)病毒(du)核酸（RNA）提取
病毒RNA提(ti)取主要(yao)有以下目的：富(fu)集靶(ba)核酸濃度、保(bao)證(zheng)靶(ba)核酸序列的完整(zheng)性(xing)(xing)、增加PCR模板溶液(ye)均(jun)一(yi)(yi)性(xing)(xing)、去(qu)(qu)除(chu)PCR抑制(zhi)物，是決定RT-PCR成(cheng)敗的要(yao)素之一(yi)(yi)。RNA極易(yi)受RNA酶(mei)（RNase）的降解，而(er)臨床標本(ben)和實(shi)驗室環(huan)境中存在(zai)大(da)量的RNase，因此，無論(lun)申(shen)報產(chan)品(pin)是否含有RNA分(fen)(fen)離(li)/純(chun)(chun)(chun)化的組分(fen)(fen)，企業都應(ying)(ying)對核酸提(ti)取的環(huan)節做充分(fen)(fen)的驗證(zheng)。除(chu)最(zui)大(da)量分(fen)(fen)離(li)出目的RNA外，還應(ying)(ying)有相應(ying)(ying)的純(chun)(chun)(chun)化步(bu)驟(zou)，盡可能去(qu)(qu)除(chu)PCR抑制(zhi)物。傳(chuan)統的RNA分(fen)(fen)離(li)純(chun)(chun)(chun)化方(fang)法(fa)（如表面活性(xing)(xing)劑加蛋白酶(mei)結合氯仿(fang)-酚抽提(ti)法(fa)）和改良方(fang)法(fa)（如硅磁性(xing)(xing)微粒吸附法(fa)）均(jun)有或多或少(shao)的優勢和不(bu)足，申(shen)請人(ren)應(ying)(ying)結合申(shen)報產(chan)品(pin)的特性(xing)(xing)，合理選擇RNA分(fen)(fen)離(li)/純(chun)(chun)(chun)化試劑，并提(ti)供詳細的驗證(zheng)資料。
2.最低(di)檢測(ce)限(xian)（分析靈(ling)敏度）
（1）最低(di)檢(jian)測(ce)限的(de)確定
建議(yi)使用培養后(hou)病(bing)(bing)毒原(yuan)液(ye)(ye)的(de)(de)梯度(du)稀(xi)釋液(ye)(ye)進行最低(di)(di)檢(jian)測(ce)(ce)限(xian)確(que)定，每個(ge)梯度(du)的(de)(de)病(bing)(bing)毒稀(xi)釋液(ye)(ye)重復3～5份(fen)，每份(fen)進行不少(shao)于(yu)20次(ci)的(de)(de)重復檢(jian)測(ce)(ce)，將具有90%～95%陽性檢(jian)出(chu)率(lv)的(de)(de)病(bing)(bing)毒水(shui)平作為最低(di)(di)檢(jian)測(ce)(ce)限(xian)。通過另制備至(zhi)少(shao)5份(fen)最低(di)(di)檢(jian)測(ce)(ce)限(xian)濃度(du)水(shui)平的(de)(de)病(bing)(bing)毒稀(xi)釋液(ye)(ye)對90%～95%的(de)(de)檢(jian)出(chu)率(lv)進行確(que)認(ren)。建議(yi)采用半數(shu)組織培養感(gan)染(ran)量(50% tissue culture infectious dose，TCID50）、空斑形成單位（plaque forming units，PFU）法(fa)或copies/ml的(de)(de)方(fang)式進行病(bing)(bing)毒濃度(du)確(que)認(ren)，并采用上述方(fang)式作為病(bing)(bing)毒濃度(du)的(de)(de)表示(shi)方(fang)式。在(zai)進行最低(di)(di)檢(jian)測(ce)(ce)限(xian)的(de)(de)確(que)認(ren)時，參與研究的(de)(de)甲型流感(gan)病(bing)(bing)毒各亞型和乙型流感(gan)病(bing)(bing)毒應至(zhi)少(shao)包括不同來源的(de)(de)兩個(ge)具有代表性的(de)(de)病(bing)(bing)毒株的(de)(de)系(xi)列稀(xi)釋梯度(du)。
（2）最(zui)低檢測限的驗證
申報(bao)試(shi)劑應在最(zui)低檢測(ce)限或接近最(zui)低檢測(ce)限的(de)(de)病(bing)毒(du)濃度(du)對每(mei)種常(chang)見(jian)待(dai)測(ce)流(liu)(liu)感(gan)病(bing)毒(du)亞型具有(you)時間和區域(yu)特(te)(te)征性的(de)(de)至少3個(ge)病(bing)毒(du)株進(jin)行驗證(zheng)(zheng)。對此，企業應能夠(gou)提供用(yong)于最(zui)低檢測(ce)限驗證(zheng)(zheng)的(de)(de)各個(ge)病(bing)毒(du)株的(de)(de)來源、型別(bie)確認及滴度(du)確認試(shi)驗等信息。用(yong)于最(zui)低檢測(ce)限確定和驗證(zheng)(zheng)的(de)(de)病(bing)毒(du)株如包括疫苗株，則其應能夠(gou)體(ti)現最(zui)近流(liu)(liu)感(gan)發病(bing)季的(de)(de)病(bing)毒(du)特(te)(te)點。
3.分析(xi)特異性
（1）交叉(cha)反應
①用于流感病毒(du)核酸檢測試劑(ji)交叉(cha)反(fan)應驗證的病原體種類主要考(kao)慮以下(xia)幾方面(mian)可能性(xing)：核酸序列具(ju)有同源性(xing)、易引起相同或相似的臨床癥狀、采樣部(bu)位正(zheng)常(chang)寄生或易并發的其他微生物。
②建(jian)議在(zai)病毒(du)和細菌感染的醫學相關水平進行交叉反(fan)應的驗證(zheng)。通常(chang)，細菌感染的水平為(wei)106 cfu/ml或更(geng)高，病毒(du)為(wei)105 pfu/ml或更(geng)高。
③首先，應在流(liu)感病(bing)毒不同型(xing)別和亞型(xing)間(jian)進行(xing)交叉反應驗(yan)證(zheng)；其次，采(cai)用其他的病(bing)原微生物(wu)進行(xing)驗(yan)證(zheng)（見表1）。
④申請(qing)人應(ying)提供所(suo)有(you)用于交叉(cha)反(fan)應(ying)驗證的(de)病(bing)毒和(he)細菌的(de)來源、種(zhong)屬/型別和(he)濃度確(que)認等試驗資料。有(you)關交叉(cha)反(fan)應(ying)驗證的(de)信息應(ying)以列表的(de)方式在產(chan)品說明書的(de)【產(chan)品性能指標】項中有(you)所(suo)體現。
表1 建議用于交叉反(fan)應性研(yan)究的微生物
微生(sheng)物(wu)
類型
腺病毒
3型
腺病毒
7型(xing)
人冠狀病(bing)毒
巨(ju)細胞病(bing)毒
腸道病毒
人副流感病毒(du)
1、2、3型
麻疹病毒
人偏肺病(bing)毒
流(liu)行(xing)性腮腺炎(yan)病(bing)毒
呼吸道合(he)胞病毒
B型
鼻病毒
1A型
百日咳桿(gan)菌(jun)
肺炎衣原體
棒狀桿(gan)菌*
大腸桿菌*
流(liu)感嗜血桿菌
乳桿(gan)菌*
卡(ka)他(ta)莫拉菌*
無(wu)毒結核分枝桿菌(jun)
肺炎支原體
腦膜(mo)炎奈瑟(se)菌
淋球(qiu)菌*
銅綠假單胞菌*
金(jin)黃色葡萄球菌(jun)
表皮(pi)葡萄球(qiu)菌*
肺(fei)炎鏈(lian)球菌
化膿(nong)鏈球菌
唾液鏈球(qiu)菌
*項：選擇性驗證。
（2）干擾物質
①潛在的干擾物質主要包括：血液(ye)、鼻(bi)(bi)分泌物或粘液(ye)、用(yong)于緩解鼻(bi)(bi)塞和咽(yan)部充(chong)血、鼻(bi)(bi)腔干燥、刺(ci)激、哮(xiao)喘和過(guo)敏癥狀的藥物（見表2）。
②使用醫(yi)學相(xiang)關水平的干擾(rao)物(wu)濃度進行驗證(zheng)，另外，建(jian)議申請人在每種干擾(rao)物(wu)質的潛(qian)在最大(da)濃度(“最差(cha)條(tiao)件”)條(tiao)件下進行評(ping)價。
③申請人應采用每種(zhong)流感病毒(du)亞型的(de)至少兩種(zhong)病毒(du)株(zhu)對呼吸道樣(yang)本中物質(zhi)(zhi)的(de)潛(qian)在(zai)抑制影(ying)響進(jin)行評估，建(jian)議在(zai)每種(zhong)流感病毒(du)的(de)檢測臨界值水平對每種(zhong)干(gan)擾物質(zhi)(zhi)的(de)干(gan)擾影(ying)響進(jin)行檢測。
表(biao)2 建議用(yong)于干擾研究的物質
物質
活性成分舉例
粘蛋白(bai)
純化(hua)粘(zhan)蛋白
人血液(ye)
鼻腔噴霧劑或(huo)滴鼻劑
腎上腺素、羥(qian)甲唑啉、含防腐劑的氯(lv)化鈉溶(rong)液
鼻(bi)腔糖皮質激素
倍氯(lv)米松(song)(song)、地塞米松(song)(song)、氟(fu)尼(ni)縮松(song)(song)、曲安西龍、布(bu)地奈德、莫美他松(song)(song)、氟(fu)替卡松(song)(song)
鼻用凝(ning)膠
硫磺
過(guo)敏性癥狀緩解藥(yao)物(wu)
金英
潤喉片、口(kou)服麻醉劑和鎮(zhen)痛劑
苯唑卡因、薄荷腦
抗病(bing)毒藥物
扎那米韋
抗生素(su)、鼻用軟(ruan)膏
莫匹羅星(xing)
全身抗菌藥(yao)妥(tuo)布霉(mei)素(su)
4.精密度
測量精(jing)(jing)密度(du)的(de)(de)(de)評(ping)(ping)價(jia)方法并無統一(yi)的(de)(de)(de)標準(zhun)可(ke)依，可(ke)根據不同(tong)產(chan)(chan)(chan)品特征或(huo)(huo)企業的(de)(de)(de)研(yan)(yan)究(jiu)習慣進(jin)行，前提是(shi)必須保證研(yan)(yan)究(jiu)的(de)(de)(de)科學合(he)理性。具(ju)體實驗方法可(ke)以參考相關的(de)(de)(de)CLSI-EP文件或(huo)(huo)國內有關體外診斷(duan)產(chan)(chan)(chan)品性能評(ping)(ping)估(gu)的(de)(de)(de)文件進(jin)行。企業應對(dui)每項精(jing)(jing)密度(du)指(zhi)標的(de)(de)(de)評(ping)(ping)價(jia)標準(zhun)做(zuo)出合(he)理要(yao)(yao)求，如標準(zhun)差或(huo)(huo)變異系數的(de)(de)(de)范(fan)圍等(deng)。針對(dui)本類產(chan)(chan)(chan)品的(de)(de)(de)精(jing)(jing)密度(du)評(ping)(ping)價(jia)主(zhu)要(yao)(yao)包括以下要(yao)(yao)求。
（1）對可能影(ying)響檢測(ce)精密度(du)的(de)主(zhu)要(yao)變量進(jin)行驗(yan)證，除申報(bao)試(shi)劑（包括(kuo)提取(qu)組(zu)分(fen)(fen)和RT-PCR組(zu)分(fen)(fen)）本身的(de)影(ying)響外，還(huan)應對PCR分(fen)(fen)析儀、操作者、地(di)點(dian)等要(yao)素進(jin)行相關的(de)驗(yan)證。
（2）合(he)理的(de)精密(mi)度評價(jia)(jia)周期，例(li)如(ru)：為期至少(shao)20天(tian)的(de)連續檢測(ce)，每天(tian)至少(shao)由2人(ren)完(wan)成不少(shao)于2次(ci)的(de)完(wan)整檢測(ce)，從而對批內(nei)/批間、日(ri)內(nei)/日(ri)間以(yi)及不同操作者之(zhi)間的(de)精密(mi)度進(jin)行綜合(he)評價(jia)(jia)。如(ru)有(you)條件(jian)，申請人(ren)應選擇(ze)不同的(de)實驗室進(jin)行重復(fu)實驗以(yi)對室間精密(mi)度進(jin)行評價(jia)(jia)。
（3）用(yong)于精密度評價的質(zhi)控品應至少(shao)包括(kuo)3個(ge)水平:
①陰(yin)性質控品：待測物濃度(du)低(di)于最低(di)檢測限或為零濃度(du)，陰(yin)性檢出率應為100%（n≥20）。
②臨界陽性質控品：待測(ce)物濃度略高于試(shi)劑盒的最低檢測(ce)限，陽性檢出(chu)率(lv)應高于95%（n≥20）。
③陽性(xing)質控(kong)品：待測物濃度呈中度到(dao)強陽性(xing)，陽性(xing)檢出率為100%且CV≤10%（n≥20）。
另外，建議申請人選擇適量(liang)臨床(chuang)采集的新鮮(xian)病(bing)人樣本(ben)（包(bao)括所有樣本(ben)類型）作為(wei)無靶值(zhi)質控品進行精密度評(ping)價，以更好地(di)模仿臨床(chuang)檢測環境(jing)。
5.陽性/陰性參考品
如申報產(chan)品(pin)(pin)(pin)有相應(ying)的(de)國(guo)家參(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)，則企業內部(bu)陽性(xing)(xing)(xing)/陰(yin)性(xing)(xing)(xing)參(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)應(ying)參(can)考(kao)國(guo)家參(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)的(de)項目(mu)設置(zhi)(zhi)。在不低(di)于國(guo)家參(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)要(yao)求的(de)前提下，申請(qing)人(ren)可以(yi)結(jie)合實際情況設置(zhi)(zhi)合理的(de)企業內部(bu)陽性(xing)(xing)(xing)/陰(yin)性(xing)(xing)(xing)參(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)。對于沒有國(guo)家參(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)的(de)產(chan)品(pin)(pin)(pin)，申請(qing)人(ren)應(ying)根據產(chan)品(pin)(pin)(pin)性(xing)(xing)(xing)能(neng)驗(yan)證(zheng)的(de)實際情況自行(xing)設定(ding)企業內部(bu)參(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)，陽性(xing)(xing)(xing)參(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)應(ying)著(zhu)重考(kao)慮病毒型(xing)別、亞型(xing)及滴度(du)要(yao)求，陰(yin)性(xing)(xing)(xing)參(can)考(kao)品(pin)(pin)(pin)則主要(yao)涉及對分析特異性(xing)(xing)(xing)（交叉反應(ying)）的(de)驗(yan)證(zheng)情況。
申請人應對內(nei)部陽性/陰性參(can)考品的(de)來源、型(xing)別鑒定、病毒(du)滴度等信息(xi)進行精確的(de)實驗驗證(zheng)，并提交詳細的(de)驗證(zheng)資料。
6.其他需注意問題
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